胡计华
- 作品数:4 被引量:4H指数:1
- 供职机构:重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金:重庆市渝中区科技计划项目重庆市卫生局医学科研项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- CITED2基因CpG岛甲基化与先天性心脏病的关系被引量:3
- 2013年
- 目的研究先天性心脏病患儿CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并探讨其在该病发病中所起的作用。方法收集43例先天性心脏病患儿及2例意外死亡儿童右心耳组织,对CITED2基因进行突变筛查,同时利用生物信息学筛选,分别用亚硫酸氢盐修饰结合测序(BSP)及甲基化特异性PCR(MSP)检测CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并运用实时荧光定量PCR检测CITED2基因mRNA的表达。结果先天性心脏病组启动子区存在4例杂合子突变(均为-341 T>G),此突变对CITED2基因mRNA的表达无影响。其中BSP法成功检测到先天性心脏病组甲基化阳性率为83.3%(10/12),MSP法分析发现甲基化阳性率为84.2%(16/19),同时CITED2基因异常甲基化使其mRNA的表达明显减低(P<0.05)。结论先天性心脏病中存在CITED2基因CpG岛的异常甲基化,此甲基化下调了CITED2基因mRNA的表达。
- 许敏吴晓云李勇刚邓兵胡计华田杰
- 关键词:先天性心脏病甲基化基因突变
- 人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建和表达
- 目的:构建人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578de16)及野生型真核表达质粒,将人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578de16)及野生型真核表达质粒转染至HEK293细胞,并检测两组重组质粒...
- 胡计华
- 关键词:心脏缺损先天性心脏病真核表达质粒HEK293细胞
- CITED2基因CpG岛甲基化与先天性心脏病的关系的探究
- 目的研究先天性心脏病患儿CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并探讨其在该病发病中所起的作用。方法收集43例先天性心脏病患儿及2例意外死亡儿童右心耳组织,对CITED2基因进行突变筛查,同时利用生物信息学筛选分别...
- 许敏吴晓云李勇刚邓兵胡计华田杰
- 人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达被引量:1
- 2012年
- 目的构建人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578del6)及野生型真核表达质粒并检测两种重组质粒CITED2蛋白的表达情况。方法分别以健康儿童和CITED2基因突变的先天性心脏病患儿血细胞DNA为模板,PCR定向克隆扩增野生型和突变型CITED2编码链,分别T/A克隆至pMD19-T simple质粒上,筛选出野生型和突变型CITED2的T载体重组质粒。应用DNA重组技术将T载体重组质粒上的CITED2基因片段亚克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建pEGFP-C1-wtCITED2和pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒,并分别转染至HEK293细胞,24h后在荧光显微镜下观察质粒转染情况,48h后应用流式细胞仪检测转染效率,Western blotting检测CITED2蛋白的表达。结果成功构建了人野生型pEGFP-C1-wtCITED2和突变型pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒。转染至HEK293细胞后24h,在荧光显微镜下可观察到各转染组EGFP的表达,转染后48h流式细胞仪检测转染效率为50%~60%,Western blotting检测可见CITED2蛋白与EGFP的融合表达。结论成功构建了人转录辅助因子CITED2突变型及野生型真核表达质粒,并检测到CITED2蛋白的表达。
- 胡计华吴晓云杨晓菲郑敏邓兵田杰
- 关键词:突变真核表达质粒