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盐穗木过氧化氢酶基因的克隆与功能分析被引量：10: 2013年; 利用同源基因克隆法,从新疆荒漠盐碱地多年生灌木盐穗木(Halostachys caspica)中克隆获得盐穗木过氧化氢酶基因(HcCAT1)。序列分析表明,HcCAT1基因开放阅读框为1 479bp,编码492个氨基酸,推测编码蛋白质的分子量为56.7kD,等电点为6.84。基因序列比对发现,HcCAT1与多种植物过氧化氢酶基因具有较高的同源性。半定量RT-PCR结果表明,HcCAT1基因受盐胁迫而上调表达。将构建的重组质粒pET32a-HcCAT1转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白His-HcCAT1的表达;SDS-PAGE和Western印迹检测显示,重组蛋白的分子量大小为77.7kD,其大小与推测的大小一致;在低温诱导下以可溶性形式表达,且表现出一定的过氧化氢酶活性。盐胁迫实验结果显示,在添加400mmol/L NaCl、400mmol/L KCl以及300mmol/L甘露醇的LB培养基中,重组质粒转化菌的生长情况和生长速率明显优于对照,表明HcCAT1可明显提高大肠杆菌的耐盐性。该研究结果将有助于从抗氧化角度认识盐生植物盐穗木的耐盐分子机理。; 彭丹张霞张富春; 关键词：盐穗木过氧化氢酶原核表达耐盐性

盐穗木Hc2a1基因的克隆及与表达分析: 2014年; 【目的】盐胁迫能够抑制植物生长。探讨盐穗木(Halostachys caspica)盐胁迫响应基因表达变化的影响,有助于阐明盐穗木的耐盐分子机理。【方法】利用RACE方法获得盐穗木Hc2a1基因全长序列,并进行生物信息学分析和基因表达检测。【结果】Hc2a1基因开放阅读框为2 277 bp,编码758个氨基酸,蛋白质分子量为87.29 KDa,理论等电点(pI)为9.32。亚细胞定位于线粒体内膜,具有一个16个氨基酸的信号肽,含多个跨膜结构域,亲水性氨基酸残基多于疏水性氨基酸残基,二级结构多为无规则卷曲。利用荧光定量PCR检测显示,在高盐浓度600 mmol/L处理不同时间条件下,随着盐胁迫时间的延长,Hc2a1的表达量逐渐上升,12h达到最高峰,随后开始下降。【结论】盐穗木Hc2a1基因编码多个C2结构域和跨膜区的蛋白质,基因表达受盐胁迫的诱导。; 苏立波艾力扎提.艾力刘柳彭丹杨艺张富春; 关键词：盐穗木克隆生物信息学分析基因表达

盐穗木盐胁迫相关基因的克隆与功能鉴定: 土壤盐渍化严重影响农业生产，据不完全统计世界上约20%的农耕地受到盐渍化影响。筛选盐生植物耐盐相关基因并研究其功能，理解植物耐盐的生理分子机制成为农业研究领域的迫切任务，而利用基因工程技术获得抗盐植物新品种是解决此问题的...; 彭丹; 关键词：盐穗木过氧化氢酶基因亚细胞定位过表达原核表达; 文献传递

水通道蛋白在植物抗逆中的功能及其调控机制被引量：5: 2017年; 水分对植物的生长和发育至关重要。水通道蛋白(aquaporin,AQP)是一种定位于细胞膜上的蛋白,能够在细胞膜上组成孔道,控制水分子在细胞的进出,从而调控植物体内的水分平衡。目前的研究表明植物水通道蛋白共有七种类型,其中最重要的是内嵌蛋白PIP。植物的水通道蛋白不仅种类多而且亚细胞定位呈现多样化。水通道蛋白的同源蛋白高度保守,常以四聚体的形式存在,具有水分子和其它小分子的转运活性,参与植物的各种生理生化过程,维持着植物根部和叶片中的水力传导率。在逆境条件下,植物的水通道蛋白可以通过响应外界逆境胁迫的信号影响基因的表达,利用信号转导通路改变通道分子的开关、活性、转运和富集,从而增强植物的抗逆性。根据植物水通道蛋白的种类、结构、转录后调控以及在抗逆中发挥的作用,本研究综述了植物水通道蛋白的进化适应的结构特点并阐述了水通道蛋白维持水分平衡作用的分子机制。; 张丽丽彭丹张冀张富春; 关键词：植物水通道蛋白水分平衡非生物胁迫

盐穗木功能未知蛋白(HcUKPP)的亚细胞定位被引量：2: 2014年; 藜科的极端盐生植物盐穗木(Halostachys caspica)的高盐胁迫抑制差减文库中有39%的功能未知蛋白(proteins with obscure features,POFs),利用亚细胞定位分析可以初步判断其可能的功能.将盐穗木的1个POF c DNA序列Hc UKPP的编码区构建至p CAMBIA1301-GFP植物表达载体上,冻融法将重组质粒p CAMBIA1301-Hc UKPP-GFP转化农杆菌EH105A,利用花序浸染法将基因导入拟南芥,经潮霉素筛选获得T1代阳性幼苗.通过激光扫描共聚焦显微镜观察转基因拟南芥植株的根部细胞.结果显示,表达GFP蛋白的对照转基因植株中,绿色荧光在细胞核、细胞膜以及细胞质中均能检测到,而表达Hc UKPP-GFP融合蛋白的转基因植株中,绿色荧光只在细胞质膜上表达,说明Hc UKPP蛋白为细胞质膜相关蛋白.本研究为深入探讨盐穗木未知蛋白的功能奠定了基础.; 彭丹张霞张富春; 关键词：盐穗木绿色荧光蛋白转基因拟南芥亚细胞定位

极端耐盐植物盐穗木脱水胁迫响应基因Rd22的克隆及表达分析被引量：4: 2013年; 目的:选择合适的标记基因用于检测胁迫处理盐穗木的有效性。方法:根据NCBI同源序列比对设计简并引物,通过RT-PCR从盐穗木(Halostachys caspica)中克隆获得盐穗木脱水胁迫响应基因Rd22(HcRd22)基因,并采用实时定量PCR技术检测其逆境胁迫下的表达规律。结果:最终扩增获得301bp盐穗木HcRd22核酸序列,NCBI和clustalwz序列比对分析表明HcRd22具有BURP结构域。400 mmol/L盐胁迫和50μmol/L ABA处理分别使HcRd22的基因表达量在处理12h上调2.5倍和3倍。结论:所克隆的HcRd22基因属于盐胁迫和ABA处理的响应基因,可作为今后研究盐穗木胁迫处理的标准基因。; 张霞常丹彭丹张富春; 关键词：盐穗木同源克隆实时定量PCR

盐穗木水通道蛋白基因的克隆与功能鉴定被引量：2: 2017年; 非生物胁迫(如盐渍和干旱)会引起植物水分代谢的紊乱,导致植物细胞水分丧失,直接抑制植物的生长发育。研究水通道蛋白(aquaporins,AQPs)在非生物胁迫下对植物生理功能的影响十分重要。本研究利用RACE技术克隆获得一个盐穗木(Halostachys caspica)水通道蛋白家族亚类质膜内嵌蛋白(plasma intrinsic protein,PIPs)基因,命名为Hc PIP1。Hc PIP1基因全长序列为1 244 bp,包含858 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,编码285个氨基酸,分子量大小约为30.6 k D。q RT-PCR检测表明Hc PIP1在盐穗木根部的表达量显著高于同化枝中,盐胁迫诱导其上调表达。在酿酒酵母INVSc1中Hc PIP1的异源过表达显著提高了重组菌的耐盐能力;和野生型植株相比过表达Hc PIP1的拟南芥能够显著缓解渗透胁迫和离子胁迫对生长的抑制,并且根长明显比野生型的长。结果表明Hc PIP1在胁迫时能够通过增加根的生长以抵御胁迫的影响。; 张冀彭丹张丽丽周莲洁张富春; 关键词：盐穗木盐胁迫水通道蛋白基因表达耐盐性分析

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彭丹