邵妤
- 作品数：7 被引量：6H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用Bio-BglBrick方法表达紫杉醇生物合成酶被引量：1
- 2014年
- 目的:进行紫杉醇药物生物合成前五步催化酶二磷酸盐合酶(GGPPS)、紫杉二烯合酶(TS)、紫杉二烯5α羟化酶(THY5α)、紫杉二烯5α-O-乙酰转移酶(TAT)和紫杉烷10β羟化酶(TDH)基因在大肠杆菌异源生物合成途径的组建及串联,实现单个表达及串联表达,并试图通过连续生物催化获得紫杉醇中间体紫衫二烯。方法:依据合成生物学中Brick基因组装方法,通过对载体pET30a的酶切位点进行定向改造,设计独特的BglⅡ/BamHⅠ和XbaⅠ/SpeⅠ串联表达盒,在大肠杆菌BM Rosetta(DE3)中表达产物。结果:设计多基因表达盒,实现紫杉醇药物生物合成前五步催化酶的单个表达,GGPPS和TS以及THY5α、TAT和TDH的串联表达。结论:利用BglBrick/BioBrick基因组装方法,可以实现紫杉醇生物合成催化酶的快速组装及后续表达。
- 金晶王微邵妤陈章凌焱李玉霞宋永波刘刚陈惠鹏
- 关键词：紫杉醇生物合成异源表达
- 胰高血糖素样肽1或其类似物体外生物活性检测方法的建立被引量：4
- 2015年
- 目的:通过对不同活性检测方法的综合比较,筛选最适的胰高血糖素样肽1(GLP-1)或其类似物的体外活性检测方法,为GLP-1类似物的体外生物活性检测奠定基础。方法:以GLP-1作为阳性药物,用MTT方法检测其对RIN-m-5F、MIN6细胞增殖的影响;用ELISA方法检测其对INS-1、MIN6细胞胰岛素分泌量的影响;用ELISA方法检测其对BHK-GLP-1R细胞cAMP分泌水平的影响。通过对上述方法的综合比较,筛选出最适的活性检测方法。结果:GLP-1对细胞增殖的影响实验结果并不显著,对胰岛素分泌量影响的实验效果明显,对cAMP分泌水平的实验无明显效果。结论:ELISA检测GLP-1或其类似物对MIN6细胞胰岛素分泌量实验可用于GLP-1或其类似物的体外活性检测。
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- 关键词：2型糖尿病胰高血糖素样肽1类似物活性检测
- Exendin-4/HSA长效融合蛋白的构建表达与活性研究
- 糖尿病是多因素所致的内分泌紊乱性疾病，主要有1型（胰岛素依赖型）和2型（非胰岛素依赖型）糖尿病。据预测，到2025年全球糖尿病患者人数将达3亿，其中90％为2型糖尿病。2型糖尿病的传统治疗药物主要有二甲双胍、磺脲类药物等...
- 邵妤
- 关键词：融合蛋白合成生物学
- 文献传递
- HSA长效融合蛋白及其快速组装及分离纯化方法
- 本发明涉及一种HSA长效融合蛋白及其快速组装及分离纯化方法。该融合蛋白包含两个多肽区，第一区是由促胰岛素分泌肽Exendin-4的重复序列组成，第二区是由人血清白蛋白HSA的序列组成，第一区的C-末端与第二区的N-末端通...
- 刘刚邵妤陈惠鹏金晶王微曲国龙阚乃鹏谭俊杰朱晨
- 文献传递
- 可用于TNT检测的新的生物传感元件topAp4的发现被引量：1
- 2015年
- 目的在大肠杆菌基因组中筛选可用于TNT检测的基因传感元件。方法利用随机酶切方法不完全酶切大肠杆菌K-12 MG1655基因组,构建基因组启动子文库,通过多轮筛选法获得可感应TNT的文库元件。通过数据库分析,并在灵敏度、特异性、起效时间各方面对新的传感元件在TNT诱导下的启动活性进行考察,进一步确证了文库元件中发挥作用的功能序列。结果和结论成功构建了大肠杆菌K-12 MG1655基因组启动子文库,并从中筛选得到了一个可感应TNT的文库元件,经过进一步分析确证了其发挥功能的序列top Ap4,并在灵敏度、特异性、起效时间上都表现出较好的启动活性。上述研究工作发现了top Ap4对TNT的感应作用,并验证了其具有较好的启动活性,为TNT检测生物传感器的构建打下了良好的基础。
- 阚乃鹏谭俊杰王微凌婧怡曲国龙邵妤金晶刘刚陈惠鹏
- 关键词：合成生物学启动子三硝基甲苯
- 利用BglBrick方法进行HSA/Exendin-4长效融合蛋白的快速组装
- 2014年
- 目的:通过合成生物学的BglBrick方法快速构建不同种类HSA/Exendin-4长效融合蛋白,为进行各HSA/Exendin-4融合蛋白生物学活性的筛选比较奠定基础。方法:选用酵母表达载体pPICZαA质粒,构建pPICZαA-E4和pPICZαA-HSA两种基础Brick表达载体,运用BglBrick方法,实现了不同数目Exendin-4分子在HSA的不同末端的快速组装。将构建出的10种HSA/Exendin-4融合蛋白,转入毕赤酵母菌KM71H中,用甲醇诱导目的蛋白的表达。结果:用BglBrick方法构建的HSA/Exendin-4融合蛋白在毕赤酵母中都成功诱导表达出相应的目的蛋白。结论:利用BglBrick方法能够实现HSA长效融合蛋白的快速组装。
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- 关键词：EXENDIN-4合成生物学
- 利用合成的基因回路实现细胞水平上尿酸稳态控制的实验研究
- 2014年
- 目的:利用合成生物学方法构建尿酸介导的基因回路,在细胞水平上研究回路对尿酸稳态的调控作用。方法:以耐辐射异常球菌R1基因组中转录抑制物基因hucR及其结合位点基因hucO为基础,化学合成具有转录抑制功能的基因mUTs及其结合位点的8串联结构hucO8,构建基因回路;转染HeLa细胞,通过检测分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的表达量来验证回路的作用原理和对尿酸的感应作用;在此基础上,用优化的黄曲霉菌尿酸氧化酶(Uox)基因smUox替换SEAP基因,转染HeLa细胞,通过检测转染前后培养基中尿酸浓度的变化,验证回路对尿酸的调节作用。结果:分别构建了优化的转录抑制物表达载体pcDNA3.1/V5-mUTs、报告基因表达载体pSEAP-hucO8、优化的黄曲霉菌Uox表达载体phucO8-smUox、pBudCE4.1-smUox,双向共表达载体pBudCE4.1-SEAP-mUTs、pBudCE4.1-mUTs-smUox;单独转染pBudCE4.1-SEAP-mUTs或共转染pSEAP-hucO8和pcDNA3.1/V5-mUTs,通过检测培养基中SEAP的表达量,证明双载体及单载体回路对尿酸的感应作用;用smUox替换SAEP基因后,通过检测转染48 h后培养基中尿酸含量的变化,证明双载体及单载体基因回路均具有一定的尿酸调节能力。结论:在细胞水平上,构建的双载体基因回路(phucO8-smUox、pcDNA3.1/V5-mUTs)和单载体基因回路(pBudCE4.1-mUTs-smUox)均可实现对尿酸的感应及调控作用,在一定范围内通过增加mUTs与hucO8的摩尔比,可以改变回路对尿酸的调控范围及调节程度。
- 曲国龙邵妤谭俊杰陈章金晶凌焱李玉霞刘刚陈惠鹏
- 关键词：合成生物学尿酸共表达
