李川
- 作品数：169 被引量：360H指数：9
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 抗甲肝病毒基因工程单抗分离纯化与鉴定(英文)
- 2004年
- 为克服血源免疫球蛋白制品的不足 ,开发了抗甲肝病毒基因工程单克隆抗体anti_HAVIgG。用无血清培养基培养rCHO工程细胞株 ,上清液经过rProteinASFF亲和层析→脱盐→离子交换层析→超滤换液纯化后 ,所得anti_HAVIgG纯度达 99%以上 ,比活性约 10 0IU mg ,anti_HAVIgG活性回收率 40 %。所纯化的anti_HAVIgG分子量150kD ,等电点 8 4～ 9 3。免疫印迹实验证实anti_HAVIgG为人源全抗体分子。亲和层析介质rProteinASFF确实存在亲和配基脱落问题 ,但通过后续纯化步骤可有效除去。在亲和层析过程中加入高盐清洗步骤 ,可有效降低宿主DNA残留量水平。对样品中自由巯基含量进行了测定 ,认为非还原电泳图谱中低分子量条带是由于抗体分子内存在自由巯基引起。
- 魏敬双陶苒孙巍巍贾茜李川梁米芳
- 关键词：基因工程纯化
- 一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明公开了一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用。本发明运用噬菌体表面呈现技术，采集乙肝疫苗免疫后具有高滴度表面抗体者的外周血淋巴细胞，通过基因工程手段构建了人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体文库，并...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 乙脑/登革嵌合病毒及其应用
- 本发明提供了一种乙脑/登革嵌合病毒，其是将乙脑cDNA克隆中的prM/E基因替换为登革病毒2型的prM/E基因获得。本发明嵌合病毒经IFA及Western blot证实能够表达登革病毒的E蛋白，并且能够在C6/36细胞中...
- 李德新韦艳梁米芳李川王晓芳
- 文献传递
- 发热伴血小板减少综合征病毒灭活病毒的纯化及免疫原性初步研究被引量：2
- 2015年
- 为了解纯化后灭活发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的免疫原性,本研究通过超滤浓缩和分子筛层析相结合的方法对灭活的SFTSV进行纯化,采用Western blot和SDS-PAGE对灭活病毒的纯化样品进行分析和鉴定,采用双抗夹心ELISA方法对其中糖蛋白(Glycoprotein,GP)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)的抗原含量进行检测。浓缩纯化的SFTSV灭活病毒,经电镜观察并通过BCA法测定其总蛋白浓度。然后,将纯化的灭活SFTSV按两种不同的免疫程序免疫新西兰兔,评价免疫原性和比较免疫效果。结果显示,SFTSV灭活并超滤浓缩后,分子筛层析可观察到两个洗脱峰,其中之一为灭活病毒颗粒,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法分析均可检测到GP和NP抗原,而另一洗脱峰主要成分则为NP。浓缩后的纯化病毒纯度达90%以上,总蛋白浓度约为1.1mg/mL,且具有典型的布尼亚病毒电镜形态。纯化的SFTSV灭活病毒免疫实验动物后,可在血清中检出高滴度病毒特异性IgG和中和抗体,但抗体滴度受免疫程序的影响,0d、14d和28d天三针程序免疫动物的效果明显优于0d、7d和28d免疫程序组。本研究显示了灭活SFTSV培养液中除完整病毒颗粒外,还含有大量游离的NP,经分子筛层析纯化可获得高纯度灭活病毒,同时明确了纯化的SFTSV灭活病毒具有良好的免疫原性,可诱导产生高滴度中和抗体和病毒特异IgG抗体,可为灭活病毒疫苗的进一步研究提供重要的线索。
- 李阿茜刘林张硕李川张全福梁米芳李德新
- 关键词：灭活病毒纯化免疫原性
- 中国仓鼠卵巢细胞中稳定表达发热伴血小板减少综合征病毒样颗粒新方法的研究
- 2015年
- 为了探索发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)样颗粒的高效表达方法,本研究根据布尼亚病毒装配成熟的机制,建立SFTS病毒包膜糖蛋白和核蛋白融合表达质粒,并在表达载体中引入荧光蛋白报告基因,转染中国仓鼠卵巢细胞,传代培养两代后,根据荧光蛋白表达水平,采用有限稀释法,在荧光显微镜下,人工挑选细胞集落,建立病毒样颗粒稳定表达细胞系,并通过荧光蛋白表达水平的变化,评价细胞系的稳定性,采用间接免疫荧光、免疫印迹和电子显微镜对病毒样颗粒进行分析鉴定。结果显示,融合表达的包膜糖蛋白和核蛋白可在细胞内装配形成病毒样颗粒并分泌到胞外,在无选择压力条件下筛选的细胞系能够在较长时间内保持稳定,传代40次后报告基因表达水平无明显变化。本研究显示了通过病毒结构蛋白基因的修饰,可以改进病毒样颗粒制备方法,为相关生物制品的生产技术研究提供了重要线索。
- 李建东姜晓林张全福李川梁米芳李德新
- 关键词：病毒样颗粒转染
- 寨卡病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒三重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及评价被引量：12
- 2018年
- 本研究旨在建立寨卡病毒（ZIKV virus,ZIKV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）以及基孔肯雅病毒（Chikungunya virus,CHIKV）三种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术。选用ZIKV的NS1基因、DENV的NS5蛋白基因以及CHIKV的E1蛋白基因作为靶标区域设计三组特异性引物探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法。用ZIKV、DENV、CHIKV病毒体外转录RNA和病毒细胞培养物对该方法的灵敏性、特异性、重复性等方面进行评价,最后临床样本以及模拟标本验证。结果显示：三重实时荧光定量RT-PCR检测方法扩增效率均可达到90%以上,三种病毒体外转录RNA最低检测限均低于15拷贝/PCR,病毒培养物最低检出限均低于10PFU/mL且与单重检测方法无明显差异。与其他病毒无交叉反应,变异系数均在2%以内。临床标本及模拟标本检出率均可达95%以上。本研究建立的检测寨卡病毒、登革病毒以及基孔肯雅病毒的三重实时荧光RT-PCR方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于寨卡病毒病等相关临床标本的检测。
- 龚雪蕊李阿茜刘洋李川张全福李德新梁米芳王世文
- 啮齿类动物中汉坦病毒感染血清学和病原学检测方法比较研究被引量：7
- 2019年
- 致病性汉坦病毒的宿主主要为啮齿类动物,其病毒感染状况是人间疫情发生的关键影响因素,可通过检测宿主动物标本中病毒基因组RNA、蛋白抗原及特异性抗体而进行监测。本研究利用367份鼠肺及鼠血标本,对双抗原夹心ELISA(ELISA)、实时荧光RT-PCR(RT-PCR)和免疫荧光(IFA)等三种分别检测抗体、核酸和抗原的方法进行比较评估。ELISA法检出抗体阳性鼠血标本46份,阳性率为12.53%;RT-PCR法检出病毒RNA阳性鼠肺标本28份,阳性率为7.63%;IFA检出抗原阳性鼠肺标本24份,阳性率为6.54%。宿主动物组织标本中检出汉坦病毒RNA和(或)结构蛋白抗原的标本,对应的血液标本中可检出病毒特异性抗体,100%(24/24)IFA检测阳性标本和89.3%(25/28)RT-PCR检测阳性标本对应血标本ELISA抗体检测阳性,反之亦然,检出抗体的标本基本包含了可检出抗原和RNA的标本。RT-PCR与IFA检测结果差异无显著性(χa2=0.64,P>0.05),一致性检验Kappa系数为0.71,一致性高(Z=13.66,P<0.05),首先对血标本开展基于ELISA的特异性抗体检测,可显著缩小RT-PCR或IFA法检测病毒RNA或抗原的范围(χb2=12.04,χc2=20.05,P<0.05)。本研究为宿主动物汉坦病毒感染实验室监测方案优化提供了有益的依据。
- 殷强玲谢昀张全福芜为李阿茜孙丽娜尚翠李川王世文梁米芳李德新李建东
- 关键词：汉坦病毒宿主动物实时荧光RT-PCR免疫荧光法
- 用于检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的引物探针、靶标组合、试剂盒和方法
- 本发明涉及病毒检测技术领域，具体公开了用于检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的引物探针、靶标组合、试剂盒和方法。本发明的用于分别或同时检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的实时荧光定量RT‑PCR检测的引物探针组合...
- 李建东杜珊珊李阿茜梁米芳李德新王世文黄晓霞李川王芹孙丽娜芜为
- 2004-2021年中国肾综合征出血热报告病例流行病学特征分析被引量：4
- 2023年
- 目的分析我国近年来肾综合征出血热(HFRS)报告病例流行特征,加强对该病流行现状的理解。方法从全国疾病监测信息报告管理系统获得2004—2021年HFRS病例信息,描述分析其分布动态变化特征以及病例诊断情况。结果2004—2021年全国31个省(自治区、直辖市)都有病例报告,HFRS发病总体呈下降趋势,累计报告病例224396例,死亡2068例,年均发病率约为0.93/10万,病死率0.92%。病例呈高度分散又相对集中的分布特征,发病数前10位的省份报告发病185207例,占全国总报告病例数的82.54%。发病呈春夏季峰(4—7月)、秋冬季峰(10月至次年1月)季两个发病高峰,春夏季以5月或6月为高峰,11月或12月是秋冬季发病高峰,春夏季峰占32.20%,秋冬季峰占47.85%,秋冬季峰明显高于春夏季峰。男女性病例性别比为2.93∶1,55岁以上人群发病率呈明显上升趋势,30~45岁人群发病率明显下降,14岁以下儿童病例占比出现上升趋势。职业分布仍以农民为主(占67.74%),待业和居家人群病例占比出现明显上升。结论2004—2021年,中国HFRS报告病例数逐步下降到相对低位水平,伴随局部地区发病率的显著起伏;疫情分布地域扩大,部分地区出现再发疫情;高龄人群和儿童病例占比有升高趋势,应引起关注,并制定针对性的策略和措施。
- 邓雪飞杜珊珊黄晓霞王芹李阿茜李川孙丽娜芜为李昊刘铁柱田婷婷王世文梁米芳李德新谢春李建东
- 关键词：肾综合征出血热疾病监测汉坦病毒
- 寨卡病毒RNA恒温快速扩增检测方法的建立被引量：1
- 2020年
- 2015年以来,寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染被报告和小头症之间存有关联,已有多个国家和地区报告ZIKV感染证据,我国持续面对ZIKV输入风险。为发展适用于现场的快速高效的ZIKV核酸检测方法,选取ZIKV NS1片段保守区设计特异性引物探针,经优化建立了多种功能蛋白介导的ZIKV RNA恒温快速扩增检测方法。利用所制备的ZIKV NS1片段体外转录RNA作为参考品,并与实时荧光定量RT-PCR检测结果进行比较。同时利用ZIKV细胞培养物中加入健康人血清制备的模拟临床标本进行初步验证。结果显示,建立的RNA恒温快速扩增检测方法可100%检出100拷贝/μL体外转录RNA,可在15 min以内判读,大大低于PCR的常规检测时间;用该方法检测其他相关病毒,无交叉反应。病毒滴度在(104~107 PFU/mL)之间的模拟临床病人标本可达到100%检出。本研究建立的ZIKV RNA恒温扩增快速检测方法快速、灵敏、特异,适用于ZIKV现场应急检测,为ZIKV的防控提供了重要的技术支撑。
- 朱禹李阿茜刘洋李乃哲余东阳李川李建东王世文李德新梁米芳柳燕
- 关键词：核酸检测
