王晔
- 作品数：37 被引量：43H指数：3
- 供职机构：山东省眼科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- Reak—time PCR检测晶状体转录调控基因的表达
- 目的：通过 Real—time PCR 方法检测 Pax6(5a),Pax6, Proxl,Sox1与 Sox2在晶状体发育过程中起重要作用的转录调控基因在不同年龄的正常人晶状体中的表达情况。方法：收集临床上自然流产胎儿...
- 王晔黄钰森
- 文献传递
- 体外培养的人角膜内皮细胞更易衰老
- 周庆军王晔高彦史伟云谢立信
- 后囊膜混浊的体外上皮-间质转化模型的建立被引量：1
- 2016年
- 背景上皮一间质转化（EMT）是导致后囊膜混浊（PCO）的主要发病机制之一，研究LECs的EMT过程对PCO的防治具有重要意义，但目前缺乏研究EMT的PCO体外细胞模型。目的建立新的人晶状体囊外摘出术PCO的体外囊袋培养模型，探讨PCO形成过程中LECsEMT的发生情况。方法利用健康供体的40只尸眼行体外模拟的白内障摘出术，游离晶状体囊袋后用昆虫针固定于培养皿，置于含体积分数10％胎牛血清的DMEM／F12培养液中培养4周，分别于培养后0、3、7、14和28d在光学显微镜下观察培养囊袋中LECs的生长情况；收集0、3、7和28d的囊袋组织制备组织病理学切片，采用苏木精一伊红染色法检测囊袋上LECs的细胞形态；采用免疫组织化学染色法检测EMT标志物OL—SMA、E—cadherin和Vimentin蛋白在囊袋上LECs中的表达和定位；采用实时荧光定量PCR和Westernblot法检测不同时间点囊袋上LECs中a-SMA、E—cadherin和VimentinmRNA及其蛋白的表达变化。结果未进行培养的囊袋后囊膜上未发现LECs生长，囊袋培养后3d可见后囊膜周边出现LECs并逐渐向中央区增生，培养后7dLECs完全覆盖后囊膜，略呈铺路石样外观并出现皱褶，此后随着培养时间的延长皱褶的数量增多并伸长，囊袋张力增强。免疫组织化学染色结果显示，随培养时间的延长，囊袋上LECs中E—cadherin的表达强度逐渐下降，而a-SMA和Vimentin的表达强度逐渐增强。实时荧光定量PCR检测表明，培养后0、3、7、14和28d囊袋上LECs中E—cadherinmRNA的相对表达量分别为3．35±0．13、1．47±0．20、1．13±0．14、1．00±0．85和0．23±0．03，VimentinmRNA的相对表达量分别为1．00±0．73、1．05±0．14、2．24±0．43、2．84±0．34和8．570±0．40，d—SMAmRNA的相对表达量分别为1．00±0．06、2．68±0．28、4．24±0．05、2．05±0．90和15．30±0．19，总体比较差异均有统计学意义（E—c
- 杨宝霞王晔赵晓雯刘廷黄钰森
- 关键词：上皮-间质转化晶状体上皮细胞后发性白内障晶状体囊
- 一种miRNA及在制备后发性白内障诊疗制品中的应用
- 发明的目的是提供一种miRNA及在制备后发性白内障诊疗制品中的应用，所述的miRNA为miR-204-5p，其RNA序列为SEQ ID NO:1。该miRNA基因产物能够调节SMAD4基因的表达，阻断TGF-β／Smad...
- 黄钰森王晔赵晓雯
- 文献传递
- HIF-1α小干扰RNA抑制小鼠角膜新生血管的实验研究
- 银红梅陈鹏王晔史伟云谢立信
- 穿透性角膜移植术后慢性失功移植片的免疫学研究被引量：3
- 2009年
- 目的检测穿透性角膜移植术后慢性失功移植片的免疫与非免疫相关细胞因子表达的变化,探讨免疫与非免疫因素在角膜植片慢性失功中的作用机制。设计临床实验研究。研究对象分为两组,角膜植片慢性失功(CCAD)组:穿透性角膜移植(PK)术后因CCAD导致移植失败的8例患者的角膜植片;正常对照组:由山东眼库提供的正常角膜供体3只。方法免疫组化法检测两组角膜片免疫相关细胞因子表达,结合患者的临床资料进行综合分析。主要指标角膜中CD4^+、CD8^+、F4/ 80、TGF-β、bFGF、α-SMA的表达。结果免疫组化检测显示正常对照组:角膜各层组织CD4^+、CD8^+、α-SMA、bFGF表达阴性, F4/80角膜基质偶见表达,TGF-β在角膜上皮层有表达。CCAD组:所有角膜植片全层均未见CD4^+及CD8^+T淋巴细胞浸润;5例失功植片基质层F4/80阳性表达,其余3例角膜植片全层表达阴性;所有角膜植片上皮层可见TGF-β阳性表达,基质层内可见TGF-β表达。所有失功角膜片基质层bFGF表达呈弱阳性;所有患者角膜基质内α-SMA表达阳性,后弹力层附近可见较强表达。结论穿透性角膜移植术后慢性失功移植片免疫组化检查未发现支持临床急性免疫排斥反应的证据,抗原递呈细胞及非免疫特异相关细胞因子的异常表达提示免疫与非免疫因素参与了CCAD的发生和发展。
- 高华王晔谢立信
- 关键词：角膜植片慢性失功免疫因素非免疫因素
- 重叠区扩增基因拼接法定点突变TGFBI及其真核表达载体的构建
- 本实验主要利用基因拼接定点突变TGFBI124位精氨酸并构建其真核表达载体。通过脱臼处死正常五周龄Balb/c鼠，取下角膜，提取总RNA，反转录为cDNA。根据需要突变位点来设计和合成突变引物，PCR合成TGFBI-WT...
- 牛静宜王晔陈鹏王宜强
- 关键词：定点突变真核表达载体
- p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil在不同年龄人角膜内皮细胞中的表达及其意义
- 2013年
- 背景p16^INK4a基因在细胞老化和早衰过程中发挥着重要作用，是目前已知的细胞衰老的主导基因。角膜内皮细胞（CECs）周期停滞于G。期且体内缺乏增生能力，是否与细胞衰老有关尚未得知。目的探讨不同年龄的正常人CECs中p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil的表达。方法收集临床上DX液保存的行角膜移植手术后剩余的供体周边环状角膜组织，记录供体年龄。经锥虫蓝一茜素红双染法观察CECs的活性；行苏木精一伊红染色以证实角膜材料的组织结构正常。将收集到的角膜环材料按照年龄分为〈30岁组、30～50岁组和〉50岁组，每组30个角膜环，其中15个用于总RNA提取，另外15个角膜环等分为3份，分别用于免疫组织化学检测、免疫荧光检测和CECs活性的观察。提取每个角膜环的总RNA，行实时荧光定量PCR检测，观察p16^INK4amRNA、BmilmRNA和Ki67mRNA在CECs中的表达。行冰冻切片免疫组织化学染色，检测p16^INK4a、Bmil和Ki67蛋白在CECs中的表达。免疫荧光法检测p16”“。在CECs的表达。结果苏木精一伊红染色结果显示，供体角膜上皮、基质和内皮结构完整，排列规则。实时荧光定量PCR检测显示随年龄增长，p16^INK4a。mRNA的表达增强，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达减弱，差异均有统计学意义（F=5．703，P=0．014；F=3．950，P=0．042；F=548．500，P=0．000），其中与〈30岁组比较，〉50岁组p16^INK4amRNA在CECs中的表达量明显升高，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达均明显降低，差异均有统计学意义（P=0．006、0．013、0．000）。免疫组织化学结果可见，p16^INK4a。蛋白在各组CECs中均有表达，主要位于细胞核内，而Bmil与Ki67在年老供体的表达强度均弱于年轻供体，与实时荧光定量PCR的结果基本一致。免疫荧光染色显示，年老供体CECs p16^INK4a的表达强度强于年轻供体。结论细胞衰老主导基因p16^INK4a的表达随�
- 臧新杰王晔
- 关键词：角膜内皮细胞衰老P16^INK4A基因
- 小鼠角膜损伤修复过程中基因表达谱的变化
- ＜正＞目的:探讨小鼠角膜损伤修复过程中基因表达谱的变化。方法:三棱针穿刺小鼠角膜,制作角膜损伤修复和瘢痕愈合的动物模型。收获伤后3d和14d的角膜,以未受伤角膜为对照,进行芯片杂交实验。Bayesian调节性t检验分析差...
- 李岚赵靖王晔谢立信
- 文献传递
- 血管能抑素基因转移抑制视网膜新生血管的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的 观察血管能抑素真核表达质粒（pCMV-HA）对小鼠视网膜新生血管RNV形成的抑制作用.方法 将鼠龄为7 d的56只C57BL/6J新生小鼠随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、治疗组和空载体组,每组14只.后3组小鼠置于（75±2）%浓度的氧环境中饲养5 d后,回到正常空气环境中建立氧诱导的RNV动物模型.治疗组小鼠在出生后第12天出氧箱时行玻璃体腔注射血管能抑素pCMV-HA,空载体组注射等量空质粒.出生后第17天行伊凡思蓝（Evans blue）灌注血管造影视网膜铺片观察血管变化.石蜡切片行苏木精-伊红染色,光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数.结果 视网膜铺片结果显示,治疗组较OIR模型组和空载体组视网膜血管分布均匀,新生血管和无灌注区显著减少.治疗组突破内界膜的内皮细胞核数与OIR模型组及空载体组比较,差异有统计学意义（F=39.006,P〈0.001）.结论 血管能抑素pCMV-HA对氧诱导的RNV有显著的抑制作用.
- 孟丽娜董晓光王晔刘廷张珊珊
- 关键词：细胞因子类基因转移技术
