冯爱花
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学生命科学学院安徽省作物生物学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 玉米叶绿体铁氧还蛋白1的原核表达及部分性质分析被引量：1
- 2011年
- 叶绿体铁氧还蛋白(Fd)通过活性中心的铁硫簇传递还原力,在各种氧化还原途径中起重要作用。本研究中,氨基酸序列比对显示玉米中5种Fd的叶绿体导肽同源性很低,而去除导肽的成熟蛋白氨基酸序列具有很高的同源性。采用RT-PCR技术从玉米幼叶总RNA中克隆了编码成熟Fd1的基因,并分别插入pQE 80和p28SUMO表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的N端含有组氨酸标签的Fd1(His-Fd1),和含有组氨酸标签的小类泛素修饰蛋白(SUMO)的Fd1(HisSUMO-Fd1),用Ni-NTA层析介质亲和纯化,SDS-PAGE显示纯化的His-Fd1为一条带,亚基分子量约12kD。纯化的HisSUMO-Fd1用专一性蛋白酶Ulp除去HisSUMO,获得纯化的Fd1。紫外可见光谱扫描显示纯化的HisSUMO-Fd1溶液在315nm、415nm和459nm有特异吸收峰,电子顺磁共振波谱分析表明Fd1中存在[2Fe-2S]。SDS-PAGE显示多种玉米幼叶可溶性蛋白被固定化的His-Fd1吸附。
- 冯爱花陈宗梅李静程备久范军
- 关键词：纯化铁硫簇
- 玉米铁氧还蛋白/硫氧还蛋白系统相关蛋白表达及功能分析
- 植物叶绿体光合作用的氧化还原信号主要的系统是铁硫氧还蛋白系统，包括硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）和它的还原酶：铁硫氧还蛋白还原酶(ferredoxin/thioredoxinreductase，FTR)和铁...
- 冯爱花
- 关键词：玉米蛋白表达活性调节
- 重组玉米f型和m型硫氧还蛋白的功能确定及其靶向蛋白的捕获被引量：1
- 2010年
- RT-PCR从玉米幼叶总RNA中克隆f型和m型硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)的编码基因,分别将两种类型Trx活性中心的第二个保守Cys残基定点突变成Ser残基和Ala残基。在大肠杆菌分别重组表达和纯化了含组氨酸标签的Trx及其突变体蛋白,SDS-PAGE显示纯化的蛋白显示一条主带,蛋白分子量分别估计为f型Trx为18kDa,m型Trx为14kDa;纯化的含有SUMO标签融合Trx,用SUMO专一性SUMO水解酶Ulp除去SUMO,等点聚焦电泳显示m型和f型Trx的等电点分别为4.6和5.9。m型Trx比f型Trx有更强的还原胰岛素能力,而突变体蛋白几乎没有还原能力。用Cys残基专一性标记化合物AMS标记Trx,显示野生型Trx有氧化还原态,而突变体蛋白仅有还原态。SDS-PAGE电泳显示固定化的f型Trx突变体比m型Trx突变体捕获的玉米幼叶靶蛋白更具有多样性。
- 冯爱花张国明亓振国范军
- 关键词：玉米定点突变功能分析
