姜骞
- 作品数：149 被引量：403H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金黑龙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生哲学宗教更多>>
- 仙台病毒黑龙江省地方株的分离与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的自本省普通级实验动物中分离并鉴定出仙台病毒地方毒株,为建立仙台病毒血清抗体检测方法奠定基础。方法通过鸡胚尿囊腔传代自普通级小鼠肺脏分离病毒,经血凝实验、血凝阻断实验和结构基因序列测定对分离得到的病毒进行鉴定;大量繁殖病毒并通过蔗糖密度梯度离心纯化,免疫动物制备阳性血清,用标准试剂盒检测阳性血清效价。结果自150份小鼠肺脏分离到2株有血凝性的病毒,经形态学、血清学和结构基因序列测定鉴定为仙台病毒,命名为SV-HLJ。SV-HLJ与标准毒株Fushimi核蛋白基因(N)的核苷酸、氨基酸同源性分别为99·6%和99·0%。结论分离并鉴定出了仙台病毒黑龙江省地方毒株,为检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 刘怀然张龄张天聪姜骞李昌文关云涛韩凌霞司昌德管海迪曲连东
- 关键词：仙台病毒
- 仙台病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2006年
- 目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白。方法根据GenBank上发表的仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白基因序列,设计并合成一对引物,通过RT-PCR扩增出核衣壳蛋白全长cDNA序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,于37℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达,大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约60×103处出现一新蛋白带,与预期目的蛋白分子量相符。结果Western blot检测表明,表达产物能与兔抗SV阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带,表明其具有免疫原性。结论为建立以重组NP蛋白为诊断抗原检测SV奠定基础。
- 姜骞刘怀然张龄朱洪伟曲连东
- 关键词：仙台病毒基因克隆基因表达
- 慢病毒基因转移载体、其制备方法和应用
- 本发明公开了一种马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体、其构建方法及其用途。本发明载体包含：CMV/R/U5启动子、5’非翻译区引导序列、部分5’gag基因编码区序列、中央聚嘌呤序列和EIAV的Rev反应元件、CMVI...
- 韩凌霞童光志曲连东司昌德于海波孟庆文姜骞刘家森孙成群
- 兔出血病病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：11
- 2006年
- 为快速检测兔出血病病毒,参照RHDV-TP株VP60基因序列(GenBank Ac-ession AF453761),在其5′端设计一对引物,扩增片段为386 bp,建立了检测兔出血病病毒的RT-PCR检测方法。经过对反应参数的优化,确定了反应的最佳条件。该方法在含多种已知病原的病料中,可特异性检出RHDV,检测病料的最高稀释度为10-5倍,且有很好的稳定性。临床样品检测结果显示,该方法的敏感性要高于血凝抑制试验,从而建立了RHDV特异、敏感的RT-PCR检测技术,可应用于RHDV临床诊断及流行病学调查。
- 胡迎东刘怀然司昌德刘家森韩凌霞姜骞曲连东
- 关键词：RT-PCR病原学检测
- 同时检测多杀性巴氏杆菌及其荚膜A型的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用被引量：7
- 2021年
- 为建立可以同时检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其荚膜A型的快速敏感检测方法,本研究在建立的Pm kmt1基因的荧光定量PCR基础上,设计了该菌capA基因特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。本实验从荚膜A型Pm C48-1菌株中扩增了capA基因,构建了重组质粒pMDcapA;以pMD-capA重组质粒为标准品,建立的标准曲线在9.83×10^(3)拷贝/μL~9.83×10^(9)拷贝/μL内与Ct值具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9873,扩增效率(E)为1.032。建立的双重荧光定量PCR方法可以同时检测Pm及其荚膜A型,而对B型、D型Pm、鸭疫里默氏杆菌、支气管败血波氏杆菌等细菌检测结果均为阴性,具有较强的特异性;对重组质粒标准品的检测灵敏度为10^(1)拷贝/μL,高于常规PCR检测方法(10^(3)拷贝/μL)100倍具有较高的敏感性;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有较好的重复性。本实验建立的双重荧光定量PCR方法可以同时快速敏感地检测Pm及其荚膜A型,对于其临床和实验室的快速诊断具有重要意义。
- 刘本金郑亚婷许腾林姜骞刘家森康洪涛田进郭东春曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌TAQMAN探针荧光定量PCR
- 抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：9
- 2007年
- 以纯化的重组犬瘟热病毒（CDV）N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1：106、1：105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻链均为K型;Western blot和ELISA分析结果显示2株单克隆抗体均能与重组N蛋白和CDV发生反应,而与犬细小病毒及犬腺病毒等无交叉反应;ELISA叠加试验的增值结果表明两株单克隆抗体识别的抗原位点不同.特异性抗CDV-rN的单克隆抗体的获得,为进一步用于临床诊断研究奠定了基础.
- 周洁姜骞张洪英刘家森刘立奎陈洪岩韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体
- SPF巴马小型猪的培育及应用被引量：3
- 2017年
- 利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群进行了遗传学和微生物质量控制。建立了猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染巴马小型猪感染模型。扩增了巴马小型猪重要细胞因子及固有免疫相关的重要分子,从分子水平进一步证明巴马小型猪可以代替家猪进行猪病感染实验。目前建立的猪群已广泛应用在猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒等猪重要疫病防控及致病机理的研究,实现了共享利用。本项目的完成解决了实验用猪瓶颈问题,提升了动物疫病研究水平,提供了新型实验动物,实现了优质种质资源共享利用,加速了生命科学研究和生物制品产业发展,推动了农业实验动物的行业进步。
- 姜骞韩凌霞司昌德林欢高彩霞郭东春张伟刘家森曲连东
- 关键词：巴马小型猪无特定病原体
- 杯状病毒疫苗免疫猫中杯状病毒分离株的遗传变异分析被引量：4
- 2022年
- 为了解猫杯状病毒(FCV)疫苗免疫猫中FCV的感染情况及分子特征,本研究随机采集哈尔滨和大连经灭活疫苗免疫的猫口腔拭子样品29份,从中分离鉴定获得8株FCV,对分离到的病毒进行全基因组测序及同源性与遗传进化分析。全基因组序列同源性分析结果显示:8株分离病毒与国内FCV参考株的核苷酸同源性为76.1%~89.3%,与国外FCV参考株的同源性为77.1%~83.5%;8株FCV间的同源性为76.9%~97.9%,DL31株与DL37株的同源性高达97.9%;与疫苗株F4、F9、F65、255相比,8株分离病毒与其同源性在76.2%~79.8%。VP1和全基因组序列遗传进化分析显示:34株FCV可以分为2个大分支,即基因群Ⅰ和Ⅱ,8株分离病毒在两个基因群均有分布,其中分离株HRB46与韩国株12Q087-1处于同一分支,但8株FCV与疫苗株F4、F9、F65、255等均不在一个分支。将分离病毒VP1重要氨基酸位点与传统疫苗株F9比较分析,结果显示:其D区和conE区的氨基酸相对保守,但其5’高变区(5’HVR)与3’HVR的变异较大,而已有研究发现疫苗株F9在E区5’HVR的Asn-GlyThr序列(aa439~aa441)具有较强的免疫原性,8株分离株在该位点发生了1aa~3aa变异;部分B细胞抗原表位中的氨基酸也发生了突变,8株FCV在aa448~aa450这3个位点发生了连续性变异。以上结果表明FCV具有高度的遗传变异性,由此可能造成FCV疫苗免疫失败。本研究首次对FCV疫苗免疫猫开展FCV的分离鉴定,并分析了分离株与疫苗株的差异,为FCV感染的防控和疫苗的研发奠定了基础。
- 郑亚婷刘迪许鑫燕杨育鹏康洪涛姜骞杨鸣发刘家森曲连东
- 关键词：疫苗全基因组遗传进化
- 抗猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白单克隆抗体的制备及其部分特性鉴定被引量：6
- 2005年
- 以纯化的猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)重组N蛋白免疫BALB/c小鼠 ,按常规方法进行融合 ,间接ELISA方法进行筛选 ,采用有限稀释法进行细胞克隆 ,经过 3次克隆筛选 ,最终获得一株分泌抗重组TGEVN蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系 (命名为E10F10D5 ) ,其染色体平均记数为 87± 10对 ,间接ELISA检测制备的腹水效价达 1∶12 80 0 ,以全病毒为抗原对杂交瘤细胞 (E10F10D5 )产生的腹水进行Westernblot分析 ,该腹水识别病毒结构蛋白质分子量约 4 3ku 。
- 姜骞李一经
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒纯化杂交瘤单克隆抗体
- 兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2008年
- 用兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔多抗血清最佳质量浓度为4mg/L。本方法可特异性地检测出兔肝脏病料中的RHDV,纯化病毒的最低检出量为26μg/L。对已知阳性样品的检测显示,捕获ELISA检测的病毒滴度是HA试验的3～13倍。对67份可疑病料,捕获ELISA阳性检出率为62.7%,HA试验阳性检出率为55.2%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。本方法敏感性、特异性、稳定性良好,可应用于RHDV的快速、批量、特异检测。
- 秦海斌刘怀然曲连东刘家森韩凌霞姜骞李亚明杨增岐
- 关键词：单克隆抗体兔出血症
