许立华
- 作品数：167 被引量：572H指数：12
- 供职机构：宁夏大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 宁夏地区1株牛病毒性腹泻病毒2a亚型毒株的分离鉴定被引量：1
- 2023年
- 为了解宁夏地区牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的分子流行病学现状及其Npro基因的遗传变异情况,从宁夏某牛场疑似感染BVDV的9份牛血清中分离到1株可导致细胞发生病变的BVDV毒株,命名为BVDV NX-01,通过测定病毒滴度、电镜观察、病毒N^(pro)基因扩增及测序、绘制进化树、序列一致性比对等方法,对分离株进行鉴定及遗传进化分析。结果:该分离株接种MDBK细胞培养可产生明显的细胞病变,培养48 h病毒滴度达10^(7.0)TCID_(50)/0.1 mL,病毒粒子呈有囊膜的球形,直径40~60 nm;进化分析结果表明,BVDV NX-01与GS2018株有较近的亲缘关系,同属于BVDV-2a基因亚型;序列一致性比对发现,BVDV NX-01与进化树中处于同一分支的GS2018株N^(pro)基因一致性高达98.9%,进一步说明分离株BVDV NX-01属于BVDV-2a亚型。本研究结果不仅丰富了宁夏地区BVDV的分子流行病学数据,也为从分子水平研究BVDV的致病机理提供一定的理论依据。
- 赵辉梁晓珊张世虎李金荣牛耀祖许立华
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒基因亚型
- 基于牛流行热病毒G蛋白的免疫胶体金检测方法的建立
- 2024年
- 【目的】建立牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)的免疫胶体金检测方法,为牛流行热(BEF)诊断提供研究基础。【方法】构建原核表达载体pET32a-BEFV-G,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对诱导成功后的表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western blotting鉴定。以纯化后的蛋白作为特异性抗原包被检测线,以链球菌G蛋白作为金标抗原,与金纳米颗粒结合后标记在金标垫上,用羊抗鼠IgG作为质控线,通过优化不同的反应条件,建立检测BEFV的免疫胶体金检测方法,并对试纸条进行敏感性、特异性和重复性检测。【结果】SDS-PAGE结果显示,在IPTG终浓度为0.75 mmol/L时,37℃诱导8 h的条件下重组BEFV G蛋白表达量最大,且以包涵体形式表达,分子质量约为46 ku。Western blotting结果显示,浓缩纯化后的重组BEFV G蛋白具有较好的反应原性,可作为包被抗原用于免疫胶体金试纸条的建立。在质控线包被的抗体羊抗鼠IgG浓度为2 mg/mL,BEFV G蛋白包被浓度为0.6 mg/mL,喷金量为2.5μL/cm的条件下,3~5 min就可完成检测。制备的试纸条有较高的敏感性和特异性,血清稀释倍数为40倍的时候显色接近消线,且试纸条仅与BEFV阳性血清发生显色反应,与牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等其他病毒阳性血清均无交叉反应,阳性血清样本重复性试验证明试纸条的重复性较高,成功建立了免疫胶体金检测方法。【结论】本研究以原核表达的G蛋白为抗原成功制备了检测BEFV的新型免疫胶体金试纸条,该检测试纸条特异性强、稳定性好,适合用于临床快速检测BEF。
- 王雪妍靳双媛杜家伟温宏武李永琴许立华
- 关键词：G蛋白原核表达蛋白纯化免疫胶体金
- 宁夏生乳主要质量指标检测及与奶业发达国家比较分析被引量：2
- 2018年
- 为了研究宁夏地区生乳质量现状及与奶业发达国家的差异,试验对采自宁夏地区的242批生乳样品中的蛋白质、脂肪、体细胞数和菌落总数分别进行测定,并按季度对检测指标进行统计和分析,同时与国外生乳限量标准进行比较分析。结果表明：季度变化对宁夏地区生乳质量有一定的影响,生乳中蛋白质和脂肪含量一、四季度明显高于二、三季度;菌落总数第三季度明显高于其他季度;体细胞数总体表现平稳,均集中在10万～30万个/mL之间,但第三季度略高于其他三个季度;总体上一、四季度生乳质量优于二、三季度;与其他国家生乳限量标准比较,宁夏地区80%以上生乳的主要质量指标能达到欧美等发达国家标准,但蛋白质含量与奶业发达国家差距较大,有待改进。
- 周伟刘维华许立华
- 关键词：生乳质量指标
- 犬毛母质瘤的病理学观察被引量：3
- 2011年
- 毛母质瘤（pilomatricoma）是一种良性的皮肤肿瘤,来源于毛囊的毛母质细胞,由于正常毛母质的生长过程受到阻碍,其凋亡受到抑制,进而增殖、聚集而形成的一种良性上皮瘤，常单独发生，有恶变的可能。
- 张珠明汪仁莉许立华赵德明
- 关键词：病理学观察母质皮肤肿瘤毛囊
- 猪瘟兔化弱毒E2蛋白A/D区的高效表达和蛋白纯化及其应用被引量：16
- 2003年
- 本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件下,对所得的重组蛋白质进行了定量。重组蛋白质被用来包被96孔ELISA板并应用于免疫猪瘟抗体水平的测定。
- 苏小运缪德年许立华陈德胜陈溥言
- 关键词：猪瘟兔化弱毒原核表达血清抗体
- 牛呼吸道合胞体病毒主要编码蛋白研究进展被引量：6
- 2019年
- 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)是引起反刍动物呼吸道疾病的主要病毒之一,犊牛对该病毒的感染率、发病率和病死率均较高,严重危害养殖的经济效益。牛呼吸道合胞体病毒主要编码蛋白F蛋白和G蛋白上的某些抗原表位可刺激中和抗体反应,而且是BRSV唯一能够在动物模型中诱导中和抗体并产生保护性免疫应答的蛋白。N蛋白具有高度保守性,可诱导BRSV的保护性免疫,小疏水性蛋白(SH)有助于维持病毒外壳稳定性。目前,在该病的防控措施上仍然存在未解决的问题,可根据BRSV编码蛋白的不同特性与功能,研发出一种免疫效果良好、安全高效的疫苗,用以防控BRSV的感染。
- 李梦莹马小静张凯孙鑫鹏王文佳程成许立华
- 关键词：牛呼吸道合胞体病毒编码蛋白
- 日粮淀粉水平对绒山羊纤维物质消化性能的影响
- 2004年
- 9只带有瘤胃瘘管、十二指肠近端瘘管和回肠末端瘘管的内蒙古白绒山羊随机分为3组,研究了日粮精粗比(3∶7)相近的条件下,提高日粮淀粉水平对纤维物质消化性能的影响。结果表明,随日粮淀粉水平的提高,日粮纤维在胃区及全消化道消化率也随之下降,而在大肠的消化率有上升的趋势,但各组间差异均不显著(P>0.05)。
- 王玲许立华孙海洲卢德勋珊丹
- 关键词：日粮绒山羊纤维物质
- 牛呼吸道合胞体病毒实时荧光定量PCR检测的引物探针组及检测方法
- 本发明属于病毒检测技术领域，为一种牛呼吸道合胞体病毒实时荧光定量PCR检测的引物探针组及检测方法。基于该牛呼吸道合胞体病毒实时荧光定量PCR检测的引物探针组构建的PCR反应体系，在用于牛呼吸道合胞体病毒分子生物学检测时，...
- 梁晓珊 宁鹏 李昊 王雪妍许立华
- 猪生殖与呼吸综合征血清抗体重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2004年
- 以纯化的猪生殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)重组N蛋白作为包被抗原 ,通过对各项试验条件的优化 ,建立起检测PRRS血清抗体的重组N蛋白间接ELISA检测方法。用此方法检测了2 0 0份血清样品 ,并与IDEXX公司ELISA试剂盒的检测结果相比较 ,敏感性和特异性分别为 93%和95 % ,总符合率达 91%。 2种检测方法的结果之间差异不显著 (P >0 .0 5 )。试验表明 ,建立的间接ELISA检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于PRRS血清抗体的检测。
- 刘磊许立华陈溥言
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征重组N蛋白间接ELISA抗体检测
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因的克隆、测序及高效表达载体的构建
- 本试验构建了猪繁殖与呼吸综合症病毒N基因的原核高效表达载体,为本病新型诊断方法的建立创造了良好的物质条件.
- 王玲许立华王志亮苏鑫铭吴延功王长杰陈溥言
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒核衣壳蛋白基因克隆
- 文献传递
