罗小华
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 供职机构：长沙学院生物工程与环境科学系更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅重点项目湖南省高等学校科学研究项目长沙市科技局科技项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 鳜生长激素基因克隆、序列分析、原核表达及真核表达载体构建
- 本研究选用鳜(Siniperca chuatsi)作为实验材料,从鳜脑垂体中提取总RNA。根据GenBank上大眼鳜GH cDNA序列(收录号:AY155227)设计合成了一对鳜生长激素基因的特异性引物G1和G2,应用逆...
- 罗小华
- 关键词：生长激素原核表达WESTERN印迹真核表达载体
- 文献传递
- 翘嘴鳜生长激素cDNA克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列(收录号:AY155227)设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术从翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)脑垂体中克隆了生长激素基因(scGH)编码区序列并对其真核表达载体的构建进行了研究。结果显示:扩增片段全长615 bp,共编码204个氨基酸。该序列与GenBank上大眼鳜生长激素cDNA序列同源性为99.84%。将scGHcDNA序列定向插入pYES2/CT真核表达载体中,经过筛选、酶切和测序,证明重组子中确实插入了翘嘴鳜GH片段。
- 罗小华刘臻肖克宇张建社梅秋兰房志家鲁双庆
- 关键词：生长激素基因克隆
- 酵母及其培养物在水产养殖中的应用被引量：7
- 2008年
- 酵母及其培养物是一种新型的绿色饲料添加剂,在水产养殖中的应用非常广泛。本文就酵母及其培养物在水产养殖中的作用,参考国内外诸学者的研究成果,对其在水产养殖中的应用作一个简单的综述。
- 罗小华肖克宇
- 关键词：饲料添加剂水产养殖
- 鳜(Siniperca chuatsi)生长激素基因克隆和原核表达被引量：7
- 2010年
- 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从鳜脑垂体总RNA中扩增生长激素(GH)成熟肽基因,将成熟生长激素的cDNA定向克隆到表达载体pET-32a(+),并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明,鳜生长激素(GH)基因含开放阅读框(ORF)615个核苷酸,编码204个氨基酸,蛋白分子量为23kDa,等电点为7.07,其中酸性氨基酸占10.78%,碱性氨基酸占12.74%,疏水氨基酸为占44.12%,极性氨基酸占32.35%。在IPTG终浓度1.0mmol/L、温度37℃和培养时间4h的最佳诱导表达条件下,鳜生长激素基因(GH)在大肠杆菌中获得高效表达,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为43kDa的鳜生长激素与硫氧还蛋白(Thioredoxni,Trx)融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白58%。Western印迹分析也证实含6×His标签的重组融合蛋白能够很好地与抗6×His单抗发生反应。本研究为下一步鳜生长激素基因(GH)的生物学功能及应用奠定了基础。
- 刘臻罗小华鲁双庆谢帝芝房志家肖克宇
- 关键词：生长激素基因克隆原核表达
- 饲料酵母及其在水产动物营养中的应用被引量：9
- 2008年
- 本文主要探讨了饲料酵母的营养成分、作用机制、加工工艺及其在水产动物饲料中的应用。研究表明,饲料酵母不仅可以很好的替代鱼粉作为水产动物饲料中的蛋白源或者作为一种微生态饲料添加剂,还是一种优秀的表达外源重组蛋白的受体系统。
- 罗小华刘臻肖克宇鲁双庆
- 关键词：饲料酵母水产动物饲料水产养殖
- 鲫鱼(Carassius auratus)slc7A8基因分子特征及表达分析被引量：3
- 2010年
- 采用RT-PCR和RACE技术克隆鲫鱼slc7A8基因的全长cDNA序列,对基因序列用生物软件对基因进行生物信息分析,用Real-time PCR方法检测基因在组织中的mRNA表达丰度。结果表明,鲫鱼slc7A8cDNA全长为2709bp,包含195bp的5′UCR序列,921bp的3′UCR序列,1593bp开放阅读框,编码530个氨基酸序列;鲫鱼与斑马鱼基因同源性和编码氨基酸同源性分别为88.9%和95.5%,而与其他动物分别在70.1%-74.8%和80.6%-82.1%之间;预测编码蛋白的分子量为57719.84,等电点为4.8,对其结构预测显示该蛋白具有与哺乳动物十分相似的12个螺旋跨膜结构,跨膜区氨基酸高度保守,不同动物间的同源性都在92.2%以上;Real-time PCR检测鲫鱼组织中的mRNA表达丰度高低顺序为前肠、中肠、脑、后肠、肌肉、肾、鳃、心、肝脏。
- 熊钢刘臻王晓清鲁双庆张建社谢帝芝罗小华
- 关键词：鲫鱼CDNA分子特征
- 黄鳝微卫星标记筛选及其在不同性别表型群体中的遗传多态性被引量：5
- 2009年
- 采用FIASCO（Fastisolation by AFLP sequences containing repeats）法进行黄鳝微卫星标记筛选并将其应用于黄鳝性别差异群体的遗传变异分析。黄鳝基因组DNA经酶切、微卫星核心序列探针杂交、T载体连接并转化至DH5a中，构建黄鳝基因组微卫星富集文库。随机挑选75个阳性克隆测序，结果发现其中20个含有微卫星序列，利用软件成功设计了15对微卫星引物，经过黄鳝基因组DNA的PCR扩增及电泳检测，筛选8对多态性微卫星引物并对黄鳝3种不同性别表型群体的基因组DNA进行PCR扫描，结果显示：在8个微卫星座位中，共检测到51个等位基因，平均每个座位的等位基因数为6．375个，等位基因频率分布为0．0012～0．6033；黄鳝雌性表型群体、间性表型群体、雄性表型群体的平均遗传杂合度分别为0．6371、0．6969、0．7345；平均多态信息含量分别为0．5656、0．6416、0．6858，表明这些微卫星标记在黄鳝不同性别表型群体的遗传多态性发生了改变，它们可作为黄鳝遗传背景分析的分子标记。
- 刘臻罗小华鲁双庆匡刚桥张建社
- 关键词：FIASCO微卫星DNA遗传多态性
- 草鱼RBM cDNA克隆及序列分析
- 2009年
- 目的:克隆草鱼RNA剪切蛋白(RNAbinding motif protein-RBM)基因。方法:采用RT—PCR技术从草鱼性腺总RNA中克隆RBM基因,将其插入pBS-T载体上,经菌液PCR鉴定后进行测序并对测序结果进行生物信息分析。结果:获得草鱼RBM cDNA部分序列,大小为384bp,预测编码127个氨基酸残基;RBM基因进化与物种形态进化类似;不同物种间RBM基因一级结构保守性不高,但氨基酸序列保守性较高,且存在高度保守的氨基酸位点。结论:成功地克隆了草鱼RBM cDNA部分序列,为获RBM cDNA全长序列及后续研究提供理论基础。
- 熊钢刘臻王晓清鲁双庆刘小青罗小华
- 关键词：草鱼基因克隆
