吴珺 作品数:30 被引量:83 H指数:5 供职机构: 华中科技大学同济医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中国博士后科学基金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
RNA干扰抑制土拨鼠肝炎病毒X基因表达 被引量:4 2011年 目的:研究土拨鼠肝炎病毒(WHV)序列特异性siRNA对WHV X基因表达的抑制作用。方法:以WHV全长质粒为模板PCR扩增WHV X基因,克隆到pXF3H载体构建WHX-HA融合蛋白真核表达质粒(pXF3H-WHx);合成siRNA的模板序列,克隆到siRNA表达质粒psiRNA构建shRNA表达质粒(psiWx1、psiWx2);质粒pXF3H-WHx与psiWx1、psiWx2共转染Hela细胞,Western blot检测WHV X蛋白的表达。结果:Hela细胞中WHVX蛋白的表达受siRNA的抑制,psiWx1表达的siRNA抑制90%以上的X蛋白表达,并呈剂量依赖性,但是WHV X基因靶位点中2个突变的核苷酸可使这种干扰作用消失。结论:质粒表达的siRNA序列特异性抑制WHV X蛋白的表达。 孟忠吉 吴珺 张永红 汤守兵 李东 柯昌征 陈悦关键词:土拨鼠肝炎病毒 RNA干扰 小干扰RNA 生物素化sH-2K^d-HBc复合物单体的构建及纯化 被引量:1 2006年 目的构建及纯化生物素化的sH-2Kd-HBc复合物。方法以原核表达的sH-2Kd-BSP为重链,β2m为轻链,分别纯化后与H-2Kd限制性9肽(HBc131~139)在体外采用稀释法进行共折叠复性,然后在B irA酶作用下,对折叠产物进行生物素化,形成了生物素化的H-2Kd-HBc复合物。通过凝胶过滤层析法进一步纯化生物素化的复合物单体。结果原核表达质粒pET-H-2Kd-BSP的测序结果与GenBank所公布的序列一致。利用辣根过氧化物酶标记的亲和素对折叠复性及生物素化后的复合物进行检测,证明成功获得了生物素化的sH-2Kd-HBc复合物。结论获得了纯化的生物素化sH-2Kd-HBc复合物单体,为进一步在体外构建sH-2Kd-抗原肽四聚体及制备人工抗原提呈细胞,深入研究HBV感染过程中特异性CTL应答和效应机制奠定了基础。 宋娜 郝友华 张正茂 吴珺 杨新星 丁红晖 杨东亮关键词:免疫应答 Intervention of Poly(IC) leads to HBV persistence at early stage of HBV infection in a hydrodynamic injection mouse model It still remains unclear why HBV infections establish persistence in a small number of immunocompetent adults ... 邹诗 黄顺梅 杜艳芹 余清 吴珺 杨东亮文献传递 一种包含模式识别受体中TLR3配体的纳米颗粒载体及其制备方法和应用 本发明提供了一种包含模式识别受体中TLR3配体的纳米颗粒载体CaP/PEI/poly(I:C)/SiO<Sub>2</Sub>‑SH,所述化合物包括以磷酸钙纳米颗粒为内核,内核表面接枝有PEI,内核表面吸附载有Poly(... 吴珺 邹诗 黄顺梅 杜艳芹 马赛厄斯·埃普尔 维多利亚·索科洛娃文献传递 Toll样受体介导小鼠原代肝细胞产生的天然免疫应答及其对乙型肝炎病毒复制的抑制作用 被引量:9 2011年 目的探讨肝细胞的Toll样受体(TLR)信号途径及其诱导的抗病毒免疫应答。方法分离野生型C57BL/6小鼠的原代肝细胞,定量逆转录一聚合酶链反应法检测TLR的表达。分别用TLR1~9配体刺激肝细胞并收集细胞上清液。酶联免疫吸附法检测细胞上清液内的细胞因子。病毒保护实验检测细胞上清液的抗脑膜炎心肌炎病毒因子,并将细胞上清液与HBV-Met细胞共孵育,用Southernblot法检测其对HBV复制的抑制效应。结果原代肝细胞能表达TLR1~9。与其TLR表达谱相应的,肝细胞在TLR1~9配体的刺激下均可以产生炎性细胞因子(肿瘤坏死因子α和白细胞介素6),而仅在TLRl、TLR3、TLR7和TLR9配体刺激下可产生I型干扰素(干扰素α和干扰素β)。在病毒保护实验中,TLR3和TLR7的配体可以刺激肝细胞产生大量的抗脑膜炎心肌炎病毒效应分子;而TLRl、TLR3和TLR4配体直接刺激的肝细胞上清液,以及TLR3、TLR7和TLR9配体转染刺激的肝细胞上清液,都能有效抑制HBV的复制。结论小鼠原代肝细胞有独特的TLR信号途径,并能通过TLR配体的激活产生抑制HBV复制的效应。这一发现对于制定基于TLR的抗肝脏靶向性病毒的治疗措施有指导意义。 吴珺 陈明发 夏幼辰 郭艳 林永 孙潺 张春燕 陈妍 刘慎沛 郝友华 陆蒙吉 Jorg F. Schlaak 杨东亮关键词:肝细胞 TOLL样受体 免疫 肝炎病毒 肝窦内皮细胞调节肝内适应性免疫耐受 被引量:1 2017年 肝窦内皮细胞是肝内非实质细胞的主要群体,其通过表达多种清道夫受体,模式识别受体等,参与肝脏的免疫监视。但是生理情况下和某些病毒感染及肿瘤环境下,肝窦内皮细胞通过多种机制维持肝内的免疫耐受,造成病毒持续性感染和肿瘤转移。现就肝窦内皮细胞诱导肝内CD4^+T细胞和CD8^+T细胞免疫耐受的相关机制研究做出总结。 杜艳芹 孙潺 黄顺梅 杨东亮 吴珺关键词:肝窦内皮细胞 免疫耐受 T淋巴细胞 T淋巴细胞 CD8^+ 胞壁酰二肽激活小鼠原代肝窦内皮细胞中NOD2信号 被引量:1 2014年 目的调查小鼠原代肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)中NOD2信号通路激活后产生的免疫应答效应。方法使用胶原酶灌注方法结合percoll密度梯度离心加抗小鼠LSEC免疫磁珠分离纯化小鼠LSEC。定量PCR检测小鼠原代LSEC NOD1和NOD2 mRNA表达水平,同时给胞壁酰二肽刺激小鼠原代LSEC;定量PCR检测NOD2、RIP2、TNF-α和IL-6mRNA表达水平;定量ELISA检测细胞上清IL-6和TNF-α蛋白产量。结果小鼠原代LSEC中NOD2基础表达水平相对于NOD1基础表达水平较低。胞壁酰二肽刺激LSEC后诱导NOD2及其下游分子RIP2表达水平上调,接着诱导产生IL-6效应分子,而没有诱导产生TNF-α等其它细胞因子和趋化因子。结论胞壁酰二肽能够激活小鼠LSEC中NOD2介导的信号通路,并诱导产生IL-6效应分子,可能在维持肝脏内环境稳定中发挥着重要作用。 陈明发 孙潺 林永 夏幼辰 杨东亮 吴珺关键词:NOD2 肝窦内皮细胞 胞壁酰二肽 信号通路 四种肝细胞系天然免疫相关分子的表达及HBV对其表达的影响 2011年 目的探讨四种肝细胞系Huh7、HepG2、HepG2.2.15和L02天然免疫相关分子的表达情况及HBV对其表达的影响。方法提取Huh7、HepG2、HepG2.2.15和L02四种肝细胞及转染后Huh7、HepG2和HepG2.2.15细胞mRNA,逆转录合成cDNA,采用PCR法检测天然免疫相关分子的表达情况。结果四种细胞均能表达TLRs家族的TLR1、TLR3、TLR4、TLR9,NLRs家族的NOD1和RLRs家族的RIG1等天然免疫相关分子;HepG2和Huh7转染HBV可复制性克隆后出现MDA5和A20的表达下调。结论四种肝细胞系均能表达一系列天然免疫相关分子,不同肝细胞系间表达存在一定的差异。HBV瞬时转染和稳定表达能不同程度地影响这些天然免疫相关分子的表达水平。 刘敏 郝友华 丁红晖 喻涛 吴珺 徐春利 陆蒙吉 杨东亮关键词:肝细胞系 乙型肝炎病毒 树鼩(Tupaia belangeri)ISG15分子全长克隆及分子生物学功能分析 2014年 目的对丙型病毒性肝炎(hepatitis C virus,HCV)小动物模型树嗣的干扰素刺激基因15(interferon stimulated gene15,ISG15)分子的全长eDNA序列进行克隆及分子生物学功能分析,为树晌模型在HCV感染天然免疫中的研究提供分子生物学基础。方法根据Genbank中灵长类及其他哺乳类动物ISG15分子序列保守区设计引物,使用SmarterRace方法扩增树购ISG15全长序列。在序列两端设计特异性引物,引入酶切位点,进行全长片段扩增。全长PCR产物纯化回收后连接至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD18-T-tbISG15。对重组质粒进行酶切鉴定、测序。对序列进行同源性及种系进化,同时使用SWISSMODEL同源建模方法进行蛋白二级、三级结构预测及功能分析。结果获得树购ISG15全长序列共687bp,编码157个氨基酸。树晌ISG15与其他哺乳动物ISG15高度同源,与人的核苷酸及氨基酸序列同源性分别高达72.99%及71.34%,核苷酸及氨基酸序列进化树分析均显示树嗣种系最为接近灵长类动物。结构域分析提示:树嗣ISG15主要由两个类泛素样结构域构成。软件预测所得树购ISG15三维结构与人ISG15三维结构高度相似,且具有类泛素样三维结构,动力学检测提示本试验预测的树嗣ISG15三维结构稳定,可信度高。结论对树胸ISG15的克隆进一步完善了对树购模型的认识。为进一步在体内研究HCV感染的天然免疫机制奠定了分子生物学基础。 夏幼辰 吴珺 高珊 赵西平 杨东亮关键词:树鼩 丙型病毒性肝炎 天然免疫 一种包含模式识别受体中TLR3配体的纳米颗粒载体及其制备方法和应用 本发明提供了一种包含模式识别受体中TLR3配体的纳米颗粒载体CaP/PEI/poly(I:C)/SiO<Sub>2</Sub>‑SH,所述化合物包括以磷酸钙纳米颗粒为内核,内核表面接枝有PEI,内核表面吸附载有Poly(... 吴珺 邹诗 黄顺梅 杜艳芹 马赛厄斯·埃普尔 维多利亚·索科洛娃文献传递