孔杰
- 作品数：14 被引量：39H指数：4
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 双酶联合消化法培养人皮肤成纤维细胞被引量：4
- 2019年
- 目的建立一种便捷、高效的人皮肤成纤维细胞体外培养技术,获得大量高纯度原代细胞。方法取健康成年男性包皮标本,去除皮下组织,将皮肤剪成小皮片,以0.25%的胰蛋白酶溶液4 ℃消化过夜后分离去除表皮;将真皮组织剪碎,加入0.1%胶原酶Ⅱ溶液后于37 ℃ CO2孵育箱中消化3~4 h,筛网过滤,收集滤液后离心、培养。绘制细胞生长曲线,HE染色观察细胞形态,细胞免疫荧光、Western blot检测Vimentin鉴定成纤维细胞,取第3代、第6代细胞以流式细胞术检测细胞纯度。结果获得原代人皮肤成纤维细胞;细胞生长周期:0~2 d为潜伏期,2~5 d为指数生长期,之后进入平台期;细胞为梭形或星形;Vimentin表达呈阳性,鉴定为成纤维细胞;第3代、第6代成纤维细胞纯度分别为95.82%、99.51%。结论利用双酶联合消化法成功培养高纯度原代人皮肤成纤维细胞,为进一步研究奠定基础。
- 孔杰刘原君范丽云齐蔓莉王敬韩珑刘全忠
- 关键词：皮肤成纤维细胞原代培养酶消化法
- D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探被引量：5
- 2014年
- 目的获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白，并鉴定其免疫原性。方法PCR扩增目的基因，将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中，连接产物转化入大肠埃希菌DH5c~，提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定。再将重组质粒转化人大肠埃希菌BL21并诱导表达，Western印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶（GST）磁珠纯化pgp3-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫新西兰家兔，Western印迹检测抗体与pgp3蛋白的结合，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗体效价。结果克隆目的基因序列长度为795bp，与基因库中一致，Western印迹显示目的蛋白相对分子质量为54000，并得到纯化蛋白。所得兔血清可识别pgp3蛋白，ELISA检测多克隆抗体效价达1：25600。结论成功表达具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白，为进一步研究奠定基础。
- 孔杰孙毅娜赵乐然肖萌王敬李卓然刘原君刘全忠
- 关键词：衣原体沙眼重组融合蛋白质类免疫法
- 衣原体噬菌体与宿主细胞相互作用的相关研究进展
- 细菌噬菌体是一种能够感染细菌的病毒。噬菌体在宿主细胞表面有特定的受体,通过一定的吸附渗入机制进入宿主细胞,其利用宿主提供生长复制原料,宿主细胞也对其产生对抗。利用噬菌体治疗沙眼衣原体感染是一种有前景的方式。沙眼衣原体(C...
- 孔杰刘原君刘全忠
- 皮肤衰老过程中弹性蛋白的损伤及其机制研究进展被引量：1
- 2022年
- 皮肤衰老过程中弹力纤维的破坏十分显著,弹性蛋白是弹力纤维的主要成分,其代谢极其缓慢,所以各种内外因素造成的损伤容易积累且难以修复,是皮肤抗衰老中最困难的、也是最应该关注的方面之一。本文就此类损伤及其机制进行综述,以期为对抗皮肤老化提供一定思路。
- 孔杰刘全忠
- 关键词：皮肤衰老弹力纤维弹性蛋白
- 播散性复发性漏斗部毛囊炎1例
- 2018年
- 播散性复发性漏斗部毛囊炎 （Dissminateandre-currentinfundibularfolliculitis, DRIF）临床少见，国外文献中仅见于黑人，近年来发现本病在黄种人当中偶有发病，我科诊断1例该病患者，报告如下：l临床资料患者，女，39岁，主因“全身皮肤起皮疹伴瘙痒2年”于2006年10月来我院就诊。患者自2年前开始无明显诱因自觉皮肤瘙瘴，继而全身起皮疹，皮疹可逐渐消退但反复发生。夏季皮疹明显，搔抓后继发感染伴有渗出，冬季皮疹减轻但不能完全消失。
- 范丽云孔杰邵丽丽李燕刘全忠
- 关键词：复发性毛囊炎漏斗部播散性继发感染皮疹
- 我国梅毒临床面临的挑战和机遇被引量：5
- 2015年
- 我国梅毒病人众多,并且发病率逐年递增。这种形势与漏诊问题密切相关。造成漏诊的原因包括:病人就诊率低,梅毒潜伏期较长,隐性梅毒多发,很多病人因不了解自身疾病状态而继续进行性活动;梅毒皮疹表现多样,医生易误诊为其他皮肤病,或迫于紧张的医患关系未做相应化验;现行的化验方法不够合理。此外,对已确诊病人的治疗并不理想,青霉素治疗为首选,但其过敏现象普遍,其他抗生素的疗效并不确定。目前存在很多关于梅毒临床的疑惑,比如神经梅毒的确诊和治疗、潜伏梅毒的传染性及治疗方案、血清固定的处理等。梅毒诊疗的难题也是梅毒临床研究的机遇,有巨大的性病人群,研究条件、设备已不成问题,能在很多方面对梅毒诊治做出更多贡献。疾病防治方面可以借鉴美国治理性病的经验,并结合我国国情,以控制梅毒肆虐。
- 孔杰刘全忠
- 关键词：梅毒
- 喷昔洛韦联合膦甲酸钠治疗带状疱疹的回顾性分析被引量：13
- 2017年
- 目的 探讨喷昔洛韦联合膦甲酸钠治疗带状疱疹的临床疗效.方法 收集2014年1月至2016年8月在天津医科大学总医院皮肤科住院的135例带状疱疹患者临床资料,其中64例给予喷昔洛韦联合膦甲酸钠抗病毒,其余71例仅给予喷昔洛韦.整理两组患者一般资料、止疱时间、结痂时间、疼痛开始缓解时间、疼痛明显缓解时间、不良反应及是否出现带状疱疹后神经痛,并进行统计分析.结果 两组患者一般资料比较差异无统计学意义,（均P 〉0.05,数值为性别0.086、年龄0.062、发病部位0.284、治疗前病程0.387、治疗前病情评分0.225）,而止疱时间、结痂时间、疼痛开始缓解时间、疼痛明显缓解时间,联合用药组均较喷昔洛韦组短（均P〈0.001）,且带状疱疹后神经痛出现例数少（P =0.013）.两组不良反应比较差异无统计学意义（P=0.928）.结论 喷昔洛韦联合膦甲酸钠治疗带状疱疹起效快,带状疱疹后神经痛发生率低,相比单一喷昔洛韦抗病毒治疗未增加不良反应,是治疗带状疱疹的可靠手段.
- 孔杰刘原君齐蔓莉亓玉青李燕侯淑萍郑欣罗素菊邵丽丽王敬王惠平刘全忠
- 关键词：带状疱疹神经痛膦甲酸钠
- 2006年至2010年天津地区泌尿生殖道沙眼衣原体感染治疗效果的临床分析被引量：5
- 2017年
- 目的了解泌尿生殖道沙眼衣原体感染常用药的治疗效果及其5年的变化。方法2006年至2010年在天津医科大学总医院性病门诊确诊的泌尿生殖道沙眼衣原体感染者，经阿奇霉素、米诺环素、莫西沙星、克拉霉素治疗后并完成3次随访的患者2 809例，用科克阿米蒂奇趋势检验方法分析4种抗菌药物随着时间推移治疗效果的变化趋势。结果2006至2010年，阿奇霉素的治愈率分别为76.70%（79/103）、74.19%（92/124）、74.13%（106/143）、71.43%（100/140）和70.77%（92/130）；米诺环素分别为75.31%（61/81）、64.67%（97/150）、66.53%（159/239）、65.05%（188/289）和63.03%（104/165）；莫西沙星分别为88.82%（167/188）、86.23%（119/138）、82.96%（185/223）、81.19%（233/287）和81.03%（158/37）；克拉霉素分别为82.93%（34/41）、80.49%（33/41）、79.25%（42/53）、78.18%（43/55）和75.00%（18/24）。科克阿米蒂奇趋势检验示莫西沙星对泌尿生殖道沙眼衣原体的治愈率呈明显逐年下降趋势（P〈0.05），阿奇霉素、米诺环素和克拉霉素的下降趋势不明显（均P〉0.05）。结论莫西沙星的治愈率较高，但有逐年降低的趋势；阿奇霉素次之，米诺环素治愈率较低，但较稳定。克拉霉素病例数少，尚待观察。
- 邵丽丽展小飞孔杰赵乐然齐蔓莉王惠平王树椿刘全忠
- 关键词：生殖道感染抗生素疗效
- VP1Cm—一种对沙眼衣原体高效抑制蛋白的构建被引量：1
- 2020年
- 目的设计构建针对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)具有高效抑制作用的重组蛋白,为衣原体治疗抵抗探索新的解决方法。方法通过生物信息学方法设计VP1Cm蛋白的基因序列。应用基因合成的方法构建重组质粒VP1Cm-pET28a(+)并转化至大肠杆菌中。用带Ni^+的亲和树脂纯化蛋白,梯度透析复性蛋白。CCK8法测定重组蛋白对Hela细胞的毒性作用。将豚鼠嗜衣原体噬菌体PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C、蛋白VP1Cm、杆菌肽和磷酸盐缓冲溶液(PBS)分别与E型Ct标准株于室温下预孵育3 h后接种至Hela细胞,同时设置Ct感染对照组。48 h后免疫荧光染色计数包涵体。多组样本均数间比较用单因素ANOVA分析,两样本均数间比较用Bonferroni检验。结果成功表达并纯化出蛋白VP1Cm。在相同浓度时,PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C和蛋白VP1Cm对Ct的抑制率分别为76.20%、85.13%和90.01%。结论经设计过的蛋白VP1Cm对Ct的抑制效果优于PhiCPG1衣壳蛋白VP1及其功能结构域截短蛋白VP1C。
- 陈晗赵乐然尤聪孔杰邵丽丽刘全忠
- 关键词：沙眼衣原体VP1
- 运用穿梭质粒在小鼠沙眼衣原体中表达外源性基因
- 2015年
- 目的在能够转化小鼠沙眼衣原体的穿梭质粒pGFP：：CM中加入新的开放读码框，为研究衣原体单个蛋白功能奠定基础。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增质粒pGFP：：CM和新的开放读码框（包括质粒蛋白pgp4的启动子、红色荧光蛋白mCherry基因和沙眼衣原体CT579的转录终止序列），将连接产物转化至大肠埃希菌感受态Stellar中，提取质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。将重组质粒利用氯化钙法转化至无质粒的CMUT3中，荧光显微镜下观察并挑选带有荧光的转化衣原体包涵体，经过氨苄西林筛选和噬菌斑纯化后，采用间接免疫荧光染色法检测转化株CMUT3-pGFP·mCherry-CM中pgp3和glgA蛋白的表达。结果经PCR、酶切和测序鉴定后得到正确序列的重组质粒，转化CMUT3后可见含有绿色和红色荧光的衣原体包涵体。氨苄西林筛选和噬菌斑实验纯化后得到新的转化株CMUT3-pGFP-mCherry-CM。免疫荧光证实pgp3和glgA蛋白在衣原体CMUT3-pGFP-mCherry-CM和CMUT3-pGFP：：CM中表达相似。结论在质粒pGFP：：CM中成功加入开放读码框，转化衣原体后能够表达外源性基因，使衣原体转化技术能够用于衣原体蛋白质功能研究，为临床沙眼衣原体感染的防治提供新的线索。
- 刘原君孙毅娜马璟玥孔杰韩珑刘全忠
- 关键词：衣原体开放读码框基因表达
