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蜘蛛丝的结构性能及表达策略研究进展被引量：3: 2009年; 蜘蛛丝是一种天然蛋白质纤维,具有高强度、高弹性、高断裂能等机械性能以及显著的可降解性、组织相容性等生物学特性,在生物医学、材料、纺织和军事装备等领域均有重大潜在应用价值。利用原核或真核表达系统表达蜘蛛丝蛋白可以大量获取蜘蛛丝。综述了蜘蛛丝蛋白序列结构特征以及蜘蛛丝蛋白在大肠杆菌、酵母、植物、动物细胞、家蚕等表达系统中的表达策略研究进展,并重点阐述应用家蚕表达系统表达蜘蛛丝蛋白的策略,可供规模化生产蜘蛛丝蛋白参考。; 郑青亮蒋彩英张耀洲; 关键词：蜘蛛丝机械性能

家蚕BmTRAPα基因的原核表达及功能研究: BmTRAPα属于TRAP家族,是典型的一次跨膜蛋白,主要分布在内质网上。最早发现的TRAPα是1个糖基化蛋白,大小为34KD,它受到Ca的调控,分布在内质网膜和核被膜,在人类骨髓细胞系中,TRAPα的mRNA转录本受到...; 朱立明童富淡张耀洲刘俊郑青亮吕正兵聂作明陈健于威; 关键词：原核表达; 文献传递

家蚕富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因BmSPARC的表达及亚细胞定位被引量：1: 2009年; 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)是一种小分子酸性糖蛋白,在有机体内广泛分布,通过与胞外基质蛋白相互作用而表现出多种生物活性。从家蚕蛹cDNA文库中获得SPARC基因(BmSPARC)的cDNA序列,GenBank登录号为FJ602783。利用生物信息学方法对此序列进行分析表明,BmSPARC的cDNA序列全长1 626 bp,含有1个954 bp的开放阅读框(ORF),编码317个氨基酸残基;同源性比较显示该基因编码蛋白的氨基酸序列在无脊椎动物中具有较高的保守性。将BmSPARC片段在大肠杆菌BL21中表达并纯化后,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,通过亚细胞定位研究发现该基因表达蛋白主要存在于细胞质中。利用实时荧光定量PCR的方法,对BmSPARC在家蚕不同发育时期、不同组织中的mRNA转录水平进行比较,并采用Western blotting方法对BmSPARC蛋白的表达进行分析,结果表明:BmSPARC在家蚕卵期和5龄幼虫丝腺组织中无表达,而在5龄幼虫、蛹、蛾发育时期及5龄幼虫的头部、脂肪体、中肠、马氏管、卵巢、表皮和气门等7个组织中均有不同程度的表达,其中在蛾期和5龄幼虫卵巢中的表达量较高。研究结果为进一步探讨BmSPARC在家蚕生长发育过程中的生物学功能打下了基础。; 朱玉娟吕正兵陈琴聂作明王丹陈健刘立丽郑青亮陈剑清沈红丹盛清全滟平徐杰张文平吴祥甫张耀洲; 关键词：家蚕亚细胞定位实时荧光定量PCR

家蚕Bm E(spl)-Like基因的原核表达及其功能初步研究: Enhancer of Split(E(spl))是果蝇神经性的位点之一是由七个紧密簇拥在一起的基因复合体组成,被称为E(spl)-C,调控着神经外胚层细胞的表皮发生,现已经证明这个复合体中七个基因编码的蛋白都有HLH保...; 刘颖硕张耀洲聂作明郑青亮王丹; 关键词：原核表达家蚕卵重组子结构域 SPL; 文献传递

家蚕中一个新Kazal型蛋白酶抑制剂的表达、定位及其功能研究: Kazal型蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内，对机体的发育和免疫应答等生理过程发挥极其重要的作用。该类抑制剂一般由一个或多个Kazal型结构域组成，并且每个结构域具有保守的序列结构特征和三维构像，通常认为每个结构域均能形成...; 郑青亮; 关键词：蛋白酶抑制剂家蚕 RNAI 免疫组织化学荧光定量; 文献传递

家蚕中一个新Kazal型蛋白酶抑制剂的表达及其功能研究: Kazal型蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内,对机体发育,免疫等功能过程发挥极其重要的作用。该类抑制剂一般由一个或多个Kazal结构域组成,并且每个结构域具有保守的序列结构特征和三维构像,通常每个结构域能形成三对二硫键且其...; 郑青亮张耀洲; 关键词：家蚕纯化; 文献传递

Kazal型蛋白酶抑制剂结构与功能研究进展被引量：7: 2006年; 蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内,在许多生命活动过程中发挥必不可少的作用,特别是对蛋白酶活性进行精确调控。其中Kazal型蛋白酶抑制剂是最重要的、研究最为广泛的酶抑制剂之一,该类抑制剂一般由一个或几个结构域组成,每一个结构域具有保守的序列和分子构象,同时发现该类抑制剂与蛋白酶作用的结合部位高度易变,它们大多数暴露于与溶剂接触的环上,其中P1部位是抑制作用的关键部位,抑制剂的专一性由P1部位氨基酸残基的性质决定,其它残基取代结合部位残基对抑制剂-酶的结合常数有显著的影响。Laskowski算法可直接从Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的序列推测其与6种丝氨酸蛋白酶之间的抑制常数(Ki)。目前在生物体内发现大量的Kazal型蛋白酶抑制剂,并证实其有重要的生物学功能。; 郑青亮盛清张耀洲; 关键词：活性部位

快速诊断人粒细胞无形体病的免疫层析试纸及其制备法: 本发明公开了一种快速诊断人粒细胞无形体病的免疫层析试纸，包括上样垫(1)、含有金标记的msp2抗体的胶体金垫(2)、包被质控线(6)和检测线(5)的硝酸纤维素膜(3)以及吸样垫(4)，在硝酸纤维素膜(3)的上表面分别设置...; 张耀洲郑青亮舒建洪; 文献传递

家蚕中类孕酮膜受体元件2(progestrone membrane receptor component2,PGRMC2)的表达、纯化、抗体制备及功能分析: 孕酮是一种生物体内很重要的甾类激素,它具有多种重要的生物学功能,不同的生长阶段起到的作用也不同。孕酮在生物体内的重要作用日益收到人们的重视,它在生物体内主要通过孕酮受体(progestrone membrane rece...; 张春丽郑青亮王丹张耀州; 关键词：生物体孕酮受体抗体制备功能分析; 文献传递

家蚕具有CHCH结构域的蛋白家族基因BmCH的原核表达和亚细胞定位: 2011年; 含有CHCH保守结构域的蛋白在不同物种中行使不同的功能。从家蚕蛹cDNA文库筛选获得一条cDNA序列,经生物信息学分析发现其编码蛋白含有一个CHCH保守结构域,将该基因命名为BmCH(GenBank登录号:DQ443425.1)。该序列开放阅读框大小为435 bp,编码144个氨基酸残基。将成功构建的重组质粒pET-28a(+)-BmCH转化到E.coli Rosetta(DE3)菌株,经IPTG诱导表达BmCH融合蛋白,用亲和层析进行纯化后,将融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过Westernblotting检测BmCH在家蚕4个发育时期和5龄幼虫组织中的表达情况与用荧光定量PCR检测BmCH在家蚕不同发育时期及5龄幼虫组织中的转录结果基本一致:该蛋白在卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,其中在5龄幼虫期的表达量最高;该蛋白在5龄幼虫的表皮、精巢、中肠、丝腺和卵巢中有明显表达,在血淋巴、马氏管、脂肪体中的表达量较少,但差异不大,而在气管和头部没有表达。利用抗体的免疫荧光标记对BmCH在家蚕BmN细胞中的定位进行研究,观察到该蛋白主要分布在细胞质中。初步推测BmCH可能是家蚕生长发育的必需蛋白,参与多种细胞生命活动的过程。; 舒建洪梁莉惠郑青亮牛伟涛张耀洲; 关键词：家蚕荧光定量PCR 细胞定位

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