虞志明
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金国家自然科学基金江西省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 显微镜辅助棘突纵劈式椎板切除术治疗腰椎管狭窄症
- 目的：手术显微镜辅助下棘突正中劈开入路椎板切除术治疗腰椎管狭窄症(Lumbarcanalstenosis,LCS)的临床疗效研究。方法：收集2013年5月～2014年6月南昌大学第一附属医院应用手术显微镜辅助的棘突正中劈...
- 李虎虞志明段平国周松韩智敏曹凯
- 关键词：椎板切除术腰椎管狭窄症
- Lenke2型青少年特发性脊柱侧弯患者双肩与躯干平衡控制的关键外科技术
- 曹凯周松黄路韩智敏潘志敏罗嘉全段平国李志云虞志明
- 该课题来源于国际脊柱侧弯学会GOP项目、日本武田科学基金会、江西省科技厅人才计划、江西省青少年发展基金会项目，属外科学技术领域，该成果应用于Lenke2型青少年特发性脊柱侧弯(adolescent idiopathic ...
- 关键词：
- 关键词：特发性脊柱侧弯生物力学手术治疗
- RNA干扰细胞周期蛋白依赖激酶6基因对尤文肉瘤细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2013年
- 背景与目的:细胞周期蛋白依赖激酶6(cyclin-dependent kinase 6,CDK6)是一类丝/苏氨酸蛋白激酶,有实验报道其在尤文肉瘤细胞中呈高表达,但在尤文肉瘤细胞中的生物学功能及相关机理仍不十分清楚。本研究旨在通过研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默CDK6基因表达,探讨其对尤文肉瘤A673、SK-ES-1细胞生物学行为的影响。方法:将化学合成的CDK6-siRNA转染至A673及SK-ES-1细胞中,实时荧光定量PCR法检测转染前后细胞中CDK6 mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测转染前后细胞CDK6以及CDK6下游因子视网膜母细胞瘤基因(Rb)、磷酸化Rb(P-Rb)的蛋白表达;分别采用CCK-8法、流式细胞仪、Transwell肿瘤细胞迁移和侵袭实验检测细胞增殖、周期、凋亡、迁移以及侵袭能力的变化。结果:实时荧光定量PCR结果显示,CDK6-siRNA能够明显降低细胞CDK6的表达(P<0.01)。抑制CDK6表达后细胞的增殖速度明显减缓,细胞周期分布发生改变,G0/G1期细胞的比例上升,而S期细胞的比例下降,细胞的早期凋亡率明显升高(P<0.01)。各组细胞的迁移能力:untreated组、si-con组及si-CDK6组A673细胞的穿膜细胞数分别为(516.00±58.59)个、(534.00±124.77)个、(192.33±68.92)个,SK-ES-1细胞的穿膜数分别为(371.33±29.67)个、(363.33±60.28)个、(200.00±20.00)个,差异有统计学意义(P<0.01);各组细胞的侵袭能力:untreated组、si-con组及si-CDK6组A673细胞的穿膜细胞数分别为(251.00±42.93)个、(238.67±78.62)个、(94.67±23.03)个,SK-ES-1细胞的穿膜数分别为(310.00±35.36)个、(302.33±41.31)个、(105.00±54.08)个,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测结果显示,CDK6-siRNA能够明显降低细胞CDK6以及下游因子P-Rb的表达(P<0.01),但细胞总Rb表达量无明显变化。结论:针对CDK6基因的特异性小RNA干扰片段能够下调CDK6基因及蛋白的表达,并抑制尤文肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移,诱导其凋亡。
- 张中卒黄路虞志明陈翔韩智敏杨东詹平曹凯
- 关键词：尤文肉瘤RNA干扰
- Let-7a稳定转染尤文肉瘤细胞系的建立
- 2013年
- 目的:构建携带let-7a基因的真核表达载体,建立稳定转染该质粒的尤文肉瘤(Ewing’s sarcoma,ES)细胞株A673/let-7a、SK-ES-1/let-7a。方法:通过Gateway克隆技术,扩增attB1-K-eGFP-let-7a-1-attB2片段,与pDONR221进行BP重组反应产生入门克隆,再与母载体——pLV.Des2d.P/neo进行LR重组反应,生成目的质粒——pLV.Des2d.P/neo-EF1A>eGFP/let-7a;通过PCR及测序验证目的质粒;将携带let-7a的重组慢病毒质粒稳定转染ES细胞株A673和SK-ES-1获得A673/let-7a、SKES-1/let-7a细胞株;通过real-time PCR检测稳定转染细胞株内let-7a的表达水平,Western blot检测其靶基因CDK6的表达。结果:PCR证实获得的目的条带与理论值相符,测序分析证实携带let-7a的真核表达载体插入序列及位点正确;real-time PCR及Western blot检测结果显示,与转染空载质粒及未处理组的A673、SK-ES-1细胞株相比,稳定转染重组目的基因的A673/let-7a、SK-ES-1/let-7a细胞高表达let-7a,分别达到8.5倍(P=0.000)和6.5倍(P=0.001),差异具有统计学意义;且细胞内let-7a靶基因CDK6的表达量明显减少。结论:成功构建稳定表达let-7a的ES细胞株A673/let-7a、SK-ES-1/let-7a。
- 张中卒黄路虞志明张政韩智敏杨东詹平曹凯
- 关键词：尤文肉瘤慢病毒
- 显微镜辅助的key-hole技术治疗单节段神经根型颈椎病
- 目的：手术显微镜辅助Quadrant通道下key-hole技术治疗单节段神经根型颈椎病的临床疗效研究。方法：收集2012年8月～2014年2月南昌大学第一附属医院应用手术显微镜辅助、Quadrant通道下Key-hole...
- 虞志明段平国周松李虎韩智敏曹凯
- 关键词：QUADRANT通道神经根型颈椎病
- Let-7a对尤文氏肉瘤细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨微小RNA(microRNA,miRNA)let-7a对尤文氏肉瘤A673和SK-ES-1细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法:将成熟的let-7a片段(has-miR-let-7a mimic)转染至A673和SK-ES-1细胞中,实验分为转染组(转染has-miR-let-7a mimic)、对照组(转染has-miR-let-7a mimic-control)和未转染组(仅加入脂质体)。Has-miR-let-7a mimic转染后,应用实时荧光定量-PCR法检测细胞中let-7a的表达,CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,FCM法检测细胞的周期分布和凋亡变化,Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期依赖性激酶6(cyclin dependent kinase 6,CDK6)、Rb和磷酸化-Rb(phospho-Rb,p-Rb)蛋白的表达。结果:与未转染组和对照组比较,转染has-miR-let-7a mimic后的A673和SK-ES-1细胞中let-7a的表达水平明显上调(P<0.01),细胞增殖受到抑制(P<0.01),G0/G1期细胞所占比例上升(P<0.01),细胞的早期凋亡率明显升高(P<0.01),细胞的迁移和侵袭能力明显下降(P<0.01),细胞中CDK6和p-Rb蛋白的表达水平明显下降(P<0.01),而Rb蛋白的表达水平无明显变化。结论:Let-7a可抑制尤文氏肉瘤A673和SK-ES-1细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡,这一作用可能部分依赖于let-7a靶向抑制CDK6的表达。
- 张中卒黄路虞志明陈翔张政韩智敏杨东詹平曹凯
- 关键词：肉瘤EWING微RNAS细胞细胞
