蔡宁波
- 作品数：15 被引量：51H指数：4
- 供职机构：福建农林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省教育厅科技项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 钙影响花生胚胎发育/败育特异蛋白质的筛选与鉴定被引量：14
- 2007年
- 花生(Arachis hypogaea L.)缺钙造成严重空荚(胚胎败育),导致减产、降质,长期困扰南方花生生产。以大田足(施足钙)、缺(缺钙地大田本底)钙条件下花生的种植与观察为基础,利用改良的传统双向电泳、MALDI-TOF质谱和蛋白质数据库等手段,得到7个与受钙影响花生早期胚胎败育/发育有关的差异表达蛋白。4#差异蛋白是与菠菜(Spinaciaoleracea)的70 kD的叶绿体被膜休克相关蛋白高度相似的缺钙组表达上调的特异蛋白;6#差异蛋白与三叶胶(Heveabrasiliensis)的线粒体前体中ATP合酶的β链高度相似,该蛋白在缺钙幼胚缺失;7#差异蛋白在低钙组缺失,其与马铃薯(Solanum tuberosum)的肌动蛋白97或100类似。研究结果提示,受钙胁迫花生幼胚败育可能与早期幼胚内能量转化、氧化还原系统、细胞内膜以及细胞骨架功能维持相关的功能基因的表达异常有关。初步揭示了受钙影响花生胚胎败育的分子机理。
- 张君诚蔡宁波张新文庄伟建
- 关键词：胚败育钙蛋白质HYPOGAEA
- 几个植物果种皮特异表达基因的克隆
- 黄曲霉毒素污染严重影响花生品质和损害消费者的身体健康,是花生生产、加工面临的一个世界性难题.为了解决这一难题,我们提出了一个新颖的思路.通过克隆几个植物种皮或果皮特异表达基因寻找其上游启动子元件,用于抗黄曲霉基因的载体构...
- 蔡宁波
- 关键词：基因克隆启动子
- 文献传递
- 烤烟品种K326茎叶消减文库的构建及质量分析被引量：1
- 2007年
- 利用抑制性消减杂交(SSH)技术,构建烤烟品种K326的茎叶抑制性消减cDNA文库.结果表明,文库的滴度为1.76×106cfu.mL-1,重组率为75%,随机扩增480个克隆,显示插入片段长度在200-1000 bp之间,符合建库的质量标准.
- 潘建菁兰岚庄伟建蔡宁波罗帮明郭艳
- 关键词：SSHCDNA文库烟草茎叶
- 花生幼胚蛋白质双向电泳的方法与改进被引量：4
- 2005年
- 在对传统的双向电泳方法进行改进和优化的基础上,探索适合花生早期幼胚蛋白质双向电泳的方法与体系;利用该方法经考染后能稳定得到100～200个分散性较好的蛋白质斑点,分子量多集中在20 000～90 000之间.还对一些技术细节进行讨论和分析.
- 张君诚蔡晔张新文唐荣华蔡宁波庄伟建
- 关键词：双向电泳蛋白质花生
- 花生Δ12脂肪酸脱氢酶基因FAD2的克隆及反义表达载体的构建被引量：8
- 2007年
- 从花生的幼嫩叶片中提取总DNA,应用PCR方法分离到了两个FAD2基因片段,分别命名为FAD2-1和FAD2-2,将反向的FAD2-1和FAD2-2片段分别与所克隆的大豆油体蛋白基因启动子片段oleosin-a与oleosin-b相连,在中间表达载体pSPROK中构建了三个带T-nos的融合基因,进而把融合基因构建到植物表达载体pCAMBIA1300中,酶切鉴定后进行测序,结果表明,所构建的三个植物表达载体均分别带有Oleosin启动子和反义FAD2基因序列,FAD2-2的长度为593bps,与引用序列的同源性达到97%,包含一个起始密码子;FAD2-1的长度为1175bp,与引用序列的同源性达到99%,包含一个起始密码子与一个终止密码子。将构建好的植物表达载体已经转化农杆菌LBA4404并用于侵染花生外植体。
- 谢金喜蔡宁波石新国庄伟建
- 关键词：克隆反义RNA
- 应用抑制消减杂交技术构建花生果皮差异表达文库被引量：1
- 2007年
- 为构建花生果皮差异表达基因消减文库，分离花生果皮差异表达cDNA片段，本研究采用抑制消减杂交技术，以花生种仁cDNA为Driver，果皮cDNA为Tester，进行两次消减杂交和两次抑制性PCR，将第二次PCR产物与pGEM-TEasy载体相连，电击转化大肠杆菌，成功构建果皮差异表达cDNA文库。所长出菌落中89．2％为白色克隆。采用PCR法对重组子进行鉴定，发现其中单一扩增条带的克隆约占83．5％，片段大小集中分布于250～750bp之间。
- 蔡宁波潘建菁黄湘文庄伟建
- 关键词：CDNA文库抑制消减杂交
- 钙影响花生胚胎发育的MADS-box基因的克隆与初步鉴定
- 缺钙花生严重空荚(胚胎败育)导致减产降质长期困扰南方花生生产。以大田种植为基础, 开展受钙影响花生幼胚基因差异显示研究,筛选得到4个花生早期胚胎(9d)败育/正常发育的基因差异表达片段,经反向 Northern Dot ...
- 张君诚蔡宁波刘思衡李毓庄伟建
- 文献传递
- 花生种仁特异表达基因的初步筛选被引量：1
- 2007年
- 应用抑制消减杂交技术,以花生种仁cDNA作为消减杂交的试验方(tester),以花生果皮cDNA作为驱动方(driver)进行消减杂交。经过两轮抑制PCR后,将第2次PCR产物与pGEM-TEasy载体相连,电击转化大肠杆菌,成功构建种仁特异表达cDNA文库。所长出菌落中91.2%为白色克隆,采用PCR法对阳性克隆进行鉴定,发现其中单一扩增条带的克隆约占86.5%,片段大小集中分布于200～800 bp之间。用花生种仁cDNA探针和果皮cDNA探针分别对文库高密度杂交点阵膜进行反向Northern杂交检测。根据杂交结果,初步从文库中挑取出254个差异点。花生种仁特异表达基因的初步筛选,为了解花生产量、品质形成相关的重要功能基因,也为将来应用植物基因工程手段改良花生产量和品质奠定基础。
- 蔡宁波赵永莉潘建菁黄湘文张君诚庄伟建
- 关键词：花生种仁消减杂交基因筛选
- 花生果种皮发育相关特异基因的克隆和表达分析(英文)被引量：1
- 2009年
- 本实验从花生果皮种仁抑制消减文库中筛选出了一个255bp的EST序列并进行了研究。构建了花生果种皮全长cDNA库并从中筛选出该基因的全长，命名为AhPSG8。此基因全长1118bp，开放阅读框第33～833个碱基，编码266个氨基酸残基组成的多肽。由生物信息学分析表明该基因编码多个活性位点蛋白，可能与细胞内DNA的转录有关；结构分析揭示出AhPSG8具有一个跨膜区，N端是一个由20个氨基酸组成的信号肽;该基因与已发表的基因序列没有明显的同源性，为一新基因；RT—PCR研究该基因在花生中的表达，结果显示该基因在果种皮中特异表达，10～40d果皮中丰富表达，推测为与花生果种皮发育相关基因。
- 张国林蔡宁波陈华曾建斌黄湘文庄伟建
- 关键词：特异基因克隆
- 花生种子全长cDNA文库的构建和鉴定被引量：21
- 2007年
- 以花生品种闽花5号各发育时期的种子为材料分离mRNA，利用SMART技术合成双链eDNA。利用限制性内切酶sfiⅠ酶切。将经过分级分离得到的cDNA连接到质粒载体pDNR-LIB，成功构建花生种子全长cDNA文库。将所得到初级文库扩增后进行保存，检测扩增文库滴度为1．7×10^9efu／mL。PCR鉴定重组子，发现重组率接近100N，插入片段集中分布在0．5～2．0kb。插入片段的平均大小在1000bp左右，这说明该文库既可以满足低丰度基因的筛选，也可保证获得全长cDNA。
- 蔡宁波黄湘文庄伟建
- 关键词：花生种子CDNA文库SMART技术
