赵惠萍
- 作品数：21 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅医学院生殖与干细胞工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 骨髓内皮细胞条件培养液诱导胚胎干细胞向造血细胞分化
- ＜正＞ 目前,诱导胚胎干细胞（ES细胞）向造血细胞分化主要应用小鼠成纤维细胞系与ES细胞共培养的方法。本课题探讨利用骨髓内皮细胞条件培养液（mBMEC-CM）诱导小鼠E5细胞向造血细胞分化,以消除外源性细胞污染,为诱导人...
- 赵惠萍卢光秀王绮如
- 文献传递
- 人类胚胎干细胞向造血细胞的自发分化被引量：3
- 2009年
- 目的研究人类胚胎干细胞自发向造血分化过程中造血干细胞和成熟血细胞标志出现时间,这将为胚胎干细胞定向诱导分化提供依据。方法将我所建立的人类胚胎干细胞系(chESC3)自发分化形成拟胚体,RT-PCR方法检测不同时间点造血相关基因KDR、Bmi1、Scl、gata2等的表达、流式细胞术检测6、8、10、12d造血干细胞标志CD34表达,并通过造血集落培养方法检测这些时间点造血集落形成能力,最后将拟胚体制备石蜡切片,免疫细胞化学检测10、12、15、18d CD45阳性阳性细胞数。结果造血干细胞早期基因KDR、Bmi1在hESCs中有表达,同时该基因随着拟胚体培养时间的延长,在第4～6天开始上调表达;造血干细胞标志性基因Scl,gata2在6～8d开始表达,并且维持高表达到12d。流式细胞术检测不同时间点hEBs中CD34阳性细胞数,发现其随时间的延长有增多的趋势,6、8、10、12d分别为(1.4±0.4)%、(3.4±1.3)%、(5.5±2.2)%、(5.1%±1.7)%;6、8、10、12d的拟胚体细胞进行集落培养检测形成的集落数在每105个拟胚体细胞中分别为0、7±2、37±11、89±29,P<0.01;集落细胞表达CD45,瑞士吉姆撒染色,可以检测到分叶核粒细胞;免疫细胞化学法对10、12、15、18d拟胚体进行切片染色,发现在这4d中可以明显观察到CD45阳性细胞的出现,并随时间的延长而数量增多,分别为:0、40.5±15.09、178.6±55.89、253.0±52.04,P<0.05。结论在自发向造血细胞分化的过程中经历了3个阶段:hESCs向胚层特异性细胞分化(前6～8d);造血干祖细胞扩增期(第8～12天);成熟血细胞大量出现期(15d以后)。
- 王建林戈赵惠萍卢光琇
- 关键词：造血干细胞胚胎干细胞分化
- 条件培养液诱导鼠胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞
- 为从鼠胚胎干细胞获得具有造血重建功能的造血干细胞,将 ES-D3细胞形成4天拟胚体 (4dEBs),再用骨髓内皮细胞条件培养液(mBMEC-CM)和/或胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM) 诱导4dEBs 生成造血干...
- 赵惠萍王绮如卢光琇
- 文献传递
- 人类胚胎干细胞向造血干细胞分化的微环境研究
- 2009年
- 目的探讨胎肝基质细胞和骨髓基质细胞在诱导胚胎干细胞向血液血管干细胞分化中的作用,分析基因表达差异。方法通过将分化4d的EBs分别接种到以下两组中:(1)胎肝基质细胞层+细胞因子;(2)骨髓基质细胞层+细胞因子;诱导结束后,流式细胞术检测各组中血液血管干细胞标志KDR阳性细胞数以及造血干细胞标志CD34阳性细胞数,计数细胞分化过程中形成的造血干细胞样的集落数,比较诱导分化效果;收集胎肝基质细胞和胚胎骨髓基质细胞,采用cDNA芯片分析基因表达差异。结果流式细胞术检测发现,两组中KDR+细胞的比例为分别为:(1.06±0.20)%、(8.8±1.49)%;CD34+细胞比例为分别为:(1.25±0.16)%、(9.19±2.10)%;血岛样集落数量分别为0.9±0.36、10.6±0.63;上述结果均以骨髓基质细胞联合细胞因子诱导方法效率最高。基因芯片(hBMSCs/hFLSCs)中总共有240条基因在骨髓基质细胞中高表达,397条基因的在肝脏基质细胞中高表达。对细胞因子、细胞黏附分子以及细胞外基质蛋白的基因加以分析,结果发现在hBMSCs高表达的相关的21条基因,推测可能与造血分化相关。结论人类胚胎干细胞向造血干细胞分化过程中,涉及到细胞与细胞之间的相互作用,相关的细胞因子、细胞黏附分子、细胞外基质蛋白等可能起重要的作用。
- 王建林戈赵惠萍卢光绣
- 关键词：胚胎干细胞造血干细胞基因表达
- 骨髓内皮细胞条件培养液促进胚胎干细胞的造血分化
- ＜正＞ 造血干细胞（Hematopoietic Stem Cell,HSC）具有自我更新和生成所有类型造血细胞的能力。体外诱导胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells,ES Cells）生成的造血干细胞,可用...
- 赵惠萍王绮如
- 文献传递
- 两种条件培养基促进鼠胚胎干细胞分化为造血干细胞(英文)被引量：2
- 2007年
- 目的:从鼠胚胎干细胞获得具有造血重建功能的造血干细胞。方法:将ES-D3细胞形成4天拟胚体(4dEBs),再用骨髓内皮细胞条件培养液(mBMEC-CM)和/或胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM)诱导4dEBs生成造血干细胞。实验为mBMEC-CM+FLSC-CM组、mBMEC-CM组、FLSC-CM组,对照组。检测诱导生成的细胞造血干细胞特异抗原表达、造血相关基因表达、造血集落的形成以及造血重建能力。结果:从诱导ES-D3细胞生成造血干/祖细胞的数量和生成的集落总数看,mBMEC-CM+FLSC-CM组诱导效率显著高于其他3组。mBMEC-CM+FLSC-CM组诱导生成的细胞能重建照射鼠的造血系统。结论:骨髓内皮细胞条件培养液联合胎肝基质细胞条件培养液可促进鼠胚胎干细胞分化为具有造血重建能力的造血干细胞。
- 赵惠萍卢光琇王绮如
- 关键词：拟胚体造血
- 诱导人胚胎干细胞向造血细胞分析
- ＜正＞ 应用基质细胞条件培养液及细胞因子诱导人类胚胎干细胞系chCHE-3细胞生成造血干/祖细胞。实验分4组。第1、2、3组分别为:基质细胞条件培养液+细胞因子组;基质细胞条件培养液组;细胞因子组。第4组为自发分化组。经...
- 赵惠萍王绮如程腊梅谭孟群
- 文献传递
- 骨髓内皮细胞条件培养液促进小鼠胚胎干细胞向造血分化被引量：3
- 2003年
- 为观察骨髓内皮细胞条件培养液 (BECM)和 (或 )细胞因子 (VEGF +SCF +EPO)对小鼠胚胎干细胞 (ESC D3细胞 )生成造血干 /祖细胞的促进作用 ,先将ESC D3细胞形成 4天胚状体 (Day 4embryoidbody,4dEB) ,再诱导 4dEBs生成造血干 /祖细胞。实验分 4组 ,第 1,2和 3组分别为BECM +VEGF +SCF +EPO ,BECM和VEGF +SCF +EPO组 ,第 4组为自发分化对照组。检测各组造血干 /祖细胞特异抗原、造血转录因子表达以及造血集落的形成。结果显示 ,BECM和 (或 )细胞因子诱导生成的细胞均表达造血干 /祖细胞抗原 (c kit,Sca 1,Thy 1和CD34)和造血转录因子(c myb ,SCL和β H1) 基因mRNA ,培养后可产生HPP CFC和BFU E。从诱导ESC D3细胞生成造血干 /祖细胞的数量和生成的集落总数看 ,BECM联合细胞因子组诱导效率均显著高于单用组和对照组。结论 :骨髓内皮细胞条件培养液能显著促进胚胎干细胞早期造血分化 。
- 赵惠萍卢光琇王绮如
- 关键词：骨髓内皮细胞胚胎干细胞胚状体骨髓移植
- 不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:通过观察人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化诱导效率,探讨不同造血微环境对造血发生的影响。方法:本实验诱导人胚胎干细胞分化为造血细胞的方法采用两步法:先用细胞因子培养形成5d的拟胚体,然后再模拟体内造血发生的微环境,分别用人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞诱导拟胚体10d,通过流式细胞术检测细胞的flk,CD34和CD45表面抗原表达情况,观察3种基质细胞对人胚胎干细胞向造血细胞分化的影响。结果:5d拟胚体与卵黄囊基质细胞接触培养10d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别1.80%±0.56%,1.30%±0.14%,1.05%±0.63%;与胎肝基质细胞接触培养10d生成的细胞表达为flk,CD34,CD45百分率分别为34.0%±25.45%,38.4%±24.8%,72.6%±25.7%;与骨髓基质细胞接触培养10d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为2.50%±1.48%,3.20%±0.56%,1.65%±0.21%;5d拟胚体自发分化10d生成的细胞表达flk,CD34,CD45百分率分别为0.30%±0.07%,0.65%±0.07%,0.15%±0.07%。与自发分化10d比较,3种基质细胞与5d拟胚体接触培养,均能够促进拟胚体向造血细胞的分化,且胎肝基质细胞诱导的效率显著优于其他两种基质细胞(P(0.05)。结论:与卵黄囊基质细胞和骨髓基质细胞比较,胎肝基质细胞更有利于诱导人胚胎干细胞向造血细胞的分化。
- 赵惠萍赵海军林戈周菂刘天成卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞造血细胞骨髓基质细胞
- 不同造血微环境对诱导人胚胎干细胞向造血干细胞分化的影响
- 目的:通过观察人卵黄囊基质细胞、人胎肝基质细胞和人胎骨髓基质细胞对人胚胎干细胞向造血干细胞分化诱导效率,探讨不同造血徽环境对造血细胞发生的影响.方法:本实验诱导人胚胎干细胞分化为造血干细胞的方法采用两步法:先用细胞因子培...
- 赵海军赵惠萍林戈周药刘天成卢光琇
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