冯菁华
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南方医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶10(ppGalNAc-T10)pcDNA载体构建及其在LoVo细胞中功能的初步研究
- 研究背景与目的：
人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)催化O-聚糖合成的第一步反应，将UDP-GalNAc上的GalNAc基因转移至蛋白多肽链上特定序列中的Ser或Thr的羟基上，从而合成Gal...
- 冯菁华
- 关键词：LOVO细胞转化生长因子-Β1结直肠癌
- FBXO6基因真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达
- 2013年
- 目的构建F盒蛋白6(FBXO6)基因真核表达载体。方法采用PCR方法合成含有EcoRⅠ和BglⅡ双酶切位点的FBXO6 cDNA全长。分别构建载体pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6,采用菌落PCR、双酶切鉴定以及测序证实cDNA片段大小和序列正确。将载体pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6分别转染HEK293T细胞,Western blot法检测FBXO6蛋白的表达。结果 pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6包含大小、序列正确的FBXO6片段;FBXO6蛋白在转染pEGFP-C1-FBXO6的293T细胞中高表达;在转染pEGFP-C1-anti-FBXO6的HEK293T细胞中表达降低。结论成功构建FBXO6基因正义真核表达载体pEGFP-C1-FBXO6和反义真核表达载体pEGFP-C1-anti-FBXO6。
- 高媛冯菁华陈玕彭翼飞郑文岭马文丽
- 关键词：真核表达载体
- ppGalNac-T10对人结直肠癌细胞株LoVo的生物学特性的影响
- 2012年
- 探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶10(ppGalNAc-T10)对人结直肠癌细胞株LoVo细胞特性的影响.ppGalNAc-T10正义真核表达载体pcDNA3.1-T10(+)、反义真核表达载体pcDNA3.1-T10(-)与空载体pcDNA3.1分别转染LoVo细胞,Western blot检测ppGalNAc-T10蛋白水平表达的变化,确定转染效果.CCK8法检测转染后各实验组细胞增殖的变化,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,穿膜实验检测细胞侵袭能力的变化.Western blot证明各实验组经转染不同ppGalNAc-T10载体后,ppGalNAc-T10蛋白表达量发生变化,转染pp-GalNAc-T10正义真核表达载体的LoVo细胞,ppGalNAc-T10的蛋白表达量增加,同时细胞的增殖受到抑制,迁移能力和侵袭能力降低;而转染ppGalNAc-T10反义真核表达载体的LoVo细胞,ppGalNAc-T10的蛋白表达量降低,细胞生长加快,迁移能力和侵袭能力增强.ppGalNAc-T10可能影响人结直肠癌细胞株LoVo细胞的增殖、迁移能力和侵袭能力.
- 冯菁华高媛陈玕彭翼飞郑文岭马文丽
- 关键词：生物学性能
- pp GalNacT-10基因真核表达载体的构建及表达
- 2012年
- 目的:构建pp GalNacT-10基因真核表达载体。方法:采用PCR方法合成含有酶切位点(XbaⅠ、EcoRⅠ)的ppGalNacT-10cDNA。构建pMD19T-GalNacT-10-ORF和pMD19T-GalNacT-10-antisense,鉴定及测序证实cD-NA片段大小和序列。双酶切目的载体pcDNA3.1后,与GalNacT-10-ORF和GalNacT-10-antisense片段进行连接,构建正义和反义真核表达载体pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense,将其分别转染293T细胞,Westernblot法检测ppGalNacT-10蛋白的表达。结果:pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-an-tisense包含大小、序列正确的pp GalNacT-10片段;ppGalNacT-10蛋白在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF的293T细胞中高表达,在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense的293T细胞中表达降低。结论:成功构建了ppGalNacT-10基因正义和反义真核表达载体。
- 高媛刘振华冯菁华李晓云孙其张宝郑文岭马文丽
- 关键词：PP真核表达载体293T细胞
