郭庆东
- 作品数：8 被引量：14H指数：3
- 供职机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市科委课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新抑癌基因GPD1在结肠癌细胞HCT-8中的作用及其预后潜力研究被引量：4
- 2019年
- 目的探究新抑癌基因甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1,GPD1)在结肠癌发生、发展中的作用及其与临床预后的关系。方法应用HCT-8结肠癌细胞系,以siRNA干扰GPD1表达后进行细胞功能实验,分别以MTS实验与集落形成实验检测细胞增生活力与集落形成能力,以划痕试验、Transwell实验探究GPD1对HCT-8细胞系迁移能力的影响。对TCGA数据库进行生物信息学分析,探究GPD1表达水平与结直肠癌患者临床预后的关系,并明确GPD1低表达与其编码基因甲基化之间的关系。结果干扰GPD1基因表达后,HCT-8细胞增生活力明显增强,重复实验差异具有统计学意义(P<0.01);集落形成实验结果显示,GPD1干扰后的HCT-8细胞集落数目增多且集落直径增大,差异具有统计学意义(P<0.01)。划痕实验与Transwell实验结果显示,敲低GPD1表达的HCT-8细胞迁移能力无显著变化,表明GPD1对结肠癌细胞迁移能力无影响。生物信息学分析结果显示,GPD1低表达的结直肠癌患者总存活率(χ^2=4.1,P=0.040)及无病存活率(χ^2=13.2,P<0.000 1)均明显低于GPD1高表达患者,且GPD1低表达水平是结直肠癌预后不良的独立风险因素(P<0.05)。甲基化分析结果显示,结直肠癌组织中GPD1低表达与其编码基因高甲基化呈负相关(P<0.05)。结论 GPD1在结肠癌中发挥抑制细胞增生与集落形成的作用,且GPD1低表达是结直肠癌患者不良预后的独立预测因素。
- 闵力李恒存郭庆东王星宇张澍田
- 关键词：结肠癌GPD1细胞增生预后
- 血管新生抑制因子软骨调节素I前体蛋白的剪切加工研究
- 2014年
- 目的研究参与血管新生抑制因子软骨调节素I(ChM-I)前体加工的前蛋白转化酶(PCs)的种类及其作用,探讨ChM-I蛋白的翻译后加工成熟机制。方法构建ChM-I前体蛋白真核表达质粒并转染多种细胞,Western Blot检测细胞裂解液和培养基上清中ChM-I的表达变化;将ChM-I前体蛋白表达质粒与5种不同前蛋白转化酶表达质粒在ChM-I前体加工缺陷型细胞COS7中共表达,Western Blot检测细胞裂解液和培养上清中ChM-I蛋白的表达。结果 ChM-I前体荧光表达质粒构建成功,可在多种细胞系中表达ChM-I前体蛋白;ChM-I前体蛋白在COS7细胞中无法被有效地剪切加工成成熟ChM-I蛋白,可作为ChM-I加工缺陷型细胞使用;除PACE4以外,Furin、ΔFurin、PC5A和PC7均能显著提高培养液上清中ChM-I的含量,并缓解过量表达的ChM-I前体在细胞中的堆积。结论PCs中的Furin、PC5A和PC7能将过表达的ChM-I前体酶切加工为成熟ChM-I,提示Furin、PC5A和PC7可能在ChM-I蛋白剪切加工成熟过程中发挥重要作用。
- 郭水龙朱圣韬李鹏王拥军王民邢洁郭庆东孙秀梅张澍田
- 关键词：前体蛋白
- 胃癌相关mir-148a靶向调控胃泌素受体CCKBR
- 2014年
- 目的研究胃癌相关miR-148a与胃泌素受体CCKBR的调控关系,并分析其调控结合位点。方法生物信息学预测人CCKBR 3’UTR上miR-148a的结合位点;利用PCR扩增miR-148a前体构建真核表达载体;Northern Blot检测miR-148a真核表达载体的表达;构建CCKBR 3’UTR野生型和突变型荧光素酶报告载体,并利用双荧光素酶活性分析检测分析miR-148a对CCKBR基因表达的调控和结合位点;Western Blot检测miR-148a过表达对CCKBR蛋白表达的作用。结果在人CCKBR 3’UTR上找到3个miR-148a的潜在结合位点;miR-148a真核表达载体构建成功,转染胃癌细胞后可显著过表达;miR-148a通过人CCKBR 3’UTR上423bp处的结合位点抑制CCKBR的基因表达;miR-148a过表达显著抑制胃癌细胞中CCKBR的蛋白表达。结论 CCKBR是胃癌相关miR-148a的靶基因,miR-148a通过其3’UTR上的结合位点抑制CCKBR的基因表达和蛋白合成,提示miR-148a可能通过调控CCKBR参与胃癌的发生发展。
- 郭水龙朱圣韬李鹏王拥军王民邢洁郭庆东孙秀梅张澍田
- 关键词：胃泌素受体胃癌
- MC3T3-E1Subclone14体外诱导成骨模型的建立及Ano5基因表达的研究被引量：5
- 2015年
- 目的建立MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨模型,探讨Ano5基因表达与成骨细胞形成的关系,了解其对成骨分化的影响。方法 MC3T3-E1 Subclone 14细胞贴壁培养,加入条件培养基,分别培养至0d、3d、7d、14d、21d。倒置显微镜下观察细胞形态,通过碱性磷酸酶活力测定和茜素红染色,鉴定成骨细胞。利用REAL TIME-PCR检测Ocn、Colα1、Opg/Rankl、Osterix和Runx2等成骨相关因子的基因表达水平,同时检测Ano5基因在成骨细胞形成过程中的表达趋势。结果体外诱导MC3T3-E1 Subclone 14倒置光学显微镜下观察细胞形态呈梭形。成骨细胞碱性磷酸酶活力逐渐增高。成骨诱导培养至14d和21d,茜素红染色可见细胞表面出现矿化结节。成骨相关因子基因表达均逐渐增高,至21d达到高峰。Ano5基因从诱导分化的第3d开始表达,随后表达量逐渐增高,至14d达到高峰,21d表达量下降。结论在MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导分化为成骨细胞过程中,Ano5基因表达量逐渐升高,至14d达到高峰,21d开始表达量具有下降趋势。
- 金玲玲胡颖郭庆东朱圣韬
- 关键词：MC3T3-E1SUBCLONE成骨细胞骨矿化
- 慢病毒介导环氧化酶-2的沉默对食管鳞癌细胞增殖的抑制效应
- 2014年
- 目的制备环氧化酶-2(COX-2)的RNA干扰(RNAi)重组慢病毒(lentivirus),观察COX-2表达沉默对人食管鳞癌(ESCC)细胞增殖的影响。方法将目的基因短发卡RNA(sh RNA)载体与包装载体共转染293T细胞,收集上清液后浓缩纯化、滴度测定、感染ESCC细胞;应用荧光显微镜观察包装效率及感染效率,实时荧光定量PCR及Western blot评价COX-2基因沉默效应,MTS法检测细胞的增殖。结果成功制备了沉默COX-2的重组慢病毒,该病毒感染ESCC细胞后,COX-2 m RNA和蛋白的表达量分别降低了80%和50%左右,细胞的增殖明显减慢。结论慢病毒介导的sh RNA干扰能有效沉默ESCC细胞COX-2基因,COX-2表达沉默抑制ESCC细胞增殖。
- 朱圣韬李鹏王青釭郭水龙邢洁程芮郭庆东孙秀梅谷俊朝张澍田
- 关键词：环氧化酶2慢病毒属细胞增殖
- Talin-1在食管鳞状细胞癌中的表达及其潜在的早期诊断能力
- 2019年
- 目的探讨踝蛋白-1(Talin-1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其潜在的诊断能力。方法通过免疫组化检测75对ESCC及癌旁组织芯片中Talin-1的表达情况并分析其与临床病理特征的关系,进一步通过计算曲线下面积(AUC)评价辅助诊断效能。结果 Talin-1在ESCC组织的免疫组化染色强度、阳性染色细胞百分比及染色评分均显著高于癌旁组织(阳性细胞百分比89. 7%vs. 43. 4%,P <0. 001;染色评分2. 05 vs. 0. 73,P <0. 001);针对不同ESCC组织的阳性染色细胞百分比分析发现,Talin-1在直径<4 cm的ESCC组织中的表达水平最高(<4 cm vs. 4~6 cm vs.> 6 cm=53. 3%vs. 17. 6%vs. 18. 5%,P <0. 001),随着浸润深度由黏膜层至外膜层加深,其表达水平逐渐降低(黏膜层/黏膜下层vs.肌层vs.浆膜层vs.全层=73. 4%vs. 48. 7%vs. 17. 1%vs. 0. 0%,P <0. 001);Ⅰ期及Ⅱ期ESCC中Talin-1表达水平显著高于Ⅲ期及Ⅳ期ESCC(Ⅰ vs. Ⅱ vs. Ⅲ/Ⅳ=94. 9%vs. 55. 1%vs. 0. 0%,P<0. 001);Talin-1阳性染色细胞百分比诊断早期ESCC的AUC为0. 940;Talin-1染色评分诊断早期ESCC的AUC为0. 893。结论 Talin-1在早期ESCC组织中特异性高表达,其表达水平与肿瘤大小、浸润深度及肿瘤分期相关,是一种潜在的早期ESCC诊断标志物。
- 闵力刘娟张澍田郭庆东王星宇
- 关键词：食管鳞状细胞癌
- 过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭被引量：3
- 2016年
- 目的研究人类剪切蛋白(drosophila behavior human splicing,DBHS)家族基因,包括p5nrb、PSF、PSPC1基因,对食管鳞状细胞癌(以下简称食管磷癌)细胞系TE-8细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法构建p54nrb、PSF、PSPC1基因过表达载体,通过脂质体法转染TE-8细胞,转染48 h后qRT-PCR和Western blotting检测各组细胞p54nrb、PSF、PSPC1在mRNA和蛋白质水平的表达。细胞划痕实验及覆盖有Matrigel的Transwell小室检测食管鳞癌细胞的迁移、侵袭能力。结果过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,qRT-PCR和Western blotting检测证实食管鳞癌TE-8细胞中上述基因表达在mRNA水平和蛋白质水平均明显上调,细胞划痕实验及Transwell小室实验证实食管鳞癌TE-8细胞过表达p54nrb、PSF、PSPC1后,其迁移、侵袭能力增强。结论过表达DBHS家族基因可促进食管鳞癌细胞的迁移侵袭。
- 程芮朱圣韬郭水龙李鹏郭庆东张澍田
- 关键词：食管鳞癌PSF
- PHF8基因对食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响被引量：3
- 2016年
- 目的利用慢病毒(lentivirus)介导的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立人食管鳞状细胞癌(esophageal squamous-cell carcinoma,ESCC,以下简称食管鳞癌)裸鼠移植瘤模型,观察锌指蛋白8(plant homeodomain finger protein 8,PHF8)对移植瘤生长的影响。方法分别将未感染慢病毒(空白对照组)、感染Nonsilencing-shRNA慢病毒(阴性对照shRNA组)和PHF8shRNA慢病毒(PHF8 shRNA组)的人食管鳞癌细胞系TE-1接种于裸鼠背部皮下,建立食管鳞癌裸鼠移植瘤模型。定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。4周后处死裸鼠,定量PCR及Western blotting法检测肿瘤组织中PHF8的表达。结果 PHF8shRNA组较阴性对照shRNA组、空白对照组的裸鼠致瘤能力明显减弱,PHF8 mRNA和蛋白的表达水平显著降低。结论慢病毒介导的shRNA干扰能有效减少食管鳞癌裸鼠移植瘤中PHF8的表达,而降低PHF8的表达能抑制食管鳞癌移植瘤的生长。
- 朱圣韬孙秀静李鹏郭庆东朱圣泉张澍田
- 关键词：慢病毒食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤
