霍方珍
- 作品数：6 被引量：20H指数：2
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程农业科学医药卫生更多>>
- 抗盐酸克伦特罗单链抗体基因的克隆、序列分析及表达
- 2007年
- 提取分泌抗盐酸克伦特罗单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA,通过RT-PCR技术,扩增VH和VL,用一段柔性肽链-(G4S)3将VH和VL连接成ScFv。测序后经NCBI Blast分析,所得ScFv具有重组功能性鼠抗体可变区基因的特征。将所得目的基因与pET-22b(+)连接,转化E.coli BL21,用IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析,37℃培养5 h表达量较大,25℃诱导表达以可溶性为主。
- 霍方珍卢士英周玉杨正涛柳增善
- 关键词：盐酸克伦特罗单链抗体
- 弧菌三联融合毒素基因表达及ELISA检测方法建立被引量：2
- 2009年
- 采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因,即副溶血性弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联,得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为FT)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6%。FT的开放阅读框架全长3225bp,编码1074个氨基酸残基,预测分子量为120.4kDa。将FT亚克隆至表达载体pET-22b(+)中,再转化至E.coliBL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAEG分析,融合蛋白分子量与预测的相符。终浓度为1mmol/L的IPTG,37℃诱导4h,融合毒素蛋白表达量最高,经薄层扫描分析,此时融合毒素蛋白占全菌体蛋白的11.49%。融合毒素蛋白包涵体经纯化,免疫豚鼠制备血清抗体,确定间接ELISA的最佳工作条件,并进行敏感性、特异性、重复性及模拟样品检测试验,建立了食物中毒性弧菌广谱、快速、特异的同步免疫学检测方法。
- 李月婷卢士英周玉饶星霍方珍任洪林柳增善
- 关键词：食物中毒弧菌ELISA
- 抗盐酸克伦特罗单链抗体的高效表达及免疫学活性研究
- 根据单克隆抗体可变区的保守序列设计引物,经PCR从分泌抗盐酸克伦特罗单克隆抗体杂交瘤细胞株中克隆得到了抗盐酸克伦特罗的单链抗体基因片段。将CL ScFv与pMD18-T连接,送上海生工测序。在NCBI网站Blast数据库...
- 霍方珍
- 关键词：盐酸克伦特罗单链抗体ELISA
- 文献传递
- 食物中毒性弧菌三联融合毒素基因克隆与表达
- 本研究采用柔性Linker（GGGGS）和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因,即副溶血弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联,得...
- 李月婷卢士英周玉饶星霍方珍任洪林柳增善
- 关键词：食物中毒弧菌串联基因蛋白表达
- 文献传递
- 大田软海绵酸单克隆抗体ELISA检测方法的建立被引量：16
- 2007年
- 利用BALB／c小鼠腹水大量制备抗大田软海绵酸（okadaic acid，OA）的单克隆抗体，并以此抗体为探针建立了0A的快速、灵敏、简便的ELISA检测方法——直接和间接竞争抑制性ELISA方法，2种检测方法的回归方程和相关系数分别为：y=-38．678χ＋130．01，R^2=0．9886和y=-34．212x＋83．49，R^2=0．9784，线性范围为1.56～75μg／L和0.4425μg／L，对OA的最低检出质量浓度为0．6μg／L和0．18μg／L。并利用所建立的2种ELISA方法对贝类模拟样品及实际样品进行了检测，样品回收率分别为84．72％和98．38％。结果表明，此方法可满足海产品中贝类样品0A限量标准检测。
- 卢士英周玉李岩松任洪林霍方珍王颖柳增善于光
- 关键词：单克隆抗体ELISA
- 海洋毒素大田软海绵酸完全抗原的制备与分析被引量：2
- 2009年
- 为了建立大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)的免疫学检测方法,利用活泼酯法将OA分子中的羧基与载体蛋白上的氨基偶联,人工制备OA的免疫抗原(OA-IgG)和检测抗原(OA-BSA),经电泳、动物实验及ELISA法进行了鉴定,完全抗原的偶联成功,为利用杂交瘤技术制备OA的单克隆抗体和海产品OA免疫学检测方法奠定了良好的基础。
- 卢士英周玉任洪林霍方珍潘风光柳增善于师宇于光
- 关键词：ACID
