郑萍萍
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：安徽师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省学术与技术带头人基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 中华大蟾蜍精巢组织全长cDNA文库的构建及泛素延伸蛋白基因Bg-ubi52的获得被引量：9
- 2007年
- 运用SMART技术构建了中华大蟾蜍（Bufo bufo gargarizans）精巢全长cDNA文库。提取中华大蟾蜍精巢总RNA，用Clontech公司SMART^TM cDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA，LD-PCR扩增获得全长cDNA双链；经SfiⅠ酶切、层析柱分离后，500bp以上的片段与λTriplEx2载体连接并包装，建成原始文库。经鉴定，原始文库滴度为2．21×10^6pfu／ml，重组率为91％；文库扩增后的滴度为2．94×10^9pfu／ml，重组率为93．7％。插入片段大小分布于0．4～2．0kb之间，平均长度约为1．0kb，说明已构建文库质量较高，为进一步筛选、克隆精巢特异表达基因奠定了基础。从该文库中克隆到了泛素延伸蛋白基因，全长561bp，包含完整的5′和3′非编码区，编码128个氨基酸，即泛素的76个氨基酸后融合了52个氮基酸的核糖体L40蛋白。
- 陈文郑萍萍聂刘旺
- 关键词：中华大蟾蜍CDNA文库SMART技术
- 黑斑蛙精巢组织cDNA文库的构建及泛素基因序列的分析(英文)被引量：3
- 2007年
- 采用SMART(switching mechanismat 5 end of RNA transcript)技术构建了黑斑蛙(Rana nigromaculata)精巢组织全长cDNA文库。一步法提取成体蛙精巢组织总RNA,用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cD-NA;再用LD-PCR合成双链cDNA;经过SfiⅠ酶切和Chroma spin-400柱分离后,500bp以上的片段与λTriplEx2载体连接,再用GigapackⅢGold Packaging Extract包装蛋白包装,即获得原始文库。原始文库进行扩增后得到扩增文库。经检测原始文库的滴度分别为2.0×106pfu/mL和2.4×106pfu/mL,扩增后的文库滴度分别为0.48×109pfu/mL和3.0×109pfu/mL,重组率均在90%以上。通过E.coliBM25.8菌株将文库转化为pTriplEx2质粒,挑选一阳性克隆进行PCR检测,其插入片段平均长度约为1.0kb。挑取一阳性克隆分别从5′端和3′端进行测序,得到一长约1171bp的序列。经序列分析知,该序列含有完整的编码框,可编码305个氨基酸,是一全长cDNA序列。提示所建文库是可以用于全长cDNA的筛选。结果表明,所构建的黑斑蛙精巢组织cDNA文库的各项指标均满足建库的基本要求。该文库将为蛙类及两栖类的已知或未知的功能基因及新基因的获得及其研究提供可靠资源;另外,该文库还将为研究蛙类动物的性别决定和分化相关基因及其表达提供直接的分子资料。
- 郑萍萍陈文李洁芮金龙聂刘旺
- 关键词：黑斑蛙总RNASMART技术CDNA文库泛素
- 黑斑蛙Dmrt1和Sox9基因cDNA序列的克隆研究及其精巢组织cDNA文库的构建
- 性别是一个高度保守的性状，但是不同进化地位的物种控制性别发育的分子机制却不尽相同。哺乳类中有雄性性别决定因子Sry基因(Sex-determiningregion of Y chromosome,Sry)，而在非哺乳类的...
- 郑萍萍
- 关键词：黑斑蛙DMRT1基因SOX9基因
- 文献传递
- 探讨两栖纲三个目之间的系统发生关系被引量：1
- 2006年
- 现存两栖纲分为3个目,然而它们的系统发生关系仍存在较大的争议.选择Genbank上25种两栖动物线粒体全序列,结合已测定的福建大头蛙(Lim nonectes fujianensis)线粒体基因组全序列,以天鹅和眼镜凯门鳄为外群,用线粒体tRNA基因的合并数据重建系统树.采用P AU P(version 4.0b10)软件构建MP和NJ树,tree-puzzle5.2构建ML树.结果显示,NJ树和ML树以较高的自引导值支持有尾目和蚓螈目为姐妹群,而MP树则支持无尾目和有尾目为姐妹群.
- 胡丽丽聂刘旺郑萍萍张际峰
- 关键词：福建大头蛙TRNA基因系统发生关系
- 山地麻蜥Sox 3基因的克隆及序列分析
- Sox基因是一类高度保守的基因家族,其家族成员的典型特征是编码的蛋白质都具有一个保守的基序HMG-box,可以与DNA序列特异性结合,促进基因的特异转录,从而在胚胎发育及性别分化中起着重要的调控作用。本文采用PCR方法,...
- 李洁郑萍萍芮金龙宋娇莲聂刘旺
- 关键词：山地麻蜥SOX基因HMG盒
- 文献传递
