李天鹤
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省博士后科研启动基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 抗人IL-1β单链抗体的构建及其中和活性的检测被引量：2
- 2013年
- 目的:原核表达抗人IL-1β(hIL-1β)的scFv,并对纯化后抗体的特异性、亲和力以及中和活性进行检测,为研制治疗类风湿关节炎的小分子抗体药物奠定基础。方法:使用PCR方法从含有抗hIL-1β抗体基因的质粒中获得抗hIL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达载体pET-27b-A-hIL-1β-scFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta后诱导表达,经包涵体变性、复性得到可溶的抗hIL-1βscFv蛋白。利用高效液相色谱仪对其纯度进行分析后使用Western blot和ELISA方法测定scFv抗体对抗原特异性结合能力和亲和力,使用MTT的方法检测scFv抗体中和人IL-1β蛋白的能力。结果:成功地对抗hIL-1β单链抗体进行构建、诱导、表达和纯化。得到纯度为72.05%、相对分子质量约为28 ku的目的蛋白。ELISA和Western blot结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。MTT实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断hIL-1β刺激L929细胞的增殖。结论:通过原核表达系统得到的抗hIL-1β单链抗体,纯化后,鉴定其与hIL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和hIL-1β的活性,为进一步研究治疗RA的小分子抗体奠定了基础。
- 李天鹤任桂萍徐黎明周兵郭茉齐剑英张宇赵景壮于引航尹杰超李德山
- 关键词：单链抗体包涵体复性中和活性MTT
- 抗IBDV鸡源重组抗体的构建及生物活性鉴定
- 尹杰超张瑛杰李天鹤周兵郭笑辰李德山
- 具有中和活性的抗人IL-1β单链抗体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建抗人IL-1β单链抗体(anti-hIL-1βscFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行生物学活性检测。方法使用PCR的方法从含有抗人IL-1β抗体基因的质粒中获得抗人IL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b中,构建重组表达载体pET-27b-hIL-1βscFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后诱导表达,经凝胶过滤色谱柱上复性得到可溶的抗人IL-1β的scFv蛋白。使用ELISA方法鉴定scFv抗体的特异性结合活性,使用Real time-PCR的方法检测scFv抗体的中和活性。结果成功地对抗人IL-1β单链抗体进行诱导、表达和复性,蛋白相对分子质量约为28 000。ELISA结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。Real time-PCR实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断人IL-1β刺激人T细胞表达细胞因子IL-18及IL-1β的作用。结论通过原核表达系统得到的抗人IL-1β单链抗体经复性后,与人IL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和活性,为进一步研究人IL-1β相关疾病及其治疗性抗体奠定了基础。
- 李宁徐黎明李天鹤任桂萍陈睿张宇阚方明叶贤龙谷学佳丁良君李德山
- 关键词：IL-1Β单链抗体包涵体复性中和活性
- 抗IBDV鸡源重组抗体治疗鸡传染性法氏囊病
- 建立稳定表达抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)鸡源重组全长抗体的细胞系,将其表达的抗IBDV鸡源重组全长抗体应用在治疗鸡传染性法氏囊病(IBD)中.将构建的鸡源重组全长抗体的真核表达质粒转染到哺乳动物细胞CHO-K1-SV...
- 郭笑辰张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞任桂萍李德山
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 抗IBDV鸡源重组抗体治疗鸡传染性法氏囊病
- 建立稳定表达抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)鸡源重组全长抗体的细胞系,将其表达的抗IBDV鸡源重组全长抗体应用在治疗鸡传染性法氏囊病(IBD)中。将构建的鸡源重组全长抗体的真核表达质粒转染到哺乳动物细胞CHO-K1-SV...
- 郭笑辰张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞任桂萍李德山
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用
- 本发明公布了两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用。发明提供了两种单链抗体（即scFv抗体），scFv抗体具有与IBDV结构蛋白2（VP2）蛋白及多种IBDV毒株特异性结合的能力，可...
- 尹杰超周兵李天鹤李德山张瑛杰张立夏
- 文献传递
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒单链抗体库的构建及其中和抗体的筛选被引量：4
- 2014年
- 为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的细菌展示单链抗体（scFv）库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv。本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA，采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列，插入含有（Gly4Ser）3 linker的pTlinker载体中，再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中。以FITC标记的VP2 蛋白为诱饵，通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv，其氨基酸同源性为82.16 %～87.27 %。将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b（＋）中，构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv。将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达，该5株scFv相对分子质量均约为28 ku。此外，利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体，检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力。而且通过体外中和试验结果表明，仅有一株scFv具有病毒中和活性，可以有效阻断IBDV（B87 株）对鸡胚成纤维细胞（DF1）的感染。该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础。
- 周兵李天鹤李宁徐黎明郭茉马蕾张瑛杰叶贤龙赵景壮衣春霖韩晓辉丁良君李德山
- 关键词：IBDV单链抗体中和活性
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒抗体Fab的表达及其中和活性的测定被引量：1
- 2015年
- 为表达抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体Fab并检测其中和活性,本研究将抗IBDV抗体的轻链(L)和重链片段(Fd)基因分别克隆于p ET-27b(+)载体中,并转化于大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达。将L和Fd片段包涵体蛋白变性后等量混合于复性液中,制备Fab并对其进行活性鉴定。结果显示L和Fd蛋白相对分子质量大小分别为25 ku和28 ku。Western blot和ELISA检测结果表明,获得的抗体Fab大小约为50 ku,并且与VP2蛋白和不同病毒株均具有特异性结合能力。体外中和试验结果表明,获得的IBDV抗体Fab具有中和活性,可以有效阻断IBDV(B87株)对鸡胚成纤维细胞(DF1)的感染。本实验获得的IBDV抗体Fab有望成为治疗IBD的候选生物制剂,为研制治疗IBD抗体制剂奠定了基础。
- 张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞荆燕任桂萍李德山
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒FAB抗体中和活性治疗性抗体
