李文利
- 作品数：15 被引量：54H指数：6
- 供职机构：辽宁省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科技厅科技攻关项目留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 大鼠肠巨噬细胞肿瘤坏死因子蛋白质和基因表达规律及不同药物影响的研究
- 2003年
- 陈海龙王辉李文利范琦
- 关键词：肿瘤坏死因子蛋白质基因表达药物影响
- 昆虫抗菌肽基因的合成及克隆被引量：2
- 1999年
- 设计并合成了昆虫抗菌肽（ｃｅｃｒｏｐｉｎ）Ｂ 基因，合成的抗菌肽Ｂ 基因全长１３２个碱基对，克隆到ＰＵＣ１９ 载体上，经过ＤＮＡ 序列分析证实，合成的基因序列与设计的序列完全一致。
- 范琦李文利王林美刘淑珊
- 关键词：抗菌肽基因
- 大鼠肠巨噬细胞肠上皮细胞分泌TNFa的规律及药物作用的研究
- 2007年
- 目的:本实验利用体外单独培养的肠巨噬细胞、肠上皮细胞及二者混合细胞,通过脂多糖(LPS)刺激及地塞米松(DEX)、TNFa单克隆抗体及复方清下汤作用,探讨肠巨噬细胞、肠上皮细胞的TNFa分泌及以上三种药物的影响。方法:体外培养肠巨噬细胞、肠上皮细胞及二者混合细胞,三种细胞除对照组外,都用LPS诱导,同时一部分细胞再经DEX、TNFa单克隆抗体及复方清下汤分别处理,培养6h后取上清液。应用放免法检测TNFa。结果:正常肠巨噬细胞可分泌少量的TNFa。LPS诱导组分泌显著增加,DEX、TNFa单克隆抗体及复方清下汤处理组与脂多糖诱导组相比分泌显著降低。正常肠上皮细胞可分泌少量的TNFa,但LPS诱导组与正常对照组及药物处理组与LPS诱导组之间差异无显著性。混合细胞结果与肠巨噬细胞相同。结论:肠道屏障受破坏时,门静脉血中TNFa明显增高,这主要与肠巨噬细胞在内毒素刺激下分泌增多有关,与肠上皮细胞无明显关系。DEX、TNFa单克隆抗体及复方清下汤均可抑制肠巨噬细胞分泌这三种物质。DEX、TNFa单克隆抗体及复方清下汤具有肠黏膜屏障的保护作用。
- 温志新王辉陈海龙范琦李文利
- 关键词：肠上皮细胞肠道屏障
- 生物技术在柞蚕上的应用研究
- 1996年
- 生物技术在柞蚕上的应用研究收稿日期：１９９５－１２－０５李文利李亚洁（辽宁省农业科学院大连生物技术研究所）随着分子生物学理论和技术的迅速发展，蚕的生物技术研究也取得了令人瞩目的成就。其中，家蚕和天蚕的研究比较详尽，处于领先的地位，这为柞蚕的研究提供...
- 李文利李亚洁
- 关键词：柞蚕生物技术
- 柞蚕NPV转移载体组建及外源基因在Sf9细胞、柞蚕卵巢原代细胞和蛹体中的表达被引量：12
- 1992年
- 根据对载有ApNPV核多角体蛋白基因的片段的酶谱和核苷酸序列分析结果,采用人工合成寡核苷酸引物引导的点突变方法,去掉了该基因的起始密码子(ATG突变为ATT),经系列克隆组建了pApM740转移载体,其外源基因插入位点为nt+141(BamHI)。系用多聚酶链反应(Polymerase Chain Rea-ction简称PCR)技术,分别将nt+2～+140,nt+9～+140、和nt+37～+140切掉,组建了pApM740、741、748和736转移载体,其外源基因克隆位点分别为nt+1、+8和+36(均为BamHI切点)。将IL-4、DE基因分别克隆到pApM740、741、748和736载体中,并进行了转染表达实验:(1)将载有DE基因的上述四种载体质粒DNA分别与AcNPV_(WT)DNA共转染Sf9细胞、经免疫抗体荧光检测,供试4个载体所载DE基因均得到表达;(2)将pApM741-IL_4和pApM748-IL_4重组载体质粒DNA分别与ApNPV_(WT)DNA共转染柞蚕卵巢原代细胞,待多角体出现后,用PCR法检测病毒基因,证实IL-4基因已整合到ApNPV DNA基因组中;(3)将pApM748-DE重组载体质粒DNA与ApNPV _(WT)DNA共转染柞蚕蛹获得成功。对病蛹病毒DNA进行PCR检测,证实DE基因已整合到病毒基因组中;取病蛹体液,用免疫沉淀及Western blotting方法检测DE蛋白,证实DE蛋白确已被表达。
- 张春发刘淑珊范琦王林美李文利李广泽
- 关键词：柞蚕核型多角体
- 大鼠肠巨噬细胞TNFα表达及复方大承气汤的影响被引量：6
- 2003年
- 目的:探讨体外培养的肠巨噬细胞分泌TNFα的规律及地塞米松、TNFα单克隆抗体及复方大承气汤对LPS诱导的肠巨噬细胞TNFα产生的影响。方法:体外分离培养大鼠肠巨噬细胞。设对照组、脂多糖组、地塞米松处理组、TNFα单抗处理组和复方大承气汤处理组.每组分别在3h,6h,12h和24h取上清液,用放免法检测TNFα浓度。并分别收集肠巨噬细胞,提取RNA,采用RT-PCR法相对定量TNFα mRNA。结果:肠巨噬细胞经脂多糖(LPS)诱导后,各时相TNFα分泌及TNFmRNA表达均明显增加;地塞米松、TNFα单克隆抗体及复方大承气汤处理后,各时相TNFα分泌都较脂多糖(LPS)诱导组显著下降,各处理组TNFα mRNA表达在3h时与脂多糖(LPS)诱导组比较无明显差异,6h、12h、24h,地塞米松、复方大承气汤处理组显著降低,而TNFα单克隆抗体处理组无明显差异。结论:LPS是肠巨噬细胞分泌TNFα的有效激活剂,地塞米松、复方大承气汤能从蛋白质及核酸水平抑制TNFα的产生,而TNFα单克隆抗体只能从蛋白质水平抑制TNFα的产生。
- 陈海龙王辉李文利范琦
- 关键词：TNFΑ复方大承气汤地塞米松脂多糖体外培养
- 大鼠肠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的规律及复方大承气汤影响的研究被引量：11
- 2003年
- 目的 探讨肠巨噬细胞及肠上皮细胞分泌肿瘤坏死因子 (TNF α)和一氧化氮 (NO)的规律及地塞米松、TNF α单克隆抗体及复方大承气汤的作用。 方法 体外培养肠巨噬细胞、肠上皮细胞及二者混合细胞 ,用脂多糖诱导 ,再经地塞米松、TNF α单克隆抗体及复方大承气汤分别处理。应用放免法检测TNF α ;用酶法检测NO。 结果 正常肠巨噬细胞可分泌少量的TNF α和一氧化氮 (NO)。脂多糖诱导组 ,这两种物质分泌显著增加 ,地塞米松、TNF α单克隆抗体及复方大承气汤处理组与脂多糖诱导组相比 ,这两种物质分泌显著降低。正常肠上皮细胞可分泌少量的TNF α和一氧化氮 (NO) ,但各组之间并无显著性差异。混合细胞结果与肠巨噬细胞相同。 结论 肠巨噬细胞和肠上皮细胞都是肠道屏障的重要功能细胞 ,肠巨噬细胞本身在内毒素刺激下分泌炎性介质TNF α和NO ,肠上皮细胞无明显分泌作用。地塞米松、TNF α单克隆抗体及复方大承气汤均可抑制肠巨噬细胞分泌TNF α和NO。提示在炎症反应状态下应用地塞米松、TNF
- 王辉陈海龙范琦李文利
- 关键词：肿瘤坏死因子复方大承气汤一氧化氮肠上皮细胞
- 利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白被引量：7
- 2010年
- 为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Δph/egfp+。将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-Δph/egfp+后6 d,EG-FP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定。研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异。
- 王林美张波叶博赵振军李树英李文利岳冬梅范琦
- 关键词：柞蚕蛹
- 核因子-κB在大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中的作用及不同药物的影响被引量：11
- 2007年
- 目的探讨核转录因子-kappaB（NF-κB）在急性重症胰腺炎肺损伤发病中的作用及不同药物的影响。方法经胆胰管逆行注射去氧胆酸钠复制大鼠急性重症胰腺炎肺损伤模型。采用凝胶电泳迁移率改变。（EMSA）法检测肺泡巨噬细胞中NF-κB活性,同时应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测肺泡巨噬细胞中诱生性一氧化氮合酶基因（iNOS mRNA）的表达情况,并检测一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的含量和肺组织病理学改变。结果模型组NF-κB活性增强、iNOS mRNA出现高表达,相应的TNF-a、NO、iNOS均明显高于假手术组。地塞米松和善宁可以下调NF-κB活性,减少iNOS mRNA表达,减轻肺损伤程度,而凯复定则无明显作用。结论急性重症胰腺炎肺损伤时,NF-κB活化,进而启动TNF-α、iNOS、NO大量表达,在发病中起着十分重要的作用。地塞米松和善宁可以通过调节NF-κB活化等多种途径,防止肺组织的进一步损害。
- 陈海龙李海龙李树英李文利王林美贺雪梅
- 关键词：急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞核因子-ΚB
- 一种蛋白酶、该蛋白酶的制备方法及其应用和药用剂型
- 本发明涉及一种蛋白酶、该蛋白酶的制备方法及其应用和药用剂型，从具有吐丝结茧能力的昆虫在羽化前分泌的吐出液中分离、提取出一种蛋白酶。这种具有纤溶活性的蛋白酶，具备生物活性高、稳定性良好等特点。该蛋白具有强烈的精氨酸酯酶活力...
- 李树英李文利范琦耿鹏李亚洁赵振军张波
