索涛莉
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 沉默结缔组织生长因子基因重组腺病毒的构建及功能验证被引量：2
- 2010年
- 目的:构建沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-siCTGF,并进行功能验证。方法:选取已验证的能高效沉默CTGF基因的靶序列,克隆入载体pSES-HUS中;将质粒线性化处理后与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠埃希菌BJ5183,构建重组腺病毒载体Ad-siCTGF;腺病毒载体用PacI酶切线性化处理后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒;采用"乒乓交互感染法"提高病毒滴度。用此病毒感染4T1细胞,行实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)及Western印迹法验证其沉默效果。结果:PacI酶切电泳证实重组腺病毒载体Ad-siCTGF构建成功,扩增纯化后测定重组病毒Ad-siCTGF的滴度为2.6×1010pfu/mL。感染此病毒后,4T1细胞中CTGF mRNA表达水平下调至36.27%,蛋白表达水平下调至31.56%。结论:成功构建能沉默CTGF基因的重组腺病毒,为进一步研究CTGF在肿瘤中的作用机制奠定了基础。
- 梁睿康权谭俊杰赵利华索涛莉孙艳辉金先庆罗庆
- 关键词：RNA干扰
- 靶向Hsp90β siRNA对Jurkat细胞生长抑制及化疗敏感性影响的研究
- 目的:探讨RNA干扰技术沉默Hsp90β/(Heat shock protein 90 beta/)基因表达对Jurkat细胞生长的抑制作用及化疗敏感性的影响。
方法:1.采用Real-Time PCR检测J...
- 索涛莉
- 关键词：HSP90Β基因JURKAT细胞
- 文献传递
- 靶向Hsp90β的siRNA对Jurkat细胞生长的抑制作用
- 2010年
- 目的探讨RNA干扰技术沉默热休克蛋白90β(heat shock protein90beta,Hsp90β)基因表达对Jurkat细胞生长的抑制作用。方法根据Hsp90β基因全长cDNA序列Hsp90B1(NM_003299.1),设计并构建针对Hsp90β基因的siRNA真核表达载体,应用LipofectamineTMLTX转染入Jurkat细胞后,Real-time PCR检测Hsp90βmRNA水平的变化,筛选出沉默效果最好的Hsp90βsiRNA干扰片段;Western印迹法检测Hsp90β蛋白表达水平;MTT法和流式细胞仪检测干扰前后对Jurkat细胞生长抑制作用。结果成功构建Hsp90β基因特异性的真核表达载体pSOS-Hsp90βi,转染Jurkat细胞后发现pSOS-Hsp90βi2的沉默效果最明显,Jurkat细胞Hsp90βmRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。Hsp90β基因表达沉默后,Jurkat细胞增殖明显受抑(P<0.01),实验组与对照组的细胞凋亡率分别为:(2.69±0.34)%、(3.63±0.38)%、(19.56±0.62)%,细胞凋亡率比空白对照组及转染pSOS-Hsp90βi control组明显增加,差异具有显著意义(P<0.05)。结论靶向Hsp90β的siRNA下调Hsp90β表达对人白血病Jurkat细胞有明显的生长抑制作用。
- 索涛莉徐酉华刘筱梅郭玉霞罗庆梁睿
- 关键词：HSP90Β基因JURKAT细胞实时荧光定量PCR
