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周亚凤: 作品数：43 被引量：112H指数：7; 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目“九五”国家科技攻关计划更多>>; 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>

合作作者

一种基于大肠杆菌碱性磷酸酶的蛋白激酶检测的方法: 本发明公开了一种基于大肠杆菌碱性磷酸酶的蛋白激酶检测的方法。根据大肠杆菌碱性磷酸酶活性中心的结构特征，设计并构建大肠杆菌碱性磷酸酶突变体，屏蔽其催化能力，保留和磷酸化底物结合的能力，使其成为一种磷酸化蛋白(短肽)通用结合...; 张先恩周亚凤李永进李炜毕利军张治平; 文献传递

MutL融合蛋白的高效表达及其伴侣功能研究(英文)被引量：1: 2004年; DNA错配修复蛋白MutL和其它的修复蛋白相互作用来共同完成大肠杆菌甲基介导的错配修复过程 .为研究修复蛋白MutL的体外生物功能构建了融合蛋白Trx His6 Linkerpeptide MutL(THLL)的表达载体并使其高效表达及易于纯化 .mutL基因片段是以E .coliK 12基因组为模板经PCR扩增获得 ,并通过基因的体外拼接成功构建了融合蛋白THLL表达载体pET32a linkerpeptide mutL .重组菌株E .coliAD4 94 (DE3) pET32a linkerpeptide mutL经过IPTG的诱导表达了融合蛋白THLL .收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS PAGE分析 ,结果表明有一与预期分子量(84kD)相应的诱导表达条带出现 ,其表达量约占全细胞蛋白的 30 %且以可溶形式存在 .利用固定化金属离子 (Ni2 +)配体亲和层析柱纯化融合蛋白THLL ,其纯度达到 90 % .通过非变性凝胶电泳分析 ,对融合蛋白THLL在DNA错配修复过程中的分子伴侣生物功能进行了系统研究 .结果表明 ,THLL能增加融合蛋白Trx His6 Linkerpeptide MutS (THLS)与含有错配碱基DNA双链的结合。; 毕利军周亚凤张先恩张治平张成刚Anthony E.G.CASS; 关键词：基因 PCR 连接肽

一种葡萄糖氧化酶的编码基因及制备方法和应用: 本发明公开了一种葡萄糖氧化酶突变体编码基因及制备方法和应用。这种高活力葡萄糖氧化酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：首先设计一对...; 周亚凤张先恩刘丹郭永超张治平; 文献传递

融合蛋白方法制备顺序酶传感器: 针对顺序酶传感器酶膜活力低、互换性差的难题,该研究以麦芽糖传感器为研究对象,提出了融合蛋白的解决方案,建立了融合蛋白技术制备顺序酶传感器的模式方法.该研究首次将融合蛋白技术引入生物传感器的研究,成功地构建了具有双酶活力的...; 周亚凤; 关键词：融合蛋白葡萄糖氧化酶糖化酶; 文献传递

金黄色葡萄球菌肠毒素C2的基因克隆、表达及其生物学活性被引量：15: 2005年; 利用PCR技术从金黄色葡萄球菌的基因组DNA中克隆SEC2全长基因,PCR产物与pGEM-T载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体pET-28a-SEC2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达成熟重组蛋白(rSEC2),纯化rSEC2蛋白并对其生物学活性进行研究. 结果表明:成功克隆了SEC2全长基因,测序证实该基因共717 bp,编码239个氨基酸,与GenBank中收录的SEC2成熟蛋白质序列完全一致,SEC2基因登录GenBank(Accession number:AY450554);构建了SEC2的表达载体pET-28a-SEC2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,可溶性的rSEC2经Ni2+亲和层析纯化达到电泳纯,纯化的rSEC2蛋白经蛋白质印迹检测,并能有效刺激人外周血单个核细胞的增殖,被rSEC2刺激的外周血单个核细胞在体外对肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用.; 徐明恺张成刚周亚凤张先恩; 关键词：金黄色葡萄球菌克隆表达生物学活性

一种高活力葡萄糖氧化酶的编码基因及制备方法和应用: 本发明公开了一种高活力葡萄糖氧化酶突变体编码基因及制备方法和应用。这种高活力葡萄糖氧化酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：首先设...; 周亚凤张先恩刘丹郭永超张治平; 文献传递

甲基对硫磷水解酶基因的高效表达及酶活性分析被引量：7: 2004年; 假单胞菌WBC 3的甲基对硫磷水解酶基因mph在大肠杆菌系统AD494(DE3) pET32a ( + )中实现了高效可溶性融合表达。表达的重组酶能够有效地被亲合层析纯化。酶学性质分析表明 ,重组酶对底物乙基对硫磷水解能力较野生酶相比有近 4倍的提高 ,对甲基对硫磷和杀螟松的水解活力无明显变化。以融合蛋白形式存在的重组酶在室温及; 刘璐璐周亚凤张治平刘虹张先恩; 关键词：有机磷水解酶硫氧还蛋白

L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性: 2004年; 为获得L 山梨糖还原酶 (SR)整个操纵子序列 ,以 pGEM 3zf(+)作为载体构建了Gluconobactersp .S6基因文库 .结合转化子在以L 山梨糖为唯一碳源培养基上的生长情况 ,利用PCR技术筛选到一个含L 山梨糖还原酶基因的阳性克隆pGEM 3zf(+) sr3/E .coli,酶切鉴定插入片断长度约 5 .0kb左右 .以 pGEM 3zf(+) sr3/E .coli质粒DNA为模板 ,扩增SR结构基因 .PCR产物经测序验证为SR基因序列后 ,与表达载体Pet32a(+)相连 ,转化宿主大肠杆菌AD4 94 (DE3)对SR基因进行表达 ,并利用重金属离子亲和层析技术对SR融合蛋白进行了纯化 ,对其酶学特性进行了研究 .结果表明 :还原型辅酶II(NADPH)是SR酶蛋白的最适电子供体 ;SR酶蛋白的最适反应pH为 7.0 ,pH为6 .5时保持稳定 ,酶活力较高 ;最适反应温度是 5 0℃ ,30℃时热稳定性较好 .SDS PAGE电泳分析 ,SR融合蛋白的Mr 在6 5× 10 3 左右 ,由此推测出天然SR的Mr 在 5 3× 10 3 左右 ,与SR基因序列推测出的分子量大小一致 .图 13表 2参; 刘耀平张丹周亚凤徐明凯张成刚; 关键词：酶学特性

一种利用生物芯片检测二恶英类化学物质的方法: 本发明公开了一种利用生物芯片检测二恶英类化学物质的方法。其步骤是：首先，在玻片上固定末端Cy5荧光标记的含DRE序列的探针，加入从小鼠肝细胞提取的胞液与2，3，7，8-TCDD的混合液，则胞液中含有的AhR/ARNT蛋白...; 周亚凤张先恩游璠黄智乔岩梅张治平; 文献传递