李薇薇
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 供职机构：复旦大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向Arnt的RNAi慢病毒载体的构建及其在HCCLM6中对Arnt基因表达的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:构建并鉴定Arnt基因特异性RNAi慢病毒载体,将其导入HCCLM6肝癌细胞中,筛选有效抑制ARNT表达的稳定细胞株。方法:针对已经筛选确定的Arnt基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pLVTHM载体连接[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]产生LV-shArnt慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shArnt载体,pCMV-dR8.74载体,pMD2G载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白表达水平测定病毒滴度,挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染HCCLM6中,经过GFP筛选得到稳定抑制Arnt表达的HCCLM6细胞株,通过RT-PCR鉴定抑制Arnt表达的效果。结果:双酶切与测序鉴定证实成功构建了ArntshRNA的慢病毒载体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了HCCLM6,并且抑制了Arnt的表达。结论:运用pLVTHM载体构建的LV-shArnt慢病毒载体可有效抑制Arnt在肝癌细胞株HCCLM6中的表达,为观察转染shRNA慢病毒表达载体的肿瘤细胞的恶性生物学行为变化奠定了实验基础。
- 梁英吴伟忠李薇薇张宁孙惠川王鲁夏景林
- 关键词：ARNTRNA干扰慢病毒载体
- 肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法
- 本发明提供了肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法。所述的肺靶向转移性人肝癌细胞株，其特征在于，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，所述细胞为分类命名：肺靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LM1，保藏编号...
- 吴伟忠陶中华李薇薇孙惠川汤钊猷樊嘉钦伦秀王鲁
- 文献传递
- 芳香烃受体核易位蛋白2基因表达对HCCLM6细胞侵袭和迁移的影响
- 2010年
- 目的探讨短发夹（sh）RNA芳香烃受体核易位蛋白（ARNT）2i慢病毒表达载体对高转移肝癌细胞HCCLM6侵袭和迁移的影响。方法以ARNT2为目的基因，化学合成4条干扰RNA，与经MluⅠ和ClaⅠ酶切后的pLVTHM载体连接过夜，筛选并鉴定阳性克隆。利用脂质体2000将ShRNA—ARNT2i，pCMV—dR8．74，pMD2G共转染293T细胞，获得shRNA—ARNT2i慢病毒颗粒，进一步感染HCCLM6靶细胞，并分为转染shRNAARNT2i组、未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组。用荧光实时定量PCR和Westernblot检测ARNT2基因的干扰效率。应用划痕和Boyden小室法观察ARNT2表达下调对HCCLM6侵袭和迁移能力的影响。用SPSS16．0统计软件对数据进行独立样本t检验和方差分析，其中多组资料两两比较采用LSD法。结果荧光实时定量PCR检测转染shRNAARNT2i组，未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组3组ARNT2mRNA相对表达值分别为0．154±0．024、0．860±0．145、1．004±0．009，F=113．14，P〈0．01，差异有统计学意义；Westernblot显示转染stLRNA—ARNT2i组ARNT2蛋白的表达量为16．45±1．6，转染阴性对照序列组ARNT2蛋白的表达量为44．56±2．07，两组比较，t=18．58，P〈0．01，差异有统计学意义；转染shRNA—ARNT2i组细胞在划痕48h后基本愈合，而转染阴性对照序列组和未转染的空白对照组划痕依然可见；转染shRNAARNT2i组穿膜细胞数为（13．25±1．04）个，而未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组的穿膜细胞数分别为（6．50±2．56）个、（6．75±2．05）个，F=29．645，P〈0．01，差异有统计学意义。结论shRNA—ARNT2i载体能显著下调HCCLM6细胞ARNT2基因和蛋白的表达，促进HCCLM6细胞的运动和侵袭。
- 李薇薇吴伟忠梁英肖春丽陶中华王鲁孙惠川樊嘉
- 关键词：肝细胞肿瘤迁移细胞
- 酪丝缬肽诱导高转移性肝癌细胞HCCLM3凋亡及机制研究
- 2009年
- 目的:观察酪丝缬肽(tyroservatide,YSV)诱导高转移性人肝癌细胞HCCLM3的凋亡,分析YSV对肿瘤细胞凋亡相关基因Bax与Bcl-2的影响。方法:建立人肝癌细胞HCCLM3的体外培养体系,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测YSV对体外培养的HCCLM3的增殖抑制作用,流式细胞仪检测对照组与YSV剂量组的凋亡率,实时定量PCR法检测YSV对肝癌细胞中Bax与Bcl-2 mRNA表达,Western blotting检测YSV对Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。结果:YSV可显著地抑制肝癌细胞HCCLM3的生长,当药物剂量10mg·L-1,作用72h时,抑制率为41.34%(P<0.05)。YSV不同浓度组随着药物作用时间的延长肝癌细胞凋亡率呈升高趋势。实时定量PCR结果显示YSV能上调促凋亡基因Bax mRNA的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA的表达。Western blotting在蛋白水平上进一步证实了实时定量PCR的结果。结论:YSV可在基因及蛋白水平上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,进而实现其诱导肝癌细胞HCCLM3的凋亡。
- 张宁王鲁梁英李薇薇陈洁孙惠川吴伟忠樊嘉
- 关键词：酪丝缬肽凋亡BAX
- 肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法
- 本发明提供了肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法。所述的肺靶向转移性人肝癌细胞株，其特征在于，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，所述细胞为分类命名：肺靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LM1，保藏编号...
- 吴伟忠陶中华李薇薇孙惠川汤钊猷樊嘉钦伦秀王鲁
- 淋巴结靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法
- 本发明提供了淋巴结靶向转移性人肝癌细胞株，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，其特征在于，所述细胞为分类命名：淋巴结靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LnM1，保藏编号：3645，具有以下生物学特性：细...
- 吴伟忠陶中华李薇薇孙惠川汤钊猷樊嘉钦伦秀王鲁
- 文献传递
- 淋巴结靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法
- 本发明提供了淋巴结靶向转移性人肝癌细胞株，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，其特征在于，所述细胞为分类命名：淋巴结靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LnM1，保藏编号：3645，具有以下生物学特性：细...
- 吴伟忠陶中华李薇薇孙惠川汤钊猷樊嘉钦伦秀王鲁
