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路新枝: 作品数：53 被引量：211H指数：9; 供职机构：中国海洋大学医药学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程农业科学更多>>

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PE GeneAmp PCR System 9600主要特点及使用: 1998年; 聚合酶链反应(PCR)是目前在生命科学领域中广为应用的技术。PE公司推出的GeneAmp PCR System9600是目前较为先进的PCR扩增仪,在温度控制、方便操作、扩展功能等方面均有独到之处。本文就该型PCR扩增仪的结构、性能特点及使用等方面进行了简要介绍。; 姚子昂路新枝马洪明; 关键词：聚合酶链式反应 DNA 基因

条斑紫菜叶状体细胞的抗生素敏感性研究被引量：17: 2002年; 为了进行条斑紫菜基因工程研究和培育转基因紫菜 ,首先必须确定适合的阳性选择标记基因。条斑紫菜对 8种抗生素的敏感性试验表明 ,它对各种抗生素的敏感性不同 ,其中 zeocin、腐草霉素和氯霉素半致死剂量都很低。因此 Cat(氯霉素乙酰转移酶 )基因和 Sh.ble(sh.bleomycin)基因均有望成为条斑紫菜基因工程研究中理想的选择标记基因。; 张亚萍于文功戴继勋路新枝韩峰宫倩红; 关键词：条斑紫菜氯霉素抗生素人工养殖

一种β－琼胶酶基因agaB及其制备方法和应用: 一种β－琼胶酶基因agaB，其特征在于它是编码假别单胞菌CY24的β－琼胶酶的基因。本发明的β－琼胶酶基因agaB编码的β－琼胶酶能够特异性地降解琼胶产生聚合度为8－14的新琼寡糖，每种主要新琼寡糖在降解产物中的含量大于...; 于文功马翠萍路新枝韩峰褚艳石超; 文献传递

小鼠内抑素基因及其突变体在E.coli中的表达重组蛋白的复性和活性研究: 内抑素/(Endostatin/)是胶原ⅩⅧ的羧基末端片段，分子量为20KD。它是一种强烈的血管生成抑制因子，具有高效的抗肿瘤作用，内抑素的研究为肿瘤的血管靶向性治疗开辟了一条前景广阔的新途径。由于生物体内天然的内抑素含...; 路新枝; 文献传递

重组人胰岛淀粉样多肽的制备及评价: 2023年; 人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)的淀粉样变与2型糖尿病(T2D)的发生发展密切相关。为解决体外评价化合物抗hIAPP淀粉样变活性所需hIAPP存在化学合成困难、成本高、溶解性低和批次稳定性差等问题,本研究以蛛丝蛋白N端结构域突变体NT作为融合标签,构建大肠杆菌高效表达hIAPP体系。通过优化表达条件和分离纯化工艺,获得重组hIAPP(rhIAPP),并对rhIAPP二硫键形成、淀粉样变能力和淀粉样变产物的毒性进行检测。融合蛋白质以包涵体形式存在,经过尿素变性和亲和层析纯化得到融合蛋白质产量为70 mg/L发酵液,融合蛋白质经过复性、凝血酶切除融合标签和进一步纯化,最终得到rhIAPP产量为6 mg/L发酵液。检测显示,rhIAPP的巯基未形成二硫键。rhIAPP具有“S”型淀粉样变曲线,其形成的β-折叠结构远多于化学合成的hIAPP(chIAPP),化合物姜黄素能显著抑制2种来源hIAPP的淀粉样变。细胞毒检测表明,rhIAPP在与红细胞孵育过程中促进红细胞溶血。; 李欣宇张杰刘路馨陆仲夏王盛楠路新枝; 关键词：蛛丝蛋白淀粉样变

一株海洋高产壳聚糖酶菌株Renibacterium sp．QD1的筛选鉴定及产酶研究被引量：2: 2013年; 目的:获得高产壳聚糖酶菌株。方法:利用唯一碳源法富集产壳聚糖酶菌株,并利用平板水解圈和酶活力检测进行复筛。利用PCR克隆16S rDNA基因进行种属鉴定。利用SDS-PAGE凝胶原位复性鉴定野生菌株产壳聚糖酶的数量和大小。利用单一变量法进行发酵条件的初步优化。结果:获得了一株高产壳聚糖酶菌株,对该菌株的16S rDNA序列进行比对和分析发现该菌株属于Renibacterium属,将该菌命名为Renibacterium sp.QD1。SDS-PAGE电泳和凝胶原位复性结果显示,该菌株能产生一种胞外壳聚糖酶,分子量大小在25ku左右。对其发酵条件进行初步优化,用成分为壳聚糖(0.50%)、KH2PO4(0.10%)、K2HPO4(0.20%)、MgSO4(0.07%)、NaC(l0.10%)、CaCl2(0.01%)、酵母粉(0.05%)、马铃薯浸粉(%)、蛋白胨(0.2%)的培养基发酵,其粗酶活力可达400U/mL,比文献报道的活力最高的Microbacterium sp.OU01高近4倍。结论:获得了一株高产壳聚糖酶菌株,该菌株的发现为壳寡糖的制备提供了新的工具。; 邢培川刘丹于文功路新枝; 关键词：壳聚糖酶

海洋紫色杆菌β-琼胶酶的分离纯化及性质被引量：8: 2008年; 从青岛近海海水中分离得到一株高产琼胶酶的海洋紫色杆菌SY12.紫色杆菌SY12的发酵液上清经硫酸铵沉淀,凝胶过滤层析,离子交换层析和凝胶过滤层析等蛋白纯化步骤,得到纯化的野生琼胶酶AgaY.琼胶酶纯化了133.63倍,酶比活力为320.7 U/mg;纯化的琼胶酶经SDS-PAGE检测,显示为单一条带,其相对分子质量约为50×103.研究结果表明琼胶酶AgaY降解琼脂糖的β-1,4-糖苷键,其主要产物为新琼四糖和新琼二糖.对AgaY进行酶学性质研究,发现其最适反应pH为7.0,最适反应温度为40℃;Hg2+,Ag+,Zn2+,Cu2+和Pb2+等金属离子可以显著的抑制琼胶酶AgaY的活力.研究发现,AgaY的催化活性不依赖于离子的存在,AgaY对EDTA不敏感.; 时岩玲于文功路新枝; 关键词：Β-琼胶酶分离纯化

RNA适体研究及其在医药上的应用: 2013年; 核酸适体(nucleic acid aptamer)是从人工合成的随机单链核酸库中筛选出的特异性与靶物质高度亲和的核酸分子,包括DNA适体和RNA适体.体外获得核酸适体的方法称为指数富集配体系统进化技术,即SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment).在SELEX技术获得的核酸适体中,RNA适体因其结构的多样性而具有靶分子广、亲和力高、特异性强等特点.同时,相比传统抗体,RNA适体分子量小、易改造修饰、制备方便且无免疫原性.因此,RNA适体在基础研究、临床诊断、药物研制等方面展现了广阔的应用前景.本文综述了RNA适体的产生、特点、作用方式、优势与局限性,并详细介绍了其在医药研究领域的应用.; 朱颖于文功路新枝; 关键词：药物

一种β－琼胶酶基因agaA及其制备方法和应用: 本发明的β-琼胶酶基因agaA是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因，用其生产的重组β-琼胶酶温度和pH稳定性好，活性高，能降解琼脂糖，降解产物主要为聚合度2-6的新琼寡糖，因此可以用于新琼寡糖的制备以及从琼脂糖凝胶...; 于文功褚艳韩峰李京宝路新枝; 文献传递

利用Site-Finding PCR克隆琼胶酶基因被引量：4: 2013年; 目的:新型琼胶酶基因的筛选。方法:根据α-琼胶酶基因序列的同源性,设计了兼并引物,利用兼并PCR对所筛选到的琼胶酶产生菌株进行筛选,阳性菌株进行16s rDNA序列测定并构建了进化树。利用染色体步移技术Site-finding PCR获得目的基因的上下游序列,经过拼接获得全长的目的基因序列,并利用Blast对其进行分析。将目的基因插入pET 24a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用平板水解圈初步鉴定了重组酶的性质,并利用DNS法检测了重组酶发酵上清液的酶活。结果:获得了一株疑似α-琼胶酶产生菌株,16s rDNA序列鉴定显示为Thalassomonas sp.,命名为Thalassomonas sp.LD5。获得了一个新的基因,命名为agaD。agaD开放阅读框长4401 bp,编码1466个氨基酸,理论分子量为158.8kDa。序列分析表明,agaD编码的蛋白AgaD与已有的两种α-琼胶酶的相似性分别为89%和77%。重组AgaD经诱导后可以直接降解琼胶平板产生水解圈,其发酵上清液酶活为0.2 U.ml-1,说明该蛋白为琼胶酶。结论:采用分子克隆技术分离出新的琼胶酶基因,该基因的发现为活性寡糖的制备提供了新的工具。; 刘丹邢培川于文功路新枝

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