陈云波
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
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- aac(3)-Ⅱ／tem-105融合基因的构建、克隆及表达
- 目的了解aac(3)-Ⅱ／tem-105融合基因表达的融合蛋白酶与单个基因表达的蛋白酶在活性上的差异。方法应用PCR重叠延伸技术将aac(3)-Ⅱ基因和tem-105基因通过一疏水性多肽接头 (Gly4Ser)3前后拼接...
- 陈云波王震查长森吕建新
- 关键词：融合基因抗生素耐药性
- 文献传递
- 氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II的表达纯化及初步活性
- 2007年
- 用PCR扩增的氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶II[aac(3)-II]基因构建了能表达较高活性AAC(3)-II的重组工程菌,并获取重组AAC(3)-II。含pET28a质粒的工程菌转入aac(3)-II基因前后对氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度进行比较,重组菌超声裂解上清液及其纯化的AAC(3)-II进行SDS-PAGE和Western印迹电泳鉴定。最低抑菌浓度表明转入aac(3)-II基因的工程菌比未转入的工程菌对庆大霉素(gentamicin,GEN)的提高了256倍,对妥布霉素(tobramycin,TOB)及其奈替米星(netilmicin,NTL)提高了16倍,电泳鉴定表明纯化获取的是重组AAC(3)-II,其相对分子质量约为32kDa,纯度大于95%,纯化后的10μgAAC(3)-II,分别在10s内使80μgGEN、30s内使80μgTOB和NTL乙酰化而失去抑菌作用。研究为氨基糖苷类抗生素伴侣的开发研究初步打下基础。
- 王震陈云波查长森邹立林彭颖季敬璋陈秀枢吕建新
- 关键词：最低抑菌浓度氨基糖苷类抗生素
- 肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类抗生素基因aac(3)-Ⅰ的改构与功能研究
- 目的研究氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-Ⅰ碱基变异与功能的关系。方法构建重组表达载体pET、28-aac(3)-Ⅰ,转化感受态E．coli BL21(DE3),经含终浓度为25μg／ml的Kan抗生素LB平板筛选得到...
- 查长森王震陈云波吕建新
- 关键词：易错PCR活性中心
- 文献传递
- 肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类抗生素基因aac(3)-I的改构与功能
- 2007年
- 研究氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-I碱基变异与功能的关系。构建表达载体pET28a-aac(3)-I,转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),筛选到阳性克隆送测序。然后在体外对aac(3)-I基因进行易错PCR改造,筛选到一株阳性克隆测序后发现7处碱基变异,其中C272T、T373C引发了氨基酸的变异,分别对应:Ser91Phe、Tyr125His。以琼脂稀释法检测不同克隆的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。实验结果表明变异株MIC较突变前下降64倍(庆大霉素)、4倍(阿米卡星)、8倍(依替米星)。为进一步了解和阐明耐药酶AAC(3)-I与底物的作用机制打下基础。
- 查长森王震吕建新陈云波邹立林季敬璋彭颖明镇寰
- 关键词：易错PCR最低抑菌浓度
- 大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药谱及其产ESBLs的研究被引量：5
- 2007年
- 目的了解临床分离的54株大肠埃希菌对氨基糖类苷类抗生素的耐药谱及产ESBLs情况,分析氨基糖苷类修饰酶AAC(3)-II的检出率及该酶的一些特征。方法采用MIC法测定临床分离的54株大肠埃希菌对7种氨基糖苷类抗生素的耐药谱,用NCCLS推荐的酶抑制剂增强纸片扩散法检测产ESBLs菌株,并通过聚合酶链反应、克隆测序和测定重组菌耐药谱对aac(3)-II基因进行研究。结果54株大肠埃希菌对阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、链霉素、大观霉素和奈替米星的耐药率分别为14.8%、77.8%、59.3%、66.7%、68.5%、61.1%、22.2%;共检测出产ESBLs菌株34株,占63.0%;aac(3)-II基因在54株大肠埃希菌中检出率为88.5%;质粒转化菌产ESBLs且同时检出aac(3)-II基因。重组菌BL21(DE3)/pET26::aac(3)-II对庆大霉素和卡那霉素有耐药性,对其余5种氨基糖苷类抗生素没有表现出耐药性。结论大肠埃希菌对庆大霉素的耐药率最高,对阿米卡星的耐药率最低;耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌与其产ESBLs有相关性;重组菌BL21(DE3)/pET26::aac(3)-II仅对庆大霉素和卡那霉素产生耐药。
- 陈云波王震查长森邹立林季敬章彭颖吕建新
- 关键词：大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素修饰酶超广谱Β内酰胺酶
