程铖
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血管内皮祖细胞用于构建血管新生的体外三维模型被引量：2
- 2009年
- 目的采用血管内皮祖细胞(EPCs)体外构建血管新生的三维模型,证实体外获得的EPCs参与血管新生。方法(1)密度梯度离心法获取兔外周静脉血的单个核细胞,贴壁筛选法分离EPCs,于添加了Singlequotes的EBM-2培养液中扩增,对培养14 d的细胞进行免疫荧光及免疫组织化学鉴定;(2)用上述同样的方法获取EPCs,并接种于Matrigel三维基底膜胶,Singlequotes诱导,倒置相差显微镜观察血管形成。结果(1)培养7～9 d,光电显微镜可见细胞集落形成,呈现干细胞特性;贴壁细胞表达血管性假血友病因子(v WF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin),呈现内皮细胞系特征;贴壁细胞用碳化青染料(DIL)标记的乙酰化低密度脂蛋白(DIL-ac-LDL)及FITC标记的I型荆豆凝集素(FITC-UEA-1)双荧光阳性,显现EPCs的生物学特性;(2)动态观察:培养2周左右,在三维胶体中形成血管结构。结论外周血来源的EPCs,经过体外诱导后,具有成血管能力,可应用于制备体外血管新生的三维模型。
- 吕海涛韩莲花程铖李红霞周亚锋杨向军
- 关键词：内皮祖细胞血管新生三维模型
- 兔骨髓源血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定
- 目的本研究旨在从家兔骨髓中分离、培养、体外扩增血管内皮祖细胞(EPC),观察其生长分化过程并对其生物学特性进行鉴定,建立一整套稳定可重复培养方法,保证从体外获得一定数量的EPCs,从而为EPCs的进一步研究打下基础。方法...
- 程铖杨向军
- 文献传递
- 辛伐他汀对炎症损伤后血管内皮祖细胞的保护作用
- 目的研究炎症因子-肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激对血管内皮祖细胞(EPC)产生E-选择素及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活力的影响,并观察不同浓度辛伐他汀干预后对上述变化所起的作用。方法体外培养兔骨髓源血管内皮祖细胞,...
- 程铖杨向军
- 文献传递
- 穿梭质粒pCDH1-GFP-HCN 4的构建及HCN 4重组慢病毒的包装被引量：3
- 2012年
- 目的将全长约3.6 kb的HCN 4目的基因片段从pCDNA3-HCN 4质粒卸载下来,建立稳定的HCN 4重组慢病毒。方法用Eco RⅠ和XbaⅠ从pCDNA3-HCN 4质粒切下HCN 4目的片段连接到Puc19载体中,再用EcoRⅠ和HindⅢ从质粒Puc19切下目的片段并连接到pcDNA3.1(A)载体中,再用XbaⅠ单酶从质粒pcDNA3.1(A)双切到pCDH1-MCS1-EF1-copGFP中。用XbaⅠ或者Eco RⅠ鉴定,将阳性克隆质粒送上海生工测序,慢病毒的包装参照SBI的Lentivector Expression System操作手册进行。将构建好的慢病毒包装质粒混合物混合后感染293T细胞及心肌样骨髓基质干细胞。结果 (1)XbaⅠ及Eco RⅠ鉴定表明,PCR产物和克隆扩增产物的电泳结果显示该基因的大小约为3.6 kb;阳性克隆质粒测序结果与GENEBANK目的基因HCN 4序列完全相同;构建的目的基因质粒转染293细胞和原代猪骨髓间充质干细胞后,均发现有强烈的绿色荧光出现。(2)构建的慢病毒包装质粒混合物转染293细胞后,发现有强烈的绿色荧光出现,细胞感染率达90%以上。结论 (1)成功将全长HCN 4目的基因片段从pCDNA3-HCN 4质粒卸载下来,成功构建穿梭质粒pCDH1-MCS1-EF1-copGFP。(2)成功建立稳定的HCN 4重组慢病毒,该病毒载体有很高的转染效率。
- 周亚峰李红霞蔡思达程铖韩莲花赵欣杨向军
- 关键词：HCN4基因穿梭质粒慢病毒
- 5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的转化
- 2012年
- 背景:利用骨髓间充质干细胞多向分化潜能及其可在体外表达多种外源目的基因的特性,将其作为种子细胞用于未来组织器官的修复和替代已成为当前研究的热点。目前,已从人和几种动物骨髓中分离出间充质干细胞,但对猪骨髓间充质干细胞的研究报道很少。目的:建立猪骨髓间充质干细胞体外培养及其转化为心肌样细胞的方法,并探讨其生物学特性。方法:猪的骨髓间充质干细胞分离纯化后,加入5-氮胞苷诱导分化,用抗desmin、MHC、cTnI、Cx-43进行免疫细胞化学染色鉴定。结果与结论:体外培养的猪骨髓间充质干细胞经5-氮胞苷诱导后,部分间充质干细胞呈梭形,阳性表达desmin、MHC、cTnI和Cx-43。结果提示猪骨髓间充质干细胞在体外条件下经5-氮胞苷诱导后可分化为心肌样细胞。
- 周亚峰李红霞程铖韩莲花杨向军
- 关键词：心肌样细胞骨髓间充质干细胞5-氮胞苷免疫细胞化学染色干细胞
- 兔骨髓源血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的体外分离、培养、扩增血管内皮祖细胞（EPCs）,观察EPCs生长分化过程并对其生物学特性进行鉴定。方法采用密度梯度离心法从兔骨髓中提取单个核细胞,贴壁筛选法分离EPCs,于添加了Singlequotes的EBM-2培养液中扩增培养,对培养10d的细胞进行免疫荧光及免疫组织化学分析。结果培养4d,光电显微镜可见细胞集落形成,梭形贴壁细胞从集落中央以放射状向外周生长;培养7-10d,细胞集落相互连接,呈典型的“鹅卵石”样外观;2周左右可见细胞排列成条索状结构。贴壁细胞呈DIL-ac-LDL及FITC-UEA-1双荧光阳性,阳性率为（65.0±4.0）%;贴壁细胞表达vWF,VEGFR-2和VE-cadherin的阳性率分别为（90.0±2.1）%,（77.0±4.1）%和（78.1±8.2）%。结论骨髓中富含EPCs,成功建立了一整套骨髓源EPCs的分离、体外扩增培养的方法,且操作简便具有较好的可重复性。
- 程铖韩莲花吕海涛李红霞周亚峰杨向军
- 关键词：骨髓血管内皮祖细胞
- Amplatzer封堵器经导管介入治疗先天性心脏病疗效及安全性评价
- 2007年
- 目的 评价Amplatzer封堵器经导管介入治疗动脉导管未闭（PDA）、房间隔缺损（ASD）、室间隔缺损（VSD）的疗效和安全性。方法 回顾性分析应用Amplatzer封堵器经导管介入治疗的37例先天性心脏病患者临床资料，其中PDA8例，ASD23例，VSD6例，均在X线和心脏超声心动图引导下经导管植入封堵器。分别于术后1-3d复查心脏超声心动图，术后随访1个月至1年。结果 37例患者均封堵成功，手术时间为30-150min，X线下操作时间为10-60min，其中即刻封堵成功率为97．3％，一次植入成功率为94．6％，7例术前合并肺动脉高压的患者术后肺动脉压显著改善，1例术前合并心房颤动（房颤）的患者术后房颤转复为窦性心律并维持，心功能改善。1例患者术后出现一过性Ⅲ度房室传导阻滞，经有效治疗后恢复，其余患者在手术后即刻及随访过程中均未出现并发症。结论 Amplatzer封堵器经导管介入治疗PDA、ASD、VSD是一种操作简便、技术成功率和安全性高、创伤小、并发症少、疗效可靠的治疗方法。
- 程铖杨向军
- 关键词：AMPLATZER封堵器先天性心脏病
- 兔外周血源的血管内皮祖细胞体外扩增研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨从兔外周血单个核细胞中富集血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)并在体外诱导培养和扩增的方法,试图证实外周血是获得血管内皮祖细胞理想来源之一。方法密度梯度法分离兔外周血单个核细胞(MNCs),采用专用的EGM-2-MV完全培养基对单个核细胞进行诱导分化培养,动态观察细胞生长过程,并应用免疫组织化学和细胞荧光化学法分别鉴定培养细胞的内皮细胞表面标记和生物学功能。结果外周血单个核细胞经专用培养基体外诱导后,4 d左右可见多数细胞贴壁生长,9 d后可见位于中间的细胞聚集成团,4周后呈铺路石样内皮细胞形态。培养12 d细胞能表达的内皮细胞表面抗原,包括Ⅷ因子(VWF),血管内皮生长因子受体(VEGFR-2)和钙粘素(VE-cadherin)等;并能特异性吸附异硫氰酸荧光素(FITC)标记的荆豆凝集素(UEA-1),能内吞乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL),具备内皮细胞的功能。结论兔外周血中存在具有增殖分化潜能的EPCs,经过特定的体外诱导培养可以收集和扩增。
- 吕海涛杨向军程铖李红霞韩莲花周亚峰
- 关键词：外周血内皮祖细胞体外培养
- 基质干细胞转化为心肌样细胞的相关基础研究
- 杨向军周亚峰李红霞程铖韩莲花赵欣薛枫钱晓东蒋文平
- 基质干细胞转化为心肌样细胞的相关基础研究，涉及骨髓基质干细胞转化为起搏样心肌细胞和心肌样工作细胞的研究。本课题首先在体外通过细胞培养、免疫组化等方法对骨髓基质干细胞的生物学性状、5-氮胞苷诱导后组织学和形态学方面的变化进...
- 关键词：
- 关键词：基质干细胞心肌样细胞体外转化
