董玉金
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：淄博市中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 宫颈癌组织PVT1表达及其作用被引量：4
- 2020年
- 目的中晚期宫颈癌患者因缺乏有效的治疗靶点而疗效较差,需从更深入的研究宫颈癌发病机制中寻找治疗靶点。有研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)在胃癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中高表达并参与肿瘤进程,起着类似癌基因的作用。本研究拟检测LncRNA PVT1在宫颈癌组织及细胞系中的表达,并观察其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法选取2015-08-30-2017-04-30在淄博市中心医院行手术切除的30例宫颈癌及相应癌旁新鲜组织(距癌组织>2cm)。采用RT-PCR检测癌及癌旁组织PVT1表达,并同时检测宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中PVT1表达;参考PVT1基因序列设计2个PVT1 siRNA序列:si-PVT1-1、si-PVT1-2,及无关序列对照siRNA(NC-siRNA)。利用Lipofectamine 2000转染试剂盒将si-PVT1-1、si-PVT1-2、NC-siRNA序列分别转染宫颈癌HeLa及SiHa细胞株。分别采用CCK-8实验及集落形成实验检测下调PVT1表达后宫颈癌HeLa及SiHa细胞的增殖能力变化;Transwell小室检测迁移和侵袭能力。结果 PVT1在30例宫颈癌组织和HeLa及SiHa细胞系中表达上调。与癌旁组织(0.062±0.015)相比,宫颈癌组织中PVT1(0.115±0.031)的表达上调,差异有统计学意义,t=3.92,P<0.05。HeLa和SiHa细胞中PVT1的相对表达量高于正常宫颈Ect1/E6E7细胞。转染PVT1siRNA后,宫颈癌HeLa及SiHa细胞的PVT1表达被抑制。CCK-8法显示与转染NC-siRNA序列组比较,宫颈癌细胞HeLa及SiHa转染PVT1 siRNA后增殖能力降低,F=112.608,P<0.001。转染si-PVT1-1(44.23±0.52)和NC-siRNA序列(115.38±1.21)的宫颈癌HeLa细胞集落形成数差异有统计学意义,F=126.328,P<0.001;转染si-PVT1-1(48.03±0.65)和NC-siRNA序列(121.15±1.51)的宫颈癌SiHa细胞集落形成数差异有统计学意义,F=118.245,P<0.001。Transwell检测结果示,和NC-siRNA组相比较si-PVT1-1组HeLa细胞迁移能力降低为0.50±0.03,侵袭能力降低为0.55±0.08,F
- 王速捷刘俊许波董玉金
- 关键词：SIRNART-PCR宫颈癌
- 沉默NCAPG表达抑制肺腺癌细胞增殖作用及相关机制
- 2022年
- 目的探讨肺腺癌细胞中非染色体结构维持蛋白复合体I G亚基(NCAPG)的表达对细胞增殖能力的影响及潜在的相关机制,为肺腺癌探索新的治疗靶点提供理论数据。方法采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测肺腺癌细胞中NCAPG表达,分别以siRNA序列及阴性对照转染肺腺癌A549细胞株。观察组细胞转染siRNA,对照组细胞转染对照序列。采用CCK-8实验、BrdU实验,克隆形成实验、Transwell小室法等体外实验检测2组细胞增殖、侵袭能力变化;体内实验检测裸鼠皮下移植瘤增殖能力影响;进一步采用流式细胞术、蛋白质印迹法检测细胞周期及相关蛋白的表达。结果NCAPG在肺腺癌细胞株中高表达。沉默NCAPG表达后肺腺癌细胞NCAPG表达在mRNA及蛋白水平均降低。CCK-8实验及BrdU实验结果显示观察组细胞活性及增殖能力降低,F=82.105,P=0.001;克隆形成实验结果:观察组细胞形成菌落数为113.26±10.37,对照组为809.63±19.45,差异有统计学意义,F=112.762,P<0.001;Transwell实验结果显示:观察组细胞组侵入到下室的阳性细胞数为115.63±18.42,对照组为582.42±21.17,差异有统计学意义,F=97.347,P<0.001。体内实验显示注入转染siNCAPG的A549细胞组裸鼠皮下移植肿瘤增长减慢、体积及质量均减小;流式细胞术检测到观察组细胞G1期比例为(70.80±0.23)%,对照组为(56.40±0.41)%,差异有统计学意义,F=58.625,P=0.032;观察组细胞周期蛋白cyclinD1及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、CDK6的表达下调,而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21和p27表达上调。结论沉默NCAPG表达可能通过调控cyclin-CDK-CKI网络阻滞肺腺癌细胞周期由G1期向S期转化,进而抑制肿瘤细胞增殖、侵袭、致瘤能力。其可能成为肺腺癌治疗新的靶点。
- 孙玲艳孟兰霞张雨岑董玉金
- 关键词：小干扰核糖核酸A549细胞
- LyGDI真核表达载体构建及稳定转染A549细胞株的建立被引量：2
- 2009年
- 目的构建Rho蛋白鸟苷解离抑制因子(LyGDI)真核表达载体并建立稳定转染A549细胞株。方法PCR扩增LyGDI基因片段,构建pEGFP-C1-LyGDI真核表达载体,经酶切、PCR、测序验证其正确性。脂质体法转染真核细胞A549,G418筛选建立稳定转染的细胞株,RT-PCR、免疫印迹检测稳定转染的细胞株。结果构建了真核表达载体并建立了稳定转染的A549细胞株,成功表达LyGDI蛋白。结论LyGDI真核表达载体成功构建及稳定转染A549细胞株的建立,为研究LyGDI过度表达对肿瘤侵袭性和转移的影响奠定了实验基础。
- 董玉金吴纪霞王兴丹曹丽丽韩琴芳周新文
- 关键词：LYGDI真核表达载体稳定转染
- 人肺癌组织中鸟苷酸解离抑制因子-2的表达和意义被引量：2
- 2009年
- 目的研究鸟苷酸解离抑制因子-2(LyGDI)在肺癌组织中的表达及临床意义。方法用蛋白免疫印迹法(WB)和免疫组织化学法检测分析肺癌、癌旁组织和正常肺组织中的LyGDI蛋白表达。结果46份配对组织标本中,LyGDI在35份肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织和正常组织,11份表达差异不明显[R=76.1%(有差异例数/总例数)];肺癌组织中的SCLC与NSCLC表达差异无统计学意义(P>0.05)。在SCLC中,鳞癌与腺癌也没有显著差异,而淋巴结转移组织差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌组织中LyGDI蛋白的表达与淋巴结转移存在相关性,与临床病理类型无相关性。LyGDI可能与肺癌的发生、发展有关。
- 吴纪霞董玉金王兴丹陈雪松曹丽丽韩琴芳周新文
- 关键词：LYGDI蛋白表达肺癌
- LyGDI在肺癌组织中的表达及临床意义被引量：3
- 2009年
- 目的研究LyGDI在肺癌组织中的表达及临床意义。方法用免疫蛋白印迹法分析肺癌及癌旁正常组织中LyGDI蛋白的表达情况。结果37份配对组织标本中,LyGDI在29份肺癌组织中的表达明显高于其相应的癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织中的小细胞癌(SCLC)与非小细胞癌(NSCLC)LyGDI表达的差异无统计学意义(P>0.05)。在NSCLC中,LyGDI的表达与分化程度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)有关,与性别(P>0.05)、年龄(P>0.05)、组织学分类(P>0.05)、分期(P>0.05)无关。结论肺癌组织中LyGDI蛋白的表达与组织分化程度及淋巴结转移存在相关性,与临床病理类型无相关性。LyGDI可能与肺癌的发生、发展有关。
- 吴纪霞董玉金王兴丹陈雪松曹丽丽韩琴芳周新文
- 关键词：LYGDI免疫蛋白印迹肺癌
- LyGDI在肿瘤细胞辐射凋亡敏感性中的作用与P53调控研究
- 目的:构建lyGDI及△N19lyGDI的带有荧光标记的真核表达载体并分析外源性表达lyGDI及△N19lyGDI对辐射诱导细胞凋亡和细胞放射敏感性的影响并分析其机制;研究恢复细胞P53蛋白表达对细胞辐射诱导凋亡及LyG...
- 董玉金
- 关键词：真核表达载体细胞凋亡P53LYGDI
- 文献传递
- 肺癌组织中LyGDI基因的表达及其临床意义
- 2010年
- [目的]检测肺癌组织中LyGDI的mRNA和蛋白表达水平及其与临床参数的关系。[方法]运用逆转录—聚合酶链反应技术(RT-PCR)和Western blot免疫蛋白印迹法检测39例肺癌组织及其癌旁组织和正常肺组织中LyGD的mRNA和蛋白表达水平,并分析其与临床病理参数的关系。[结果]RT-PCR结果显示75.7%(28/37)肺癌组织中LyGDI的mRNA和蛋白表达水平显著高于癌旁肺组织。表达量的差异有统计学意义。在癌旁组织与正常肺组织表达接近。免疫蛋白印迹法检测结果与RT-PCR一致。[结论]LyGDI在肺癌组织中的高表达可能是肿瘤发生过程中的一个重要因素,其表达的蛋白产物可作为临床上肺癌诊断和治疗的一个重要指标。
- 吴纪霞董玉金秦华龙王兴丹曹丽丽韩秦芳周新文
- 关键词：肺癌RT-PCRWESTERNBLOTLYGDI
- 非编码长链RNA PVT1和miR-424拮抗调控宫颈癌细胞增殖和侵袭的机制研究被引量：1
- 2022年
- 目的 探讨宫颈癌HeLa细胞增殖及侵袭过程中长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对miR-424的调控作用,揭示LncRNA PVT1在宫颈癌进程中发挥作用的潜在机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和癌旁组织miR-424表达,分别用miR-424 inhibitor、miR-424 mimics和PVT1 siRNA共转染宫颈癌HeLa细胞。实验组细胞采用miR-424 inhibitor和PVT1 siRNA共转染,对照组细胞采用miR-424 mimics和PVT1 siRNA共转染,转染非靶向序列质粒的细胞作为阴性对照。采用细胞计数盒8(CCK8)法、克隆形成实验检测各组细胞增殖及生长能力变化,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果 宫颈癌组织和癌旁组织miR-424相对表达量分别为0.039±0.022和0.092±0.030,差异有统计学意义,t=4.82,P=0.032。Pearson相关性分析表明,宫颈癌组织中PVT1与miR-424成负相关,R~2=0.587,P=0.047。对照组宫颈癌细胞的增殖、生长能力降低,迁移和侵袭能力减弱;实验组细胞增殖能力增强(F=82.281,P=0.021),克隆形成能力增强,t=4.57,P=0.040。对照组迁移能力和侵袭能力差异倍数分别为实验组的0.55±0.16和0.48±0.08,提示实验组细胞迁移能力及侵袭能力增强,F=29.361,P=0.038。结论 抑制miR-424表达可以恢复PVT1 siRNA导致的宫颈癌细胞HeLa增殖及侵袭抑制作用,PVT1可能通过沉默miR-424表达在宫颈癌进程中发挥促癌作用。这可能为宫颈癌提供新的治疗靶点。
- 许波孟兰霞朱凤雯董玉金
- 关键词：SIRNA宫颈癌HELA细胞
- LyGDI对肺癌A549细胞放射敏感性影响的观察被引量：1
- 2012年
- 目的:研究X射线对稳定转染鸟苷解离抑制因子(LyGDI)A549细胞株放射敏感性的影响及相关机制。方法:应用生长曲线观察细胞增殖能力,流式细胞术检测不同剂量照射后转染组和对照组细胞的周期分布及凋亡率,克隆形成试验观察转染组细胞放射敏感性。结果:转染组细胞相对于对照组增殖能力减弱,F=212.55,P<0.01;克隆形成能力减弱,放射敏感性增加,F=7.56,P<0.05;流式细胞术检测到辐射诱导凋亡增加,F=18.45,P<0.01;细胞周期检测提示转染组G2期阻滞受抑制,F=6.29,P<0.05。结论:过度表达的LyGDI上调A549细胞放射敏感性,其可能机制为抑制G2期阻滞促进凋亡。
- 董玉金吴纪霞周新文
- 关键词：细胞周期辐射耐受性
- LyGD1基因转染对肺腺癌A549细胞生长及放化疗敏感性的影响
- 2011年
- 目的研究转染LyGDI基因对肺腺癌A549细胞生长及放、化疗敏感性的影响。方法用脂质体介导的方法,将构建于pEGFP载体上的LyGDI及空载体pEGFP-C1转入A549细胞,用G418筛选出稳定表达株,RT-PCR法了解LyGDI基因在转染细胞中的表达情况;用平板克隆形成实验研究细胞生长情况;体外划痕试验观察对细胞侵袭及转移能力的影响;甲基偶氮唑蓝法、克隆形成实验分别研究细胞对放、化疗的敏感性。结果转染细胞中有相应融合基因表达;与转染前比较,基因转染后,阳性细胞尤其是表达LyGDI的A549细胞克隆形成能力显著降低(P<0.01),对常用化疗药物顺铂和放射线敏感度显著提高(P<0.05或<0.01)。结论建立了稳定转染细胞株;LyGDI转入抑制了A549细胞的生长能力,且增加了细胞对放、化疗的敏感性。
- 曹丽丽段广新董玉金王兴丹周新文
- 关键词：LYGDI稳定转染细胞生长化疗敏感性放疗敏感性
