陈庆新
- 作品数：28 被引量：161H指数：6
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技攻关计划浙江省杭州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白永生化细胞制备方法
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP3基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP3基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectami...
- 周继勇叶菊秀陈庆新郑肖娟
- 文献传递
- 表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白永生化细胞制备方法
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP2基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP2基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectami...
- 周继勇叶菊秀陈庆新郑肖娟
- 文献传递
- 猪圆环病毒Ⅱ型毒研究进展
- 圆环病毒科(Circoviridae)是国际分类委员会(ICTV)第六次学术报告新命名的一个科。本科既有植物病毒又有动物病毒:植物病毒有地三叶草侏病毒(SCSV)、椰树叶腐烂病毒(CFDV)和香蕉簇顶病毒(BBTV);动...
- 陈庆新叶菊秀周继勇
- 文献传递
- 杭州地区猪Ⅱ型圆环病毒抗体的血清学调查被引量：28
- 2003年
- 从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ,断奶后仔猪的阳性率为 5 5 .4 8% ,断奶前仔猪的阳性率为 5 2 .98%。血清学调查结果显示 ,PCV
- 陈庆新商绍彬叶菊秀母安雄王毅峰陆国林周继勇
- 关键词：抗体检测血清学调查断奶仔猪多系统衰竭综合征
- 猪圆环病毒1型和2型Rep蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：2
- 2007年
- 分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a(+)和pET-32a(+)两种原核表达载体上。测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,猪圆环病毒1型和2型的ORF1均能在pET-28a和pET-32a中分别以重组蛋白His-Rep(40 Ku)和Trx-His-Rep(54 Ku)的形式表达。进一步纯化后测定重组蛋白的浓度,推算出猪圆环病毒1型和2型的His-Rep蛋白产量分别为34 mg/L菌液和14 mg/L菌液,Trx-His-Rep蛋白产量则为12 mg/L菌液和10 mg/L菌液。这些纯化的蛋白在Western blot中能够与猪抗猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应,显示其具有良好的免疫学活性。本研究建立的猪圆环病毒重组Rep蛋白的原核表达系统及其纯化方法,为下一步开展Rep蛋白功能等相关研究奠定了基础。
- 李益飞申会刚商绍彬陈庆新郭军庆周继勇
- 关键词：REP蛋白纯化
- 猪圆环病毒2型HZ0201株分子克隆的感染性分析被引量：7
- 2007年
- 通过PCR扩增猪圆环病毒2型HZ0201株的全长基因组,克隆到pBluescript SK+载体SacⅡ位点;同时以SacⅡ切出PCV2全长DNA,并进行自身环化,分别构建PCV2全长基因组重组质粒和首尾相接的环化DNA。利用脂质体分别将PCV2重组质粒和环化DNA转染PK-15和Vero细胞,免疫组织化学试验(IHC)结果显示二者均检出PCV2阳性抗原。其中PCV2环化DNA转染细胞的阳性率显著高于PCV2重组质粒。将转染细胞进行连续8次传代,以IHC对每代病毒检测表明,PCV2分子克隆在PK-15细胞中形成的病毒能稳定感染,并且滴度逐步增加;而在Vero细胞上复制能力不强,传到第四代即不能检出病毒。
- 陈婷飞周继勇陈庆新商绍彬
- 关键词：猪圆环病毒2型分子克隆
- 表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白永生化细胞制备方法
- 本发明公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP1基因编码蛋白永生化细胞制备方法。反转录获得传染性法氏囊病毒基因组cDNA，PCR扩增VP1基因片段与哺乳动物细胞真核表达pCI－neo构建成重组表达质粒。在Lipofectami...
- 周继勇叶菊秀陈庆新郑肖娟
- 文献传递
- 圆环病毒2型感染的流行病学分析及其突变体致病性
- 猪圆环病毒2型(Porcine circovims type 2，PCV2)属于圆环病毒科，基因组全长为1768nt或1767nt，除ORF1和ORF2两大阅读框外，还潜在9个ORFs。ORF1编码与病毒复制相关的Rep...
- 陈庆新
- 关键词：猪圆环病毒2型流行病学突变体
- 文献传递
- 猪圆环病毒Ⅱ型毒研究进展
- 本文分析了猪圆环病毒Ⅱ型的特性及流行病学特点,阐述了猪圆环病毒Ⅱ的致病性及致病机理,介绍了该病毒的检测方法.
- 陈庆新叶菊秀周继勇
- 关键词：致病机理
- 文献传递
- 传染性法氏囊病病毒凋亡调节蛋白表达细胞株的建立
- 2008年
- 构建传染性法氏囊病病毒非结构蛋白基因（NS）的重组表达质粒pEGFP-C2-NS,然后在LipofectamineTM 2000介导下转染Vero细胞,活细胞状态下直接观察EGFP-NS蛋白在细胞中的表达与定位。结果显示,转染后4~5 h出现荧光蛋白表达,24 h达到高峰,呈小点样环核膜与细胞膜附近沉积,经G418筛选2~3周后稳定表达的荧光蛋白主要分布于细胞膜上。G418抗性细胞,经RT-PCR和Western-blot验证NS mRNA及其蛋白表达,提示已建立能稳定表达EGFP-NS蛋白的细胞株,所表达蛋白具有NS和EGFP双重活性,为进一步研究NS蛋白凋亡调节机制打下了基础。
- 叶菊秀李玲燕陈庆新周继勇
- 关键词：传染性法氏囊病病毒绿色荧光蛋白VERO细胞
