张爱民
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：同济大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目上海市科委科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 人溶菌酶转基因山羊乳腺生物反应器的研制
- 溶菌酶 (lysozyme，LYZ) 全称1，4-β-N-溶菌酶，具有抗菌、抗病毒等功能。它广泛存在于人和动物的各种组织、体液以及某些植物和微生物中。天然的人溶菌酶(human lysozyme，hLYZ)可从人的乳汁、...
- 张爱民
- 文献传递
- 奶山羊转基因供核细胞的再饥饿对核移植胚胎发育的影响被引量：5
- 2005年
- 为提高转基因奶山羊体细胞核移植胚胎早期发育率,将经转染外源基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿培养(含0.5%FCS的DMEM)5天后分成两部分:第一部分细胞-80℃或液氮冻存,试验前复苏后直接用作供核细胞(试验组Ⅰ),或复苏后恢复培养(含10% FCS的DMEM)2-5天后再饥饿5天用作供核细胞(试验组Ⅱ);第二部分细胞作传代培养(含10% FCS的DMEM)2天后再饥饿5 天用作供核细胞(试验组Ⅲ)。将上述不同处理的供核细胞进行细胞周期与存活率的检测,并将该供核细胞移入去除遗传物质的山羊MⅡ期卵母细胞的卵周隙内,经电融合、化学激活后,将核移植(NT)胚胎经0.8%琼脂糖包理后移入临时寄母输卵管内,培养6天后回收并观察NT胚胎的早期发育。结果,试验组Ⅱ所用供核细胞中G_0/G_1期细胞所占比例及其存活率分别为95.68%、99.9%,均显著地高于试验组Ⅰ(88.66%、80%);试验组Ⅱ的桑椹及囊胚期NT胚胎的发育率(66.09%)显著地高于试验组Ⅰ(22.00%)与试验组Ⅲ(50.51%)。将以上发育的NT胚胎分别移入同步发情的受体后,35 天作B超妊娠诊断,试验组Ⅱ的受体妊娠率为45.83%,显著地高于试验组Ⅰ(20.00%)与试验组Ⅲ(9.58%)。流式细胞仪分析结果表明,饥饿后的供核细胞经冷冻,复苏后恢复培养2-5天,再经饥饿处理,能显著地提高G_0/G_1期细胞的比例及细胞存活率;应用该细胞所组建的NT胚不仅具有较高的桑椹与囊胚期发育率,而且具有较高的受体妊娠率。
- 陈建泉张爱民陈娟徐旭俊刘国辉朱敏刘明刚成国祥
- 关键词：转基因奶山羊胚胎发育化学激活同步发情
- 乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备
- 目的:制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hEPO)转基因奶山羊.
方法:采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因...
- 张爱民陈建泉刘思国沙红英徐旭俊吴友兵陈娟成国祥
- 关键词：人促红细胞生成素乳腺表达
- 文献传递
- 乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备被引量：1
- 2007年
- 目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hEPO)转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中,经Southern blot法检测有4头羊含有hEPO基因,其中3头为母羊,1头公羊于出生后20d死亡;3头转基因母羊hEPO基因的拷贝数分别为1、10、2;Western blot检测结果显示转基因羊乳中的hEPO分子质量为32kDa;MTT法检测结果表明,在泌乳10d的3只转基因羊乳汁中,每毫升乳汁中hEPO活性分别达到1.17×102IU、1.90×104IU、1.91×104IU。结论牛BLG能够调控hEPO基因在山羊乳腺中高表达,为实现其他药用蛋白在山羊乳腺中表达奠定了基础。
- 张爱民陈建泉刘思国沙红英徐旭俊吴友兵陈娟成国祥
- 关键词：奶山羊乳腺表达
- 幼龄小鼠卵泡的超数及卵母细胞同步成熟的研究被引量：1
- 2005年
- 人工合成的雌性激素己烯雌酚可以促进出生18～20日龄左右的小鼠大量卵泡同步发育(有腔卵泡),每只小鼠可获得300枚左右的未成熟卵母细胞,并在体外成熟培养16h后,90%以上的卵母细胞排放第一极体,体外受精后2细胞的分裂率达到50%～65%,受精卵经体内培养后,发育到囊胚的比例达到50%以上。以上结果表明,幼龄小鼠卵巢卵母细胞能在外源的雌性激素作用下大量同步发育,并能在体外成熟、受精与发育至囊胚期胚胎。该研究结果不仅为深入探讨哺乳动物卵母细胞发育及成熟机制奠定基础,更重要的是为大家畜提供了一个重要的卵母细胞的来源途径。
- 沙红英沈晓晖陈娟刘思国陈建泉张爱民成国祥
- 关键词：卵泡卵母细胞颗粒细胞己烯雌酚体外成熟
- 山羊MII期卵母细胞胞质支持异种间克隆胚的着床前发育(英文)
- 2008年
- 研究去核山羊(Capra hircus)体内成熟的M II期卵母细胞与异种成年的哺乳动物(包括山羊、波尔山羊、牛、塔尔羊、熊猫)及人的成纤维细胞融合形成的体细胞核移植胚胎着床前的发育能力。结果显示这些异种体细胞核移植重构胚可以完成着床前发育,并形成囊胚。种内体细胞核移植胚的融合率和囊胚发育率分别为78.67%(557/708)和56.29%(264/469);亚种间或种间体细胞核移植胚的融合率和囊胚发育率分别为:波尔山羊78.18%(541/692)、33.90%(40/118),牛70.53%(146/207)、22.52%(25/111),塔尔羊53.51%(61/114)、5.26%(3/570),熊猫79.82%(1159/1452)、8.35%(75/898),人68.76%(317/461)、5.41%(16/296)。由此结果得出以下结论:(1)山羊M II期卵母细胞胞质与供核细胞之间的亲缘性不影响两者的融合率;(2)山羊M II期卵母细胞的胞质能支持异种间体细胞核移植胚的着床前发育;(3)亲缘关系近的种间核移植胚的囊胚发育率高于亲缘关系远的种间核移植胚的。
- 徐旭俊刘国辉陈建泉陈娟沙红英吴友兵张爱民成国祥
- 关键词：山羊胞质
- 继代核移植能成倍提高来自奶山羊卵胞质体的异种间核移植重构胚的发育率(英文)
- 2007年
- 为了提高异种间核移植重构胚的发育率,本研究以体内排放的奶山羊成熟卵为供胞质的受体细胞,以人、兔、波尔山羊等的异种或亚种体细胞的原代核移植(Primary Somatic Cell Nuclear Transfer,PSCNT)重构早胚(8-16细胞期)的卵裂球作供核体,观察经亚种或异种卵胞质体短期"修饰"的核再移植产生的继代(Secondary SCNT,SSCNT)重构胚的着床前发育潜能。结果:人、兔、波尔山羊的继代桑椹/囊胚发育率均显著地高于其PSCNT胚胎(人,14.81%VS.7.79%;兔,23.53%VS.12.50%;波尔羊,55.35%VS.24.53%);这些早胚的各阶段发育时程仍遵循供核体动物正常受精卵的发育时程。结果启示:奶山羊成熟卵胞质对异种体细胞核亦具一定的去分化能力,能支持重构胚发育到囊胚;异种重构胚的发育特征是由供体核所决定的;继代核移植几乎能够成倍提高异种间重构胚的着床前发育率,提示核的去分化完全是在母型信息主导的调控之下完成的,而进一步发育的时序似乎是由核决定的;成倍延长在含母型信息主导调控环境中的时间能成倍提高SCNT重构胚的着床前发育率。
- 张爱民陈建泉沙红英陈娟徐旭俊吴友兵葛来香胡大为成国祥
- 关键词：奶山羊卵母细胞异种核移植
- 人Sox2基因的克隆表达和纯化被引量：4
- 2008年
- 应用RT-PCR方法从人胚胎干细胞中扩增出Sox2基因,构建pET28b-Sox2表达载体.用IPTG诱导转化pET28b-Sox2表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并优化表达条件为37℃IPTG0.8 mmol/L诱导4 h.以Ni-NTA亲和层析法纯化Sox2重组蛋白,对变性蛋白进行柱上和透析复性,复性后蛋白得率为0.7 mg/g湿菌重.
- 张琦忻珍桦蔡引凤高云霞沙红英刘思国陈建泉张爱民成国祥
- 关键词：SOX2原核表达纯化
