高娴
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
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- 巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+)-EGFP纳米粒的构建和对HeLa细胞体外转染活性的研究
- 2009年
- 目的制备巯基化壳聚糖,构建巯基化壳聚糖-质粒DNA(pDNA)纳米粒,并研究该纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性。方法1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)催化巯基乙酸与壳聚糖反应生成巯基化壳聚糖,傅里叶变换红外光谱仪测量产物的红外光谱,5-5'-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)法检测产物的巯基含量;以pcDNA 3.1(+)-EGFP为报告基因,巯基化壳聚糖为载体,用复凝聚法制得巯基化壳聚糖-pcDNA3.1(+)-EGFP纳米粒,Zeta电位和粒度分析仪检测该纳米粒的表面电位和粒径。纳米粒经DNaseI处理、再在肝素作用下解聚,用琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。评价巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+)-EGFP纳米粒对HeLa细胞的体外转染活性,MTT法测定该纳米粒对HeLa细胞的毒性。结果红外光谱图显示壳聚糖在EDAC的作用下被巯基化。DTNB法显示1g巯基化壳聚糖的巯基含量为(202.85±3.05)μmoL(n=6)。Zeta电位及粒度分析仪的结果表明巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+)-EGFP纳米粒的平均粒径为288.7nm,Zeta电位为+(25.2±2.1)mV。DNaseⅠ保护实验证明该纳米粒能有效抑制DNaseⅠ对内部pDNA的降解。体外转染实验表明巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+)-EGFP纳米粒能有效转染HeLa细胞系,且对HeLa细胞生长无抑制作用。结论该制备工艺生产的巯基化壳聚糖-pcDNA 3.1(+)-EGFP纳米粒能将质粒DNA导入HeLa细胞,使报告基因有效地表达。所以巯基化壳聚糖是基因转运和基因治疗中有应用潜力的非病毒类载体。
- 陈斌马世坤高娴
- 关键词：纳米粒基因载体转染
- 离子凝胶法制备壳聚糖载药微囊被引量：1
- 2008年
- 目的:采用离子凝胶法,建立制备壳聚糖载药微囊的方法,探讨最佳制备条件,考察药物电荷情况对微囊包封率的影响。方法:以三聚磷酸钠(TPP)为交联剂、牛血清白蛋白(BSA)为模型药物,以微囊包封率为优化指标,通过正交实验探索微囊最佳制备工艺;再分别以BSA(带负电)和异烟肼(带正电)为模型药物按照最佳工艺制备微囊,并比较两种微囊包封率。结果:最佳制备条件为:壳聚糖/TPP(w/w)3.75:1、pH值5.0、TPP滴加速度20滴/min、搅拌速度200 r/mim。带有负电荷的药物(BSA)微囊包封率明显高于带有正电荷的药物(异烟肼)微囊(P<0.001)。结论:离子凝胶法制备微囊方法简单,条件温和,比较适合用于带有负电荷药物微囊的制备。
- 高娴马世坤陈斌
- 关键词：壳聚糖异烟肼牛血清白蛋白包封率
- 巯基化壳聚糖-质粒DNA纳米粒的制备及相关性质的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:通过巯基化修饰将壳聚糖改性成巯基化壳聚糖,以巯基化壳聚糖与质粒DNA(pDNA)结合,制备巯基化壳聚糖-pDNA纳米粒。方法:在1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)的催化作用下,巯基乙酸与壳聚糖通过酰胺键结合,形成巯基化壳聚糖。以5-5′-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)法检测巯基化壳聚糖的巯基含量;通过复凝聚法使巯基化壳聚糖和报告基因质粒pcDNA3.1(+)-EGFP结合,制备巯基化壳聚糖-pcDNA3.1(+)-EGFP纳米粒,透射电镜检测纳米粒形态和粒径,紫外分光光度法检测纳米粒对pcDNA3.1(+)-EGFP的包封率,DNase I处理该纳米粒,并用琼脂糖凝胶电泳检测其产物。结果:EDAC能有效地使壳聚糖巯基化,1g巯基化壳聚糖的巯基含量为(202.85±3.05)μmol(n=6);巯基化壳聚糖能有效地与质粒pcDNA3.1(+)-EGFP结合形成稳定的纳米粒,包封率大于90%;电镜下该纳米粒的粒径在300～350 nm之间,为不规则球型,经DNaseⅠ处理和电泳分析表明该纳米粒能保护pcDNA3.1(+)-EGFP免受DNaseⅠ的降解。结论:巯基化壳聚糖pcDNA3.1(+)-EGFP纳米粒有较好的包封效果、适度的粒径和良好的保护内部质粒抗核酸酶水解的能力,巯基化壳聚糖可能成为基因递送的非病毒载体。
- 陈斌马世坤高娴
- 关键词：纳米粒基因载体转染
- 巯基化壳聚糖载蛋白类药物微囊的制备及其体外性质研究
- 目的：探索不同修饰程度巯基化壳聚糖载蛋白模型药物微囊的最佳制备条件，研究巯基化修饰程度对微囊形态、粒径、包封率、载药量以及体外缓释性能的影响，考察巯基化壳聚糖微囊作为药物递送载体的安全性，为动物实验及后期临床试验提供有用...
- 高娴
- 关键词：缓释性能
- 文献传递
- 壳聚糖作为药物缓释控释载体的研究进展被引量：15
- 2008年
- 壳聚糖因其具有良好的生物学特性而成为多种药物载体研究的热点。药物经过壳聚糖负载后,不仅能够达到缓释控释的目的,还能够改变药物的给药方式,以此减少给药次数,降低药物不良反应,提高药物生物利用度。本文就壳聚糖和改性壳聚糖作为普通药物和生物大分子药物载体的研究进展作一综述。
- 高娴马世坤
- 关键词：壳聚糖药物载体药物缓释药物控释
