王凤鸣
- 作品数：68 被引量：107H指数：6
- 供职机构：常州市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学哲学宗教理学更多>>
- FL转基因细胞的构建及膜型FL对U937细胞的体外促增殖效应被引量：3
- 2005年
- 目的构建稳定表达人膜型FL分子的转基因细胞株,观察膜型FL和可溶性FL对单核细胞性(M5型)白血病细胞株的体外促增殖效应。方法利用PCR方法克隆人FL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。采用RT-PCR和流式细胞仪表型分析等方法进行鉴定。MTT法分析了L929/FL细胞和可溶性FL体外刺激U937细胞的增殖效应。结果成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞L929/FL,膜型FL在体外能够有效促进U937细胞增殖,而可溶性FL并不能有效促进U937细胞的体外增殖。结论成功构建了稳定表达人膜型FL的转基因细胞,并且提示膜型FL在白血病发病机理中可能具有重要作用。
- 居颂光居颂文傅晋翔仇红霞王明元周斌王凤鸣刘彤刘高勤邱玉华张学光
- 关键词：FL转基因细胞U937细胞转基因细胞FL细胞膜型L929细胞
- GL50在单核细胞来源树突状细胞上的表达及其逆向信号对树突状细胞体外分化成熟的促进作用
- 分析了 GL50在不同分化时期 Mo-DCs 上的表达,探讨了 GL50信号对 Mo-DCs 的生物学作用。用 Ficoll 密度离心及贴壁法获得外周血单核细胞,,经 GM-CSF+IL-4常规方法诱导,并分别加入丝裂霉...
- 王凤鸣张学光
- 关键词：树突状细胞逆向信号
- 文献传递
- 人GL50基因转染细胞构建与人GL50单克隆抗体的制备及其生物学功能的鉴定
- 沈双王凤鸣张学光
- 一种提升CRISPR/Cas12a SNV检测系统特异性的方法及其在检测新冠病毒中的应用
- 本发明公开了一种提升CRISPR/Cas12a SNV检测系统特异性的方法，该方法中对crRNA进行了改造，改造方法为：将crRNA中的Spacer序列部分进行截短，并在截短后Spacer序列中的特定部位引入摆动碱基错配...
- 毛旭建王凤鸣许健蒋靖怡江锦宜李琼姚萍
- 4-1BBL介导的逆向信号对人外周血T细胞体外活化的调节作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨表达于活化T细胞上的4-1BBL分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1BBL单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖;PI/AnnexinⅤ双染法分析T细胞的凋亡;ELISA法测定培养上清中细胞因子的分泌水平;流式细胞仪分析T细胞的表型。结果单抗1F1能够有效地抑制活化T细胞的体外增殖并诱导其凋亡,同时单抗1F1还可抑制活化T细胞分泌IL-2和IFN-γ及上调T细胞表面CD95和PD-1分子的表达。结论在T细胞活化过程中,活化T细胞表达的4-1BBL分子通过逆向信号抑制其细胞因子的分泌和上调负性调控分子,进而抑制T细胞的过度活化和下调T细胞介导的免疫应答。
- 居颂文居颂光仇红霞王凤鸣王明元胡玉敏刘彤刘高勤张学光
- 关键词：4-1BBL逆向信号共刺激分子T细胞活化
- 人可诱导的共刺激分子转基因细胞的构建及其对B细胞产生抗体的影响被引量：2
- 2010年
- 目的构建含人可诱导共刺激分子(ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人ICOS基因的L929细胞株,并初步研究ICOS对B细胞产生抗体的影响。方法采用RT-PCR方法从扁桃体激活的T细胞总RNA中扩增出ICOS cDNA,双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达ICOS分子的L929细胞株;采用RT-PCR和流式细胞仪分析ICOS的分子表达,ELISA法研究ICOS信号对B细胞体外产生抗体的作用。结果成功地构建了含ICOS基因的重组逆转录病毒载体;筛选获得能稳定高表达人ICOS分子的L929转基因细胞,ICOS在PWM体外培养体系中,能有效地促进B细胞生长及IgG的分泌。结论 ICOS是CD28家族的新成员,在机体免疫应答过程中起着重要的作用。
- 刘彤王凤鸣孙静张学光
- 关键词：逆转录病毒基因转染
- 转染人GL50基因细胞株的建立及其对T细胞体外增殖与活化的促进作用
- 2011年
- 目的:建立稳定表达人协同刺激分子GL50的转基因细胞,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激效应。方法:RT-PCR法从人B淋巴瘤Daudi细胞中克隆人GL50编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体,构建pIRES2-EGFP-GL50重组子。用脂质体法转染小鼠成纤维L929细胞株,经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析GL50分子在L929/GL50细胞膜上的表达,CCK-8法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析L929/GL50转基因细胞对T淋巴细胞体外增殖与活化的影响。结果:成功建立稳定表达GL50分子的L929/GL50转基因细胞。该转基因细胞在体外能显著地促进T细胞增殖;促进T细胞的活化及其对IL-4、IL-10和IL-17等细胞因子的分泌。结论:ICOS/GL50信号在机体免疫应答过程中发挥了重要作用,GL50转基因细胞的成功构建为进一步研究ICOS/GL50分子的生物学功能奠定了物质基础。
- 沈双王凤鸣王婷陈礼文於葛华张学光
- 关键词：转基因细胞T细胞
- 转染人BTLA基因细胞株的建立及其生物学功能的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的:构建B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原,并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能。方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因,经EcoR I和BamHI双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZ-Term中构建成重组载体pEGZ-Term/BTLA。用脂质体法以重组逆转录病毒载体转染293T细胞,并用Zeocin抗生素进行长期筛选;流式细胞术分析BTLA在基因转染细胞膜上的表达;通过MTT法和流式细胞术探讨基因转染细胞在体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果:流式细胞术检测表明BTLA基因转染的293T细胞膜上能稳定地高表达人BTLA蛋白。BTLA基因转染的293T细胞和T细胞体外共培养显示,与未转染的293T细胞相比,该基因转染的细胞能部分地抑制抗人CD3单克隆抗体(mAb)刺激的T细胞增殖;流式细胞术和ELISA法分析揭示,该基因转染的细胞能够下调T细胞表面活化标志CD25的表达并降低IFN-γ和IL-10的分泌。结论:获得稳定高表达人BTLA基因转染的细胞株。该细胞株在体外对抗人CD3 mAb刺激的T细胞的增殖与活化具有部分地抑制作用。
- 王雪峰陈永井王勤杨科芳代群王凤鸣张学光
- 关键词：基因转染
- 一起急性胃肠炎暴发疫情的病原学诊断被引量：2
- 2013年
- 目的了解一起急性胃肠炎暴发疫情的病原体及其基因型别。方法通过流行病学调查,查明罹患率。对68份标本采用荧光定量PCR方法进行诺如病毒核酸检测,选取阳性标本进行RT-PCR扩增,扩增产物经序列测定分析其基因亚型并进行系统进化分析。结果在调查的1900人中,发病65例,罹患率为3.42%。2012年10月23日-25日为发病高峰。荧光定量PCR共检测出31份阳性标本,包括20份肛拭子、9份咽拭子及2份呕吐物,均为诺如病毒GⅡ型。对其中的9份高荧光信号阳性标本进行核酸序列测定,确定1株为GⅡ/4型,8株为GⅡ/3型。结论本次急性胃肠炎暴发疫情由诺如病毒GⅡ/4型及GⅡ/3型共同引起。
- 姚萍张惠力葛新黎俊宏徐辉王凤鸣
- 关键词：诺如病毒基因分型系统进化树
- 高强度聚焦超声对肝癌患者免疫功能的影响
- 2009年
- 目的:探讨高能聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)治疗后肝癌患者免疫功能的变化。方法:应用FEP-BY01型肿瘤超声治疗机对36例原发性肝癌患者进行治疗;分别取HIFU治疗前和HIFU治疗后4w外周血2ml,检测T细胞亚群CD4、CD8、CD4/CD8及NK细胞。结果:治疗后NK细胞百分数、CD4T细胞百分数、CD4/CD8比值较治疗前明显升高,而CD8T细胞百分数下降。结论:应用HIFU技术治疗原发性肝癌可以改善患者体内的细胞免疫功能。
- 高远王凤鸣冯军王宇岭
- 关键词：高强度聚焦超声肝癌免疫
