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覃鸿妮: 作品数：35 被引量：160H指数：7; 供职机构：苏州工业园区服务外包职业学院更多>>; 发文基金：重庆市重大科技专项中央高校基本科研业务费专项资金高等学校学科创新引智计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>

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慢病毒载体介导稳定表达Cas9基因的293T细胞系构建及其基因编辑效率验证被引量：1: 2020年; 为通过慢病毒感染细胞构建稳定表达CRISPR/Cas9的293T细胞系,实现高效率基因编辑,PCR扩增Cas9基因片段,酶切后克隆到慢病毒载体pLent-EF1a-MF-CMV-GFP-P2A-Puro上,将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共感染293FT细胞,48 h后收集病毒并浓缩纯化测定其病毒滴度,最后用纯化后的病毒感染293T细胞,通过抗性和荧光标记筛选得到稳定表达Cas9的细胞系,并对单克隆细胞进行DNA、RNA特异性和反转录验证。针对ABCG4基因设计sgRNA并构建重组载体感染单克隆细胞,通过DNA特异性和T7E1酶切验证基因敲除效率。结果表明:成功构建了Cas9-pLent慢病毒载体,用构建成功的慢病毒载体对293FT细胞进行慢病毒包装(三质粒系统)并对包装成功的病毒进行了浓缩与纯化,最后通过病毒感染293T细胞,采用荧光观察的方式测定其病毒滴度均在106 TU·mL-1之上。用纯化后的病毒感染293T细胞并通过加药(Puro)进行抗性筛选,筛选出3株能稳定表达Cas9的293T细胞系,目的基因ABCG4的基因编辑功能验证表明其中1株T7E1酶切掉带明显,sgRNA靶向敲除效率较高,该株命名为Cas9-293T-10A。该研究建立了稳定表达Cas9的293T细胞系,可用于目的基因的高效敲除。; 覃鸿妮谢钰珍杨晨晨张勇; 关键词：慢病毒载体细胞系

基于校企双主体培养模式下高职院校《生物化学技术》课程改革与实践: 2022年; 基于校企双主体育人,依托生物医药产业园内的产业集群设置专业群,与业内龙头和成长型企业共建生物医药产业学院和,从重构教学内容、调整教学过程、健全课程考核体系三方面入手,研究校、企双主体育人模式下的《生物化学》课程的教学改革与实践,实现“合作育人,融合发展”,提升高技能人才培养的质量。本文就此展开了相关内容的探究。; 胡海艳覃鸿妮关炜佳罗凯薛高旭; 关键词：双主体生物化学实践教学课程改革

密度对不同株型玉米产量及主要农艺性状的影响被引量：10: 2012年; 该试验选取平展型长玉13、半紧凑型东单60和紧凑型郑单958等3种株型玉米为试材,分别在39 000,48 000,57 000株/hm2等3个密度下种植,分析了种植密度对不同株型玉米籽粒产量、穗粒性状和植株性状的影响.结果表明:3个品种的玉米产量随种植密度的增加而增加,且半紧凑型东单60产量最高;随种植密度的增加,行粒数、穗长、穗粗、轴粗、穗位叶面积和千粒质量呈下降趋势;株高、穗位高和雄穗分枝数呈上升趋势;各性状受株型与密度的互作影响不大.因此,在重庆提高玉米单产的关键是选取优良的丰产品种,并合理密植.; 郭莹覃鸿妮蔡一林; 关键词：玉米株型农艺性状

利用CRISPR/Cpf1系统构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的293T细胞株被引量：1: 2019年; 【目的】基于CRISPR/Cpf1(AsCpf1/LbCpf1)技术构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的人胚肾细胞(HEK293T)稳定细胞株,旨在研究ABCG1和ABCG4基因的生物学功能。【方法】针对ABCG1和ABCG4基因作用的功能域,设计2对靶向ABCG1和ABCG4基因前7个外显子的sgRNA序列,分别克隆到AsCpf1和LbCpf1的载体上。将测序验证正确的重组质粒转染到HEK293T细胞中,T7E1酶切和测序验证敲除效率,对敲除成功的293T细胞利用有限稀释法筛选获得基因双突变的敲除细胞株,对其基因组进行PCR扩增并双向测序验证编辑结果,选择有正确编辑结果的PCR产物进行TA克隆,进而测序验证单克隆细胞株编辑效率。【结果】结果获得敲除ABCG1和ABCG4基因的稳定细胞株各1株(AsCpf1-ABCG1-sgRNA 1-1和LbCpf1-ABCG4-sgRNA 2-1)。【结论】通过利用新型基因编辑技术CRISPR/Cpf1系统,获得了永久性敲除目的细胞靶基因的细胞株,可为进一步探索和证实ABCG1和ABCG4在细胞中胆固醇代谢和调节作用提供帮助。; 覃鸿妮谢钰珍马傲蔡一林; 关键词：ABCG1 基因敲除

玉米基因型磷效率及其相关生理性状的回归模型和主成分分析被引量：1: 2008年; 以9个玉米基因型为材料,在低磷和高磷两个供磷水平下,研究玉米基因型磷效率及其相关的9个生理性状的线性回归模型并进行主成分分析,结果表明:玉米基因型的抗氰呼吸速率、根系分泌相对酸性磷酸酶和相对总氨基酸、叶片相对脯氨酸含量、叶片相对丙二醛含量、活性氧清除酶相对超氧化物歧化酶和相对过氧化氢酶对磷效率的偏回归系数均显著,建立根据抗氰呼吸速率、根系分泌相对酸性磷酸酶和相对总氨基酸、叶片相对脯氨酸含量、叶片相对丙二醛含量、活性氧清除酶相对超氧化物歧化酶和相对过氧化氢酶影响磷效率(Y)的最优线性回归方程为Y=0·1780581257+0·10129842149 X1-0·3195810288 X2+0·06065530534 X4+0·04805907659 X5+0·07238583467 X6+0·10995461097 X7+0·08493395529 X9,(P<0·01;R2=0·99989);应用主成分分析法,利用性状的累计贡献率%达到86·58%,确定3个反映玉米基因型磷效率的主成分及其主成分表达式,分析表明玉米基因型磷效率高低是由抗氰呼吸速率、根系分泌物、叶片脯氨酸和丙二醛含量以及叶片活性氧清除酶活性共同协调作用的,与最优线性回归模型得出的结论一致。; 陈俊意蔡一林张文龙王国强代国丽覃鸿妮徐军况守峰; 关键词：玉米基因型磷效率生理性状主成分分析

CA-NHEJ系统对大肠杆菌链霉素耐药基因rpsL的编辑效率及其耐药性研究: 2023年; 以控制质粒拷贝数的pcnB基因与链霉素耐药性rpsL基因为靶标基因,研究CA-NHEJ系统对大肠杆菌的基因编辑效率,及rpsL相关基因与链霉素耐药性的关系。通过CA-NHEJ系统成功实现了对大肠杆菌MG1655的pcnB和rpsL基因编辑,其中,pcnB基因编辑效率达100%,rpsL基因仅有1个克隆缺失第22~24位3个氨基酸,其他4个克隆未编辑成功但具有链霉素抗性;进一步利用CA-HR系统敲除大肠杆菌MG1655的rpsL基因CCTGCGCTG序列(第22~24位氨基酸),编辑效率达100%,验证了CA-HR的高效性,抗性鉴定表明,该序列是影响链霉素抗性的关键序列,是一个未曾报道的新突变;对于未编辑成功但具有链霉素抗性的4个克隆进行基因测序及比对,找出了rhsC和gadB等6个可能与链霉素抗性相关的其他基因。; 谢钰珍覃鸿妮吴凡胡杨晓然薛高旭赵雪张勇; 关键词：RPSL基因耐药性

限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达被引量：1: 2016年; 在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成899bp的MluⅠ基因和1 312bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体pet30a上,重组表达载体构成pet30a-MluⅠ,将M.MluⅠ基因连接到表达载体PUC19上,重组表达载体构成PUC19-M.MluⅠ.测序结果显示,载体构建成功后利用体外重组转化技术,将pet30a-MluⅠ和PUC19-M.MluⅠ转入T7expression E.coli表达菌株中.重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现限制性内切酶MluⅠ成功表达.该酶的成功表达不仅为后续研究提供了材料,而且为实验室制备限制性内切酶在方法上开辟了新的途径,为更多新发现的内切酶基因的成功克隆提供了参考.; 覃鸿妮钱莉春沈晓燕梅啸; 关键词：限制性内切酶基因克隆基因表达

利用CRISPR/Cas9技术构建能克隆难度序列的Stbl2^(TM)菌株: 2022年; Stbl2^(TM)菌株适合克隆不稳定的外源DNA片段,但该菌株易受噬菌体侵染,且在构建某些高拷贝质粒时,难以克隆成功。利用CRISPR/Cas9技术将Stbl2^(TM)菌株的抗噬菌体相关基因fhuA和控制拷贝数的基因pcnB进行编辑,降低克隆难度,提高克隆效率。针对2个基因分别设计sgRNA,构建含有sgRNA的质粒pTarget-fhuA和pTarget-pcnB,分别将2个质粒与pCas9-Red质粒转入Stbl2^(TM)菌株中,经菌落PCR和测序验证基因正确编辑后再将2个外源质粒消除,并将2 kb的线粒体基因组序列作为外源基因,转入菌株进行最终的功能验证。结果表明:fhuA基因被成功敲除103 bp,pcnB基因被成功敲除802 bp,将高拷贝pUC57质粒转入基因编辑后的Stbl2^(TM)菌株,可明显降低质粒的拷贝数,且能正确克隆线粒体基因难度序列。该研究构建的菌株可作为后续克隆难度序列的感受态使用,还可为难度序列的基因克隆提供借鉴方法。; 覃鸿妮谢亦潇汤淑伟薛高旭谢悦张勇

正交试验优化黑玉米籽粒中花色苷的提取被引量：5: 2013年; 以西南大学新创的全黑玉米自交系SDM(super dark maize)为材料,以提高花色苷得率和纯度为目的,采用正交试验研究乙醇体积分数、固液比、提取液pH值、提取时间、提取温度5个提取条件对籽粒中花色苷得率和纯度的影响。结果表明:在90%的乙醇、固液比1:15(g/mL)、pH1、80℃保温15h的条件下,花色苷得率最高,但纯度最低,此条件下的纯度衡量指标A550nm/A275nm为0.10,得率为18.71%;在保证花色苷纯度较高的前提下,考虑最高得率,最优提取条件为:90%的乙醇、固液比1:15、pH1.5、70℃保温15h。; 王旭覃鸿妮袁文娟王久光王国强刘志斋蔡一林; 关键词：黑玉米

种植密度对不同株型玉米蔗糖代谢和淀粉合成相关酶活性的影响被引量：17: 2010年; 试验选取平展型玉米"长玉13"、半紧凑型玉米"东单60"和紧凑型玉米"郑单958"为材料,分别在2600株·667m-2、3200株·667m-2、3800株·667m-23种密度下种植,探讨种植密度对不同株型玉米灌浆过程中功能叶蔗糖代谢和籽粒淀粉合成相关酶活性的影响。结果表明,种植密度对功能叶片蔗糖含量、磷酸蔗糖合成酶和蔗糖合成酶活性影响较大,高密度不利于功能叶片中蔗糖的合成,低密度有利于蔗糖积累;而籽粒中的淀粉合成相关酶——ADPG焦磷酸化酶和UDPG焦磷酸化酶活性受种植密度影响较小;平展型"长玉13"和紧凑型"郑单958"是源端限制型品种,而半紧凑型"东单60"是库端限制型品种;种植密度对不同株型玉米品种的影响程度有差异,对平展型"长玉13"影响最大,而对紧凑型"郑单958"影响最小。; 覃鸿妮蔡一林孙海燕王久光王国强刘志斋; 关键词：玉米株型种植密度蔗糖代谢淀粉合成酶活性

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