武晓林
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：浙江农林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置及应用
- 本发明涉及生物工程领域，旨在提供一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置及应用。该装置的主体结构是一张印刷电路板，印刷电路板上布设若干个完全相同的紫外发光二极管，各二极管和辅助电子元件通过印刷电路板实现连接；每个二极管的发射...
- 宋厚辉方维焕金佩华武晓林黄丽桂海娈
- 文献传递
- 结核分枝杆菌同源重组基因敲除系统的构建和应用被引量：6
- 2012年
- 【目的】结核分枝杆菌同源重组效率很低,突变株的构建需要半年之久。本研究的目的在于构建一种用于在结核分枝杆菌中进行基因快速敲除、且易于筛选的高效同源重组系统。【方法】野生型结核分枝杆菌转化含有SacB反向选择标记、且能诱导表达两种同源重组酶gp60和gp61的质粒pSL002。然后分别将靶基因的两个同源臂克隆入到含有hyg(潮霉素)抗性基因和gfp(绿色荧光蛋白)基因的重组质粒pSL001中,再将靶基因同源臂-loxP-hyg-gfp-loxP片段从pSL001切下,转化含有pSL002的野生型结核分枝杆菌,一步得到双交换突变株。再将含有SacB反向选择标记、且表达Cre重组酶的质粒pSL003转化入结核分枝杆菌双交换突变株中,切除两个loxP之间的hyg抗性基因和gfp基因,得到无痕缺失突变株。最后利用含有2%蔗糖的琼脂糖平板去除含有SacB反向选择标记的质粒pSL002和pSL003。【结果】在结核分枝杆菌中成功构建了高效同源重组系统,利用该系统构建了rv1364c、pstP跨膜区、pstP胞外区三个突变株,得到双交换突变株的效率为25%-62.5%,从双交换突变株得到无痕缺失突变株的效率为100%。通过gfp作为荧光标记基因,利用NightSea BlueStar蓝光手电筒和滤光眼镜,可以对平板上的基因缺失株直接进行快速判定。【结论】该同源重组系统利用gp60和gp61重组酶,在时间上将在结核分枝杆菌中无痕缺失突变株的构建从6个月缩短到3个月。这是目前为止在结核分枝杆菌中构建突变株最快且效率最高的方法,为加速分枝杆菌功能基因组的研究提供了新的遗传工具。
- 武晓林方维焕俞盈宋厚辉
- 关键词：结核分枝杆菌同源重组基因敲除重组酶荧光标记
- 一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置及应用
- 本发明涉及生物工程领域，旨在提供一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置及应用。该装置的主体结构是一张印刷电路板，印刷电路板上布设若干个完全相同的紫外发光二极管，各二极管和辅助电子元件通过印刷电路板实现连接；每个二极管的发射...
- 宋厚辉方维焕金佩华武晓林黄丽桂海娈
- 文献传递
- 单核细胞增多性李斯特菌溶血素LLO的功能关键位点鉴定及表面展示系统的构建
- 单核细胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM），简称单增李斯特菌，是一种革兰氏阳性、食源性胞内病原菌。LM主要通过分选酶（Sortase）系统将含有LPXTG基序的蛋白锚定至胞壁并发挥相应功...
- 武晓林
- 关键词：同源重组
- 一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置
- 本实用新型涉及生物工程领域，旨在提供一种用于激活微生物体内光敏蛋白的装置。该装置的主体结构是一张印刷电路板，印刷电路板上布设若干个完全相同的紫外发光二极管，各二极管和辅助电子元件通过印刷电路板实现连接；每个二极管的发射波...
- 宋厚辉方维焕金佩华武晓林黄丽桂海娈
- 文献传递
