李永红
- 作品数：111 被引量：199H指数：8
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- 牛痘病毒GM-CSF注射液中GM-CSF活性及表达量的检测被引量：2
- 2018年
- 目的建立牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)注射液中GM-CSF活性及表达量的梯度分析法。方法采用TF-1细胞增殖法,四参数方程拟合检测不同浓度梯度样品的GM-CSF生物学活性;采用ELISA法,二次方程拟合检测不同浓度梯度样品的GM-CSF表达量。结果牛痘病毒GM-CSF注射液及标准品的浓度与GM-CSF的生物学活性呈量效依赖关系,随着GM-CSF浓度的增加,其GM-CSF的生物学活性增强,数据经四参数方程拟合后呈S型曲线,相关系数分别为0.953和0.997,将剂量反应曲线中直线部分的浓度对数和相应的吸光度值作直线回归,两回归线的斜率b之间差异无统计学意义(P>0.05);用该方法检测1批牛痘病毒GM-CSF注射液感染上清中GM-CSF活性,平均值为(181±16)GCU,变异系数为8.84%。牛痘病毒GM-CSF注射液及标准品的浓度与GM-CSF表达量呈量效依赖关系,随着稀释倍数的增加,GM-CSF的表达量也降低,采用二次方程进行拟合,r2均﹥0.99;用该方法检测1批牛痘病毒GM-CSF注射液感染上清中GM-CSF表达量,均符合表达量与感染浓度成正比升高的规律和趋势,且均>15 ng/m L。结论建立的方法稳定、可靠、适用性强,能表明病毒感染量与GM-CSF表达活性及表达量间的量效关系,对同类产品的质量控制具有借鉴意义。
- 毕华李永红韩春梅秦玺史新昌裴德宁丁有学饶春明
- 关键词：牛痘病毒粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生物学活性表达量基因治疗
- 2012年重组人干扰素α2a评价性抽验结果与质量分析
- 裴德宁付志浩杨靖清饶春明李永红郭莹丁有学韩春梅李响毕华范文红陶磊
- 关键词：重组人干扰素Α2A评价性抽验
- 人用基因治疗制品生产和质量控制的通用性技术要求被引量：4
- 2018年
- 近年来基因治疗研究的迅速发展将推动未来大量基因治疗制品进入临床试验和批准上市。如何进行规范的生产和质量控制来保证制品的安全性、有效性和可控性是研发者和监管部门面临的挑战和问题。我们参考国内外相关药典和指导原则中对基因治疗制品的要求,结合多年来在基因治疗制品质量标准复核和质量检定以及在相关质控方法研究中的经验和体会,对基因治疗制剂的生产和质量控制通用性技术要求提出相关的观点和考虑,旨在为业界及相关研发人员提供有益参考,并为2020年版《中华人民共和国药典》中基因治疗制品总论的制订提供讨论基础。
- 李永红毕华史新昌秦玺饶春明
- 关键词：药品监管
- Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒被引量：2
- 2017年
- 目的:建立Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒(RCA)。方法:首先制备高纯度的pXC1质粒参考品(含有E1基因序列),紫外吸收法定量后经过数学换算得到拷贝数;然后比较染料法和探针法的灵敏度,建立适用的Q-PCR检测方法;最后用新建Q-PCR法定量测定腺病毒基因治疗产品中的RCA。结果:pXC1质粒参考品的拷贝数初步标定为2.6×1010拷贝/μL;探针法的灵敏度比染料法高1000倍;将pXC1质粒参考品应用于Q-PCR(探针法)测定腺病毒基因治疗产品中的RCA,标准曲线回归方程为y=-1.416ln(x)+47.395,R^2=0.9966,供试品的Cq值均位于标准曲线范围内。结论:新建Q-PCR法适用于检测腺病毒基因治疗产品中的RCA,且结果准确可靠。
- 于雷李永红秦玺杨靖清饶春明
- 多角度激光光散射仪与体积排阻色谱法联用测定重组蛋白药物的相对分子质量
- 目的:采用多角度激光光散射仪与体积排阻色谱法联用(MALLS-SEC)测定多种重组蛋白药物的相对分子质量。方法:以PBS缓冲液(pH 6.8)为流动相,以体积排阻色谱蛋白柱对重组蛋白药物进行分离,紫外检测器、示差折光检测...
- 李永红王兰饶春明
- 关键词：相对分子质量
- 文献传递
- 改构溶瘤腺病毒DNA序列分析研究
- 2020年
- 目的:以改构的溶瘤腺病毒制品为研究对象,探讨DNA测序技术在基因治疗制品质量控制和质量标准制定中的作用。方法:提取并纯化一种改构溶瘤腺病毒制品的基因组DNA,对其基因组关键区段、非关键区段进行测序分析,发现变异体后应用第一代和第二代DNA测序技术进行进一步分析和检测。结果:关键区段DNA序列与理论序列一致;非关键区段DNA序列与理论序列相似度大于99.9%;发现1个高变异区段,进一步分析结果显示:缺失1个胞嘧啶(C)的变异体占比5/9(克隆/克隆);缺失2个胞嘧啶(C)的变异体占比1/9(克隆/克隆);插入1个胞嘧啶(C)的变异体占比1/9(克隆/克隆)。结论:第一代和第二代DNA测序技术虽然各有优缺点,但只要相互组合使用得当,仍然可较好地用于基因治疗制品基因组的分析和质量控制。
- 刘兰史新昌黄永兴李永红饶春明
- 利用欧洲药典方法评价国产重组人干扰素α-2原液的制品相关蛋白含量被引量：2
- 2018年
- 目的:对不同企业生产的重组人干扰素α-2原液的制品相关蛋白含量情况进行调查分析,为新版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)提高该品种质量标准提供数据支持。方法:采用欧洲药典收载的标准和方法,对全国7家企业生产的20批重组人干扰素α-2原液产品进行相关蛋白含量的检测,分析不同企业产品的质量情况。结果:经过检测分析,其中5家企业的16批产品符合欧洲药典规定,2家企业的4批产品不符合规定。20批产品的相关蛋白总含量最低为0.9%,最高为58.2%,其中含量大于3%的相关蛋白峰的数量最高为5个,单个相关蛋白峰的含量最高为19.9%。结论:建议在下一版《中国药典》的重组人干扰素α-2原液质量标准中,增加制品相关蛋白含量检测项目,全面提高产品质量。
- 李永红韩春梅裴德宁陶磊饶春明
- 关键词：高效液相色谱欧洲药典
- 实时荧光定量PCR法用于重组猿免疫缺损病毒-人色素上皮衍生因子注射液中复制型SIV的检测
- 2014年
- 目的:建立重组猿免疫缺损病毒-人色素上皮衍生因子(simian immunodeficiency virus-human pigment epithelium-derived factor,SIV-hPEDF)注射液中复制型SIV的实时定量PCR检测方法。方法:在提取重组SIV-hPEDF注射液供试品基因组RNA后,采用实时定量PCR的方法,检测供试品中的复制型SIV。结果:经过3次实验,所得TAT RNA标准品标准曲线均线性良好,线性方程为Y=-3.248lgX+38.12,相关系数为0.994;重组SIV-hPEDF注射液供试品中复制型SIV检测结果均为阴性。结论:所建立的复制型SIV实时荧光定量PCR检测方法重复性好、灵敏、准确,可用于重组SIV-hPEDF注射液中复制型SIV的检测。
- 秦玺李永红杨琦杨靖清于雷杨玉帅徐莉饶春明
- 关键词：基因治疗药物
- 重组人干扰素β1b中ox-IFN β1b含量测定
- 2018年
- 目的:建立重组人干扰素β1b(IFN β1b)中氧化型干扰素(ox-IFN β1b)的测定方法。方法:RP-HPLC色谱条件:RP-C8色谱柱(Grace Vydac,4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40℃,0.1%TFA-10%乙腈-水溶液为流动相A,0.1%TFA-乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长214 nm。结果:ox-IFN β1b峰与峰3的分离度约为4.0,理论塔板数大于20 000;6次进样的RSD小于5.0%;2个厂家共6批IFN β1b原液中均检出ox-IFN β1b,用面积归一化法计算百分含量为0.47%～0.96%。结论:新建方法可有效分离和测定不同厂家IFN β1b原液中的ox-IFN β1b,对IFN β1b质量标准的提高具有重要意义。
- 于雷韩春梅李永红陶磊裴德宁饶春明
- 关键词：相关蛋白反相高效液相色谱法
- 重组假丝酵母尿酸酶中聚合物的分析与评价被引量：1
- 2018年
- 目的:分析重组假丝酵母尿酸酶中聚合物的形成原因及其对结构功能的影响。方法:通过分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)结合多角度激光散射仪分离聚合物并测定其相对分子质量;将含有聚合物的蛋白进行还原及非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),确定聚合物的形成是否与二硫键有关;通过液质联用仪鉴定聚合物中存在的二硫键;通过测定圆二色谱评价聚合物的形成对蛋白二级结构的影响;通过多角度激光散射仪测定二硫键形成对蛋白稳定性的影响;通过酶活性测定评价聚合物形成对酶活性的影响。结果:重组假丝酵母尿酸酶正常以同源四聚体的形式存在,37℃条件下可通过链间二硫键形成更高级别的聚合物,高级聚合物的形成对蛋白二级结构及稳定性的影响不大,但会降低酶活性。结论:本文综合多种手段对尿酸酶中聚合物的成因及影响进行分析,测定结果可为该制品的后续研究及质量控制提供依据。
- 陶磊丁有学李永红韩春梅史新昌裴德宁饶春明
- 关键词：假丝酵母尿酸酶二硫键液相色谱质谱联用
