王郁杨
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家蛋鸡产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 禽主要病毒感染的比较蛋白质组学研究进展被引量：1
- 2011年
- 比较蛋白质组学是蛋白质组学的一个重要分支,现已广泛应用于生命科学和医药学的各个领域,尤其在重大疾病研究、治疗和靶向药物的筛选方面得到了更为广泛的应用。比较蛋白质组学在兽医学领域研究的重点在于揭示病毒与宿主细胞的相互作用机制和病毒的分子致病机制,为动物病毒病的诊断、防控和新型疫苗的开发提供新的思路。本文从比较蛋白质组学的研究内容和主要研究技术、在兽医学研究中的应用以及在禽主要病毒感染中的研究进展进行综述。
- 段志强王郁杨开妍胡顺林刘秀梵
- 关键词：比较蛋白质组学蛋白质组学病毒感染
- 禽主要病毒性感染的比较蛋白质组学研究进展
- 2010年
- 比较蛋白质组学是蛋白质组学的一个重要分支,现已广泛应用于生命科学和医药学的各个领域,尤其在重大疾病研究、治疗和靶向药物的筛选方面。比较蛋白质组学在兽医学领域研究的重点在于揭示病毒与宿主细胞的相互作用机制和病毒的分子致病机制,为动物病毒病的诊断、防控和新型疫苗的开发提供新的思路。本文对比较蛋白质组学的研究内容和主要研究技术、在兽医学研究中的应用以及在禽主要病毒性感染中的研究进展进行综述。
- 段志强王郁杨开妍胡顺林刘秀梵
- 关键词：比较蛋白质组学蛋白质组学病毒性感染
- 鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定被引量：5
- 2011年
- 选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响。结果表明：提取的细胞总RNA的D260 nm/D280 nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好。获得的文库容量为3×106cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3~3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%。该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具。
- 段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林王晓泉刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒鸡胚成纤维细胞酵母双杂交CDNA文库SMART技术
- 酵母双杂交系统筛选与新城疫病毒M蛋白相互作用的蛋白质
- 引言/目的新城疫病毒M蛋白在抑制宿主细胞基因的转录、翻译以及参与病毒粒子的组装和释放方面扮演着重要的角色,但宿主细胞的何种蛋白与M蛋白发生相互作用未见相关报道。本研究旨在通过酵母双杂交系统筛选与其相互作用的蛋白,为进一步...
- 段志强王郁杨开妍朱艳梅胡顺林刘秀梵
- 文献传递
- 鹅源新城疫病毒M基因的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：5
- 2012年
- 试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV)JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化E.coli BL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物;用KCl染色切胶纯化法纯化重组蛋白;采用切胶免疫小鼠的方法制备M蛋白多克隆抗体,抗体效价用间接ELISA检测,特异性用Western blot和间接免疫荧光法鉴定。结果表明,在大肠杆菌中成功表达了分子量约为55 000的重组蛋白,用切胶纯化法获得了纯度较高的重组蛋白;ELISA法检测抗体效价可达1∶102 400,Western blot和间接免疫荧光试验结果表明制备的多克隆抗体能够特异性识别纯化的M蛋白及NDV自身表达的M蛋白。
- 段志强胡娇胡增垒王郁杨朱杰胡顺林刘秀梵
- 关键词：鹅源新城疫病毒M基因原核表达多克隆抗体
- 鹅源新城疫病毒M蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定
- 2011年
- 为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酿酒酵母Y187,并验证其在酵母细胞中有无自激活和毒性作用。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-M,并证明其对报告基因无自激活作用,且对酵母细胞无毒性。表明诱饵载体pGBKT7-M可用于酵母双杂交系统寻找与M蛋白相互作用的蛋白质。
- 段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒M蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用
- 表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒的构建被引量：3
- 2009年
- 采用聚合酶链反应或反转录-聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和pMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA。rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA。
- 郦晓琼吴艳涛徐晓静王郁杨
- 关键词：马立克氏病病毒血凝素同源重组
- 新城疫病毒人工感染鹅脾脏差异表达蛋白质组初步分析被引量：3
- 2012年
- 脾脏是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染的重要靶器官,本试验旨在从分子水平上分析NDV与宿主之间的相互作用,探寻早期基因Ⅳ型强毒Herts/33和晚期基因Ⅶ型强毒JS5/05造成鹅脾脏病变差异的相关蛋白。30日龄非免疫鹅分别人工感染NDV强毒株Herts/33和JS5/05,并于感染后36、72、108h采集2个感染组和对照组的鹅脾脏,提取脾脏蛋白,以17cm、pH5～8的IPG胶条进行二维电泳,运用PDQuest 8.0.1软件对凝胶图谱进行差异蛋白分析。结果显示:与对照组相比,Herts/33感染组和JS5/05感染组脾脏组织分别有154个和148个蛋白出现了显著的差异表达,其中有86个蛋白点是不同感染组共有的差异点,包括52个感染后上调表达蛋白点,34个下调表达蛋白点;另外,有130个差异蛋白点为NDV感染鹅后不同毒株之间产生的差异表达,包括71个感染后上调表达蛋白点,59个下调表达蛋白点。基因Ⅳ型NDV强毒和基因Ⅶd亚型NDV强毒分别感染鹅后,能引起宿主脾脏组织蛋白表达谱发生不同的改变,这为进一步研究Ⅶd亚型NDV对水禽致病性增强的机制提供了重要线索。
- 王郁杨开妍段志强吴双胡顺林王晓泉刘秀梵
- 关键词：脾脏蛋白质组新城疫病毒
- 酵母双杂交系统筛选与新城疫病毒M蛋白相互作用的蛋白质
- 本研究通过酵母双杂交系统筛选得到与新城疫病毒M蛋白相互作用的8种细胞蛋白，并在酵母细胞中初步验证彼此的相互作用。指出，与M蛋白相互作用蛋白的鉴定，为深入研究M蛋白在细胞核内的功能以及在病毒复制、装配和释放过程中的作用机制...
- 段志强王郁杨开妍朱艳梅胡顺林刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒M蛋白酵母双杂交系统基因筛选蛋白鉴定
