黄耿
- 作品数：74 被引量：113H指数：5
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- miRNA-370对肾癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的调控作用及其对细胞生长的影响被引量：1
- 2017年
- 目的 探讨miRNA-370（miR-370）对肾癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的调控作用以及对细胞生长的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 3000将已知的缺少人类基因同源性的dsRNA（对照组）和miR-370（实验组）分别转染ACHN和786-O细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白印迹法分别检测p21 mRNA和蛋白的表达变化.流式细胞术鉴定细胞周期分布,采用MTS法和集落培养实验检测细胞活力和增殖能力.结果 在ACHN细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.33、3.68±0.62,两者比较差异有统计学意义（t=7.535,P〈0.001）.在786-O细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.31、3.15±0.29,两者比较差异有统计学意义（t=9.975,P〈0.001）.在两种细胞中,实验组p21 mRNA表达与对照组相比均上调.蛋白印迹法检测结果显示,p21蛋白表达水平增加,与p21 mRNA水平上调一致.ACHN和786-O细胞转染miR-370后,细胞周期被阻滞在G0-G1期.MTS结果显示,在ACHN细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为（113±30）、（53±17）个,两者比较差异有统计学意义（t=2.982,P=0.041）.在786-O细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为（106±27）、（50±16）个,两者比较差异有统计学意义（t=3.089,P=0.037）.在两种细胞中,实验组形成的集落数与对照组相比均减少.结论 miR-370可上调肾癌细胞中抑癌基因p21的表达,并抑制肾癌细胞的生长.
- 黄耿姜卫东毛青桂定文
- 关键词：微RNAS
- 长链非编码RNA SCAMP1-AS1通过靶向调控微小RNA-483-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2022年
- 目的观察长链非编码RNA(lncRNA)SCAMP1-AS1在食管癌组织中的表达,探讨SCAMP1-AS1对食管癌细胞增殖和迁移的影响及可能的分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测鄂东医疗集团黄石市中心医院2017年3月至2020年8月手术切除的37例食管癌组织及癌旁组织、4种食管癌细胞(EC9706、TE-13、KYSE30、Eca109)及正常食管上皮细胞HET-1A中SCAMP1-AS1的表达水平。选择表达最低的细胞,以阴性对照慢病毒(LV-NC)感染为对照组,以携带SCAMP1-AS1序列的重组慢病毒(LV-SCAMP1-AS1)感染作为实验组。RT-qPCR检测感染后食管癌细胞中SCAMP1-AS1的表达。细胞计数试剂盒8(CCK-8)和Transwell小室法分别检测食管癌细胞的增殖能力和迁移能力。生物信息学方法预测SCAMP1-AS1的靶基因,双荧光素酶报告实验验证SCAMP1-AS1与靶基因的相互作用。RT-qPCR检测靶基因的表达,Western blotting检测细胞增殖和迁移表型蛋白的表达。结果食管癌组织中SCAMP1-AS1的相对表达水平明显低于癌旁组织(1.26±0.48比8.03±1.17),差异有统计学意义(P<0.01)。食管癌细胞EC9706、TE-13、KYSE30、Eca109中SCAMP1-AS1的相对表达水平均低于正常食管上皮细胞(0.54±0.05、0.14±0.02、0.46±0.07、0.77±0.05比1.00±0.06),差异有统计学意义(P<0.05),TE-13细胞中SCAMP1-AS1的表达最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组TE-13细胞中SCAMP1-AS1的表达上调(P<0.01),细胞的增殖能力降低(P<0.01),细胞的迁移能力降低(P<0.01)。miR-483-5p是SCAMP1-AS1的直接作用靶点(P<0.01)。与对照组比较,实验组TE-13细胞中miR-483-5p的表达下调(P<0.01),细胞增殖和迁移表型蛋白表达降低。结论lncRNA SCAMP1-AS1在食管癌中表达下调,SCAMP1-AS1可通过靶向调控miR-483-5p的表达抑制食管癌TE-13细胞的增殖能力和迁移能力,SCAMP1-AS1有望成为食管癌潜在的分子治疗靶点。
- 郑安锐雷蕾滕小军黄耿王品发常城
- 关键词：核糖核酸酶类细胞增殖细胞迁移
- 闭孔疝25例诊治体会被引量：1
- 2011年
- 闭孔疝是较少见的腹外疝，尽管发生率低，但由于临床表现不一，且一般临床医师对其认识不足，较易误诊漏诊，病死率较高，我院自1991年至2009年共收治25例闭孔疝患者，分析报道如下。
- 夏国兵曹玉刚黄耿
- 关键词：闭孔疝
- miR-1236模拟物转染对前列腺癌细胞生长影响被引量：1
- 2017年
- 目的 miR-1236为新发现的具有肿瘤抑制作用的RNA。本研究旨在探讨外源性miR-1236转染对前列腺癌细胞p21基因的激活作用及对其生长的影响。方法根据对前列腺癌细胞的不同处理分为阴性对照组(转染dsControl)和实验组(转染miR-1236)2组。qRT-PCR检测p21、细胞周期依赖性激酶CDK4和CDK6mRNA的表达变化。蛋白质印迹检测p21、CDK4和CDK6蛋白的表达变化。流式细胞术检测细胞周期分布。MTS法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力。结果与dsControl组相比,转染miR-1236后2种细胞中p21mRNA表达分别上调2.16(t=12.67,P<0.01)和2.26倍(t=10.93,P<0.01);CDK4mRNA的表达分别下调0.56(t=6.617,P<0.01)和0.43倍(t=5.698,P<0.01);CDK6mRNA的表达分别下调0.78(t=3.101,P<0.05)和0.71倍(t=3.841,P<0.01)。蛋白质印迹检测结果与qRT-PCR结果相符。流式细胞术结果显示,转染miR-1236后,位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,位于G0/G1期的细胞比例明显增大。MTS法显示,与dsControl组相比,转染miR-1236 2种细胞活力明显下降。dsControl组DU145和PC-3细胞形成的集落数分别为241±37.64和254.33±38.18;miR-1236组DU145和PC-3细胞形成的集落数明显减少,分别为99.67±34.2(t=3.939,P<0.05)和81±35.55(t=4.354,P<0.05),提示细胞增殖能力降低。结论外源性miR-1236能通过激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达并显著抑制其生长,可能成为前列腺癌基因靶向治疗的新靶点。
- 黄耿毛青桂定文姜卫东
- 关键词：前列腺癌P21
- 羟苯磺酸钙治疗早期糖尿病肾病有效性的系统评价被引量：5
- 2019年
- 目的系统评价羟苯磺酸钙对早期糖尿病肾病的影响。方法用计算机检索"PubMed、EMBASE、MELINE CNKI"等数据库,检索时间从建库至2018年3月。纳入有关羟苯磺酸钙对早期糖尿病肾病疗效的随机对照试验,由两名评价员独立对纳入研究进行数据提取和质量评价,用RevMan 5.0软件进行Meta分析。结果共11项随机对照试验,共计872例患者。Meta分析结果示:与对照组比较,羟苯磺酸钙治疗早期糖尿病肾病(试验组),可降低胱抑素C(Cys-C)[8周:MD=-0.39(P<0.000 01)、12周:MD=-0.26(P<0.000 01)]、内皮素(ET)[MD=-12.07(P<0.000 1)]和尿蛋白排泄率(UAER)[MD=-23.60(P<0.000 01)],但对血肌酐(Scr)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)的影响无明显差异。结论羟苯磺酸钙可降低早期糖尿病肾病患者的Cys-C、ET和UAER,对早期糖尿病肾病有一定的疗效,但因缺乏高质量的随机对照试验证据支持,故治疗效果还不能做出最后结论,需要更多高质量的随机对照试验才能得出肯定结论。
- 潘丹桂定文黄耿叶志华罗帅袁琛付金伦
- 关键词：羟苯磺酸钙随机对照试验META分析
- 局麻下经皮肾镜治疗肾结石186例报告
- 目的:探讨在局麻下经皮肾镜钬激光联合弹道碎石治疗肾结石的方法及效果。方法:总结2006年至2008年我院采用局麻下经皮肾镜钬激光联合弹道碎石治疗186例肾结石的经验。男105例,女81例。年龄36-87岁。其中肾盂结石6...
- 张青汉叶绪龙彭伟姜卫东桂定文陈小刚袁平成王瑜黄耿
- 文献传递
- miR-1291通过调控锌指蛋白8基因的表达对肾癌细胞周期及增殖的影响被引量：6
- 2018年
- 目的 探讨微小RNA-1291（miR-1291）对肾癌细胞中锌指蛋白8（PHF8）基因表达的调控作用和对肾癌细胞周期及增殖的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肾癌细胞株OSRC-2、ACHN、A498、786-O和人类近端肾小管上皮细胞HK-2中miR-1291表达水平，以表达量最低的肾癌细胞株为实验对象分别转染miR-1291（miR-1291组）和miR-NC（miR-NC组）。qRT-PCR检测转染后细胞中miR-1291和PHF8 mRNA的表达水平。Western blotting检测PHF8、细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）和Cyclin D1蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因系统检测miR-1291对PHF8转录活性的影响。流式细胞术检测细胞周期分布。四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验和集落形成实验分别检测细胞活力和增殖能力。结果肾癌细胞株OS-RC-2、ACHN、A498、786-O和人类近端肾小管上皮细胞HK-2中miR-1291的表达量分别为0.64±0.17、0.60±0.15、0.29±0.08、0.63±0.08、1.01±0.17，差异有统计学意义（F=13.790，P〈0.001）。与肾癌细胞株OS-RC2、ACHN、786-O相比，A498细胞株中的miR-1291表达量最低（P=0.002，P=0.006，P=0.003）。转染后的miR-NC组和miR1291组A498细胞中miR-1291表达量分别为1.00±0.03和775.25±329.91，差异有统计学意义（t=4.694，P=0.003）；PHF8 mRNA表达量分别为1.00±0.11和0.57±0.18，差异有统计学意义（t=4.122，P=0.006）。Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致，且CDK6和Cyclin D1蛋白表达明显降低。双荧光素酶报告基因显示miR-1291可以直接作用于靶基因PHF8的3′-非翻译区,抑制荧光素酶活性。与miR-NC组比较，转染miR-1291后肾癌细胞在S期（23.40±4.29∶32.19±2.64，t=3.491，P=0.013）和G2M期（14.38±4.05∶25.59±6.01，t=3.095，P=0.021）的细胞比例下降，在G0-G1期的细胞比例升高（62.22±7.56∶42.22±5.23，t=4.351，P=0.005）。MTT实验显示，转染miR-1291的细胞活力明显下降。集落形成实
- 叶志华黄耿付金伦桂定文
- 关键词：肾肿瘤微RNAS细胞周期细胞增殖
- miR-1280通过激活p21基因的表达对膀胱癌细胞周期及增殖的影响被引量：5
- 2018年
- 目的探讨微小RNA-1280（miR-1280）对膀胱癌细胞株BIU-87细胞p21基因表达的激活作用及对膀胱癌细胞周期及增殖的影响。方法实时定量荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）检测膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达水平。选取表达量最低的膀胱癌细胞，分别转染miR-1280模拟物（实验组）和miR-NC（对照组），qRT-PCR检测两组细胞中miR-1280和p21 mRNA表达水平。染色质免疫共沉淀（ChIP）实验验证miR-1280与p21基因启动子的靶向作用。Western blotting分别检测两组细胞中p21、细胞周期依赖性激酶1（CDK1）、细胞周期蛋白A2（Cyclin A2）mRNA和蛋白的表达。流式细胞术检测细胞周期。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力。结果qRTPCR结果提示，膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达分别为0.503±0.094、0.611±0.054、0.567±0.077、0.257±0.032和1.014±0.090，差异有统计学意义（F=1.880，P〈0.001）。与膀胱癌细胞株T24、5637、J82相比，BIU-87细胞株中的miR-1280表达量最低（P=0.026，P=0.003，P=0.008）。与对照组相比，实验组BIU-87细胞中miR-1280表达显著升高（1041.000±157.500∶1.023±0.118，t=6.606，P〈0.001），p21 mRNA表达亦显著升高（5.280±0.660∶1.007±0.070，t=6.440，P〈0.001）。Western blotting结果显示P21蛋白表达上调，CDK1和Cyclin A2蛋白表达下调。ChIP实验结果显示，相比miR-NC转染组，生物素修饰的miR-1280在p21基因启动子区域的富集倍数显著增加（1.246±0.171∶0.519±0.087，t=3.787，P=0.009）。实验组BIU-87细胞G0-G1期细胞比例较对照组明显升高（68.360%±3.064%∶46.970%±3.971%，t=4.263，P=0.005）。MTT结果显示，与对照组相比，转染miR1280后的BIU-87细胞从第3天（0.826±0.099∶1.224±0.057，t=3.505，P=0.013）开始增殖能力明显降低。结论miR-1280可通过结合p21基因�
- 叶志华黄耿付金伦桂定文
- 关键词：微RNAS膀胱肿瘤
- lncRNA AC051619.8通过促进CADM1表达抑制肾癌OS-RC-2细胞的增殖和迁移
- 2021年
- 目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)AC051619.8过表达对肾癌OS-RC-2细胞增殖和迁移功能的影响及其与细胞黏附分子1(cell adhesion molecule 1,CADM1)可能的调控关系。方法选择对数生长期的肾癌OS-RC-2细胞,分别感染携带无意义序列的重组慢病毒(NC组)和携带AC051619.8序列的重组慢病毒(AC051619.8组)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证感染效率。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和细胞划痕实验分别检测AC051619.8对细胞增殖和迁移能力的影响。RT-qPCR和Western blot分别检测CADM1基因的表达。结果NC组和AC051619.8组OS-RC-2细胞中AC051619.8相对表达量分别为(1.03±0.13)和(9.78±1.07),AC051619.8组细胞中AC051619.8表达明显增加(P<0.01)。与NC组相比,过表达AC051619.8可明显抑制OS-RC-2细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.01)。与NC组相比,AC051619.8能够促进OS-RC-2细胞中CADM1的表达[(1.05±0.18)比(5.71±0.47),P<0.01]。结论AC051619.8可能是肾癌的抑癌lncRNA,过表达AC051619.8可抑制肾癌OS-RC-2细胞增殖与迁移,可能是通过促进CADM1基因表达实现。
- 柯霓黄耿叶志华姜卫东姜卫东
- 关键词：肾癌细胞黏附分子1增殖迁移
- 等离子电切术联合吉西他滨膀胱灌注治疗非肌层浸润性膀胱癌的临床疗效被引量：19
- 2019年
- 目的评价经尿道等离子电切术联合吉西他滨膀胱灌注治疗非肌层浸润性膀胱癌的临床疗效。方法选取2014年1月至2016年1月黄石市中心医院应用经尿道等离子电切术联合术后吉西他滨或吡柔比星膀胱灌注化疗的非肌层浸润性膀胱癌患者84例,观察并比较两种药物灌注治疗后2年肿瘤复发率及不良反应发生率。结果两组患者的2年肿瘤复发率比较,差异无统计学意义,但吡柔比星组的不良反应发生率较吉西他滨组明显增高。结论吉西他滨膀胱灌注预防非肌层浸润性膀胱癌经尿道等离子电切术后膀胱肿瘤复发效果确切,且不良反应少,值得在临床上进一步推广应用。
- 叶志华董万超熊智萍桂定文黄耿付金伦
- 关键词：吉西他滨吡柔比星膀胱灌注
