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魏洁

作品数：13 被引量：31H指数：3
供职机构：南方医科大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 12篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 11篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 10篇细胞
  • 7篇基因
  • 4篇细胞内
  • 4篇基因表达
  • 4篇胞内
  • 3篇蛋白
  • 3篇真核
  • 3篇真核表达
  • 3篇丝裂原
  • 3篇丝裂原活化蛋...
  • 3篇突变体
  • 3篇细胞内定位
  • 3篇活化
  • 3篇活化蛋白激酶
  • 3篇基因敲除
  • 3篇激酶
  • 3篇核表达
  • 3篇P38丝裂原...
  • 3篇P38MAP...
  • 2篇点突变

机构

  • 13篇南方医科大学
  • 4篇南方医科大学...
  • 2篇暨南大学

作者

  • 13篇魏洁
  • 12篇姜勇
  • 12篇龚小卫
  • 11篇邓鹏
  • 6篇李煜生
  • 5篇明小燕
  • 5篇程蔚蔚
  • 5篇王达安
  • 4篇王旭
  • 4篇刘爱华
  • 2篇梅柱中
  • 2篇罗深秋
  • 2篇王丹
  • 1篇彭毅
  • 1篇唐靖
  • 1篇李涛
  • 1篇杨婷

传媒

  • 4篇南方医科大学...
  • 3篇中国病理生理...
  • 2篇贵阳医学院学...
  • 1篇解放军医学杂...
  • 1篇中国危重病急...
  • 1篇中国生物化学...

年份

  • 2篇2010
  • 5篇2008
  • 6篇2007
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
p53基因敲除对细胞迁移的影响被引量：1
2007年
目的研究p53基因敲除对细胞迁移的影响。方法观察p53+/+和p53-/-细胞中血清诱导的板状伪足形成情况,以及利用Transwell细胞迁移系统观察p53基因敲除对血清诱导的细胞迁移的影响。结果在血清诱导下,p53+/+细胞能形成板状伪足和进行迁移,而p53-/-细胞中板状伪足的形成和细胞迁移都被阻断。结论p53在血清诱导的细胞迁移中具有重要作用。
龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚王旭邓鹏姜勇
关键词：P53基因敲除细胞迁移
MK2不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究被引量：2
2008年
目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2,MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况。方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况。结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布。在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变。结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响。
魏洁龚小卫明小燕王旭王达安邓鹏姜勇
关键词：蛋白激酶类突变细胞内定位P38丝裂原活化蛋白激酶
p38丝裂原活化蛋白激酶基因敲除对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响
2008年
目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）基因敲除对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响。方法用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测小鼠胚胎成纤维细胞中p38制^＋/＋和p380^-/-的表达；利用噻唑蓝（MTT）比色法绘制p38^＋/＋和p38^-/-细胞的生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期各时相所占百分比。结果绘制的生长曲线表明，p38^-/-细胞的生长速率明显下降，增殖受到抑制，细胞倍增时间延长，培养96h时，p380^-/-细胞数量较p38^＋/＋减少了15．5％，说明p38基因敲除明显抑制了G2／M的进程。流式细胞仪检测结果显示，p3^＋/＋。细胞中G0／G1期细胞占34．47％，G2／M期占10．81％，S期占54．72％；p380^-/-细胞中G0／G1期占48．49％，G2／M期占4．06％，S期占47．44％。与p38^＋/＋细胞相比，G1期的p380^-/-细胞增加了40．7％，S期则减少了13．3％，说明p38基因敲除抑制了G1／S的进程。结论p38基因敲除能够阻滞细胞周期进展，减慢细胞增殖速度。
龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚邓鹏姜勇
关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶基因敲除细胞增殖
PRAK不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究
2007年
目的:构建p38调节/激活蛋白激酶(PRAK)不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中表达后,观察这些突变体在细胞内的定位情况。方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型PRAK通过定点突变技术构建其无活性突变体PRAK(T182A)、活性突变体PRAK(T182D)、无激酶活性突变体PRAK(KM)、核定位信号缺失突变体PRAK(NLSm)及核输出信号缺失突变体PRAK(NESm),随后转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其表达和细胞内定位情况。结果:经测序鉴定各种PRAK不同突变体正确无误后,在NIH3T3细胞中得到高量表达;融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,野生型PRAK(WT)、PRAK(182A)、PRAK(182D)、PRAK(KM)和PRAK(NESm)主要分布于细胞核内,而PRAK(NLSm)在细胞中均匀分布;在受到NaAsO2刺激后,PRAK(WT)和PRAK(KM)移位出核,而PRAK(182A)、PRAK(182D)和PRAK(NESm)失去了移位出核的能力,PRAK(NLSm)则与刺激前无明显差异。结论:成功构建了PRAK不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并在真核细胞中进行了表达,且不同的突变体能够影响PRAK的细胞内定位。
龚小卫彭毅唐靖魏洁邓鹏姜勇
关键词：点突变基因表达细胞内定位
应激刺激诱导p38MAPK核移位的分子机制研究
细胞信号特异性传递过程取决于信号发生和传递的时间和空间特征。信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位是信号传递的主要空间特征。在许多情况下，信号蛋白需要锚定于适配体蛋白、细胞骨架及细胞膜结构，或与其上游激酶和下游底物结合来发挥正...
魏洁
关键词：细胞内定位细胞信号转导P38信号通路
人p53不同突变体的构建、表达及其对亚砷酸盐诱导细胞凋亡的影响被引量：1
2008年
目的构建人p53的不同突变体,并在真核细胞中表达,研究这些突变体对应激刺激诱导细胞凋亡的影响。方法采用PCR方法扩增人p53 cDNA序列,使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3/HA载体中,对阳性克隆进行酶切和PCR鉴定。将阳性重组体的第15位和第46位丝氨酸突变为丙氨酸,并转染NIH3T3细胞,观察其在NIH3T3细胞内的表达情况。转染不同突变体的NIH3T3细胞用Annexin V-FITC和碘化丙啶双标后,利用流式细胞术检测亚砷酸盐刺激前后的凋亡情况。结果构建的pcDNA3/HA-p53(WT)、pcDNA3/HA-p53(S15A)和pcDNA3/HA-p53(S46A)是正确的,且能在NIH3T3细胞内有效表达。流式细胞术检测表明,p53(WT)的表达使亚砷酸盐诱导的细胞凋亡增加,p53(S15A)的表达使细胞凋亡减少,而p53(S46A)没有明显影响。结论p53的第15位丝氨酸在其介导亚砷酸盐诱导的细胞凋亡中具有重要作用。
刘爱华龚小卫魏洁明小燕王达安邓鹏罗深秋姜勇
关键词：P53定点突变基因表达细胞凋亡亚砷酸盐
p38 MAPK信号通路参与受体介导的细胞内吞的调控被引量：13
2007年
目的:观察p38MAPK信号转导通路在受体介导的细胞内吞中的作用。方法:利用Alexa594标记的转铁蛋白作为受体介导的内吞作用的观察指标,来研究p38特异性抑制剂SB203580或ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理以及p38基因敲除对该过程的影响。结果:在受体介导的细胞内吞中,p38被磷酸化激活。SB203580的预处理或p38基因的敲除都能阻断受体介导的细胞内吞,而PD98059的预处理对该过程没有影响。结论:p38MAPK信号转导通路参与了受体介导的细胞内吞的调控。
龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚邓鹏姜勇
关键词：P38MAPK信号转导
pNTAP-PRAK真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
2010年
目的:构建pNTAP-PRAK真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法:将人的PRAK亚克隆至串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-PRAK,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用PolyFect脂质体介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAP tag-PRAK融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAP tag-PRAK的表达及细胞内定位情况。结果:重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-PRAK主要分布在核内。结论:成功构建pNTAP-PRAK真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对PRAK定位产生明显影响。
王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇
关键词：基因表达
pNTAP-MK2真核表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立
2010年
目的构建pNTAP-MK2真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系。方法将MK2亚克隆至串联亲和纯化载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-MK2,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用脂质体PolyFect介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAPtag-MK2融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAPtag-MK2的表达及细胞内定位情况。结果重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAPtag-MK2主要分布在核内。结论成功构建pNTAP-MK2真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对MK2定位产生明显影响。
王达安龚小卫刘爱华梅柱中王丹明小燕王旭魏洁邓鹏姜勇
关键词：真核表达载体分子克隆
p38MAPK基因敲除对亚砷酸盐诱导细胞凋亡的影响被引量：5
2008年
目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在应激刺激诱导的细胞凋亡中的作用。方法:p38+/+和p38-/-细胞用NaAsO2刺激后,用多聚甲醛固定及DAPI染核,利用荧光显微镜观察细胞核的形态改变。NaAsO2刺激的p38+/+和p38-/-细胞用Annexin V-FITC与PI双标后,用流式细胞分析仪分析细胞凋亡百分率。结果:NaAsO2刺激后,大部分p38-/-细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化,p38+/+细胞仅少数细胞出现核固缩。而且,p38-/-细胞中凋亡细胞百分率较刺激前和p38+/+细胞都显著增加,而p38+/+细胞的凋亡率没有明显变化。结论:p38基因敲除使细胞对亚砷酸盐应激刺激的耐受性下降,容易发生凋亡;p38丝裂原活化蛋白激酶可能在提高细胞的应激适应能力上发挥着重要的作用。
刘爱华龚小卫魏洁明小燕王达安邓鹏罗深秋姜勇
关键词：MAP激酶基因敲除细胞凋亡亚砷酸盐类
全选 清除 导出
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