黄海长
- 作品数：64 被引量：696H指数：14
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结缔组织生长因子增强转化生长因子β1促成肌纤维细胞生成的分子机理研究
- 结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)都是肾间质纤维化过程中重要的促纤维化因子,我们前期工作发现CTGF协同TGFβ1促进肾脏成纤维细胞表型转化为成肌纤维细胞。本研究以细胞内信号传导途径为切入点探讨...
- 杨敏黄海长李惊子王海燕
- 文献传递
- 免疫细胞化学法检测尿足细胞的临床应用被引量：7
- 2007年
- 目的:免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞的比较,以促其临床推广应用。方法:尿标本均为我科住院患者的肾活检日新鲜晨尿,采用抗人足细胞标记蛋白Podocalxin(PCX)单克隆抗体进行尿沉渣免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色。14例患者均经肾活检,肾组织由光镜、免疫荧光和电镜检查做出病理诊断。结果:(1)14份尿标本应用免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学方法均可检测到足细胞。(2)同一份尿沉渣采用免疫荧光细胞化学法检测足细胞均数为(16.7±15.1)/HP,而免疫酶细胞化学法检测足细胞均数为(26.1±24.3)/20HP,两组比较有统计学意义(P<0.05);但两种方法所测足细胞数之间有很好的相关性(r=0.969)。结论:免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞,前者较简便、镜下易辨认,后者设备简单、标本可保存。
- 刘颖李惊子黄海长
- 关键词：足细胞尿液
- 低氧促进肌成纤维细胞表达和分泌结缔组织生长因子及纤维连接蛋白被引量：11
- 2007年
- 目的:观察低氧对肾肌成纤维细胞合成和分泌结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)和细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,以了解肌成纤维细胞在肾间质纤维化过程中的作用。方法:(1)采用原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,以密闭的细胞培养罐造成低氧环境(1%O2,体积分数),应用Westernblot方法检测低氧和正常氧(21%O2,体积分数)条件下低氧诱导因子-1α(hypoxiainducedfactor-1α,HIF-1α)蛋白的表达,验证所营造的低氧条件是可靠的。(2)用Westernblot方法检测在低氧和正常氧条件下,各时间点上细胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平。(3)用RT-PCR方法检测低氧和正常氧条件下,各时间点FNmRNA表达的变化。(4)用明胶酶谱法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloprotei-nase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的活性。结果:正常氧组HIF-1α蛋白表达微弱,低氧组有较高水平HIF-1α蛋白表达。低氧作用于原代培养的肌成纤维细胞6h,12h和24h后细胞内的CTGF蛋白均比正常氧组增高,分别为175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12h最明显(P<0.05);低氧刺激24h时上清液中CTGF蛋白显著增加,是正常氧组的348%±99%(P<0.05);低氧刺激肌成纤维细胞6h,12h和24h后上清液中FN蛋白水平增加,分别是正常氧组的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24h最明显(P<0.05),而对应时间点上清液中MMP-9和MMP-2活性无明显变化,但细胞内FN蛋白减少,低氧剌激6h为正常氧组的64%±13%。低氧刺激肌成纤维细胞3h,FN的mRNA水平开始上升,6h达到正常氧组的135%±13%(P<0.05),12h下降接近正常氧水平。结论:低氧可通过促进肌成纤维细胞表达CTGF和FN参与肾间质纤维化的进展。
- 郭丽萍黄海长李惊子
- 关键词：低氧肌成纤维细胞纤连蛋白类结缔组织
- 低氧促进肌成纤维细胞CTGF的表达及增加纤连蛋白分泌
- 目的低氧是致肾纤维化的重要因素,本研究观察低氧对大鼠肾皮质肌成纤维细胞表达结缔组织生长因子(con- nective tissuegrowth factor,CTGF)及细胞外基质纤连蛋白(fi- bronectin,F...
- 郭丽萍黄海长李惊子
- 文献传递
- 中药黄芪当归合剂对肾病综合征肾损伤的保护作用及对代谢紊乱的影响被引量：141
- 2002年
- 为明确黄芪、当归在肾病综合征 (nephroticsyndrome ,NS)治疗中的作用、适应证及其作用机制 ,我们从临床和实验两方面进行了系统的研究。 (1)黄芪当归合剂对肾脏的保护作用 :各种肾脏疾病慢性病变经过肾硬化、纤维化 ,最终发展成为终末期肾衰竭。如何阻断这一发展通路已成为国际肾脏病界研究的热点。本研究选用慢性嘌呤霉素肾病模型 ,以目前公认具有肾脏保护作用的血管紧张素转化酶抑制剂 (ACEI)作为阳性对照 ,经 12周给药观察后处死 ,收集血、尿、肾脏标本进行检测。结果显示模型鼠肾脏呈慢性炎症 ,肾小球硬化和小管间质纤维化。黄芪当归合剂 (A&A)治疗明显减轻肾功能恶化和组织学损伤 ,肾小球硬化指数和小管间质损伤指数下降与肾功能损伤减轻呈正相关 (r=0 .80 ,P <0 .0 0 1和r=0 .85 ,P <0 .0 0 1)。细胞外基质Ⅲ、Ⅳ型胶原 ,纤连蛋白和层粘连蛋白明显减少。这种抗纤维化作用与ACEI相似 ,但肾局部的血管紧张素Ⅱ水平不下降 (5 6 .5 3± 7.0 3vs 76 .6 2± 12 .88pg/mg蛋白 ,P <0 .0 5 )。然而 ,A&A治疗组的肾脏转化生长因子 β1(TGF β1) (0 .0 5 17± 0 .0 2 4 8vs 0 .110 0± 0 .0 2 6 1,P <0 .0 5 )和骨桥蛋白 (OPN ,0 .0 10 5± 0 .0 0 5 3vs 0 .115± 0 .0 34,P <0 .0 5 )表达 ,单核
- 王海燕李惊子潘缉圣邹万忠李晓玫章友康朱世乐黄海长王叔咸
- 关键词：肾变病综合征药理学
- 结缔组织生长因子通过活化Erk-1/2信号通路促成肌纤维细胞生成被引量：22
- 2005年
- 目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)协同转化生长因子β1(TGFβ1)促进成肌纤维细胞生成分子机制。方法用TGFβ1预处理大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F),使部分细胞转化为成肌纤维细胞,然后将预处理后的细胞分为对照组,CTGF刺激组,TGFβ1刺激组和PD98059干预组。通过免疫细胞化学双染技术分别检测成肌纤维细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和掺入的细胞增殖标志物5溴2'脱氧尿嘧啶(BrdU);并以Western免疫印迹法检测αSMA水平。结果TGFβ1预处理的各组细胞都有胞浆内αSMA染色阳性,CTGF刺激组αSMA蛋白表达均明显高于对照组(P<0.05);但CTGF组部分αSMA阳性细胞核内BrdU阳性率明显高于对照组和TGFβ1组。进一步实验显示CTGF刺激细胞30min能明显诱导细胞内Erk1/2磷酸化,TGFβ1组无此反应。用PD98059阻断Erk1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的细胞核内BrdU阳性表达和αSMA蛋白表达(P<0.05)。结论CTGF通过Erk1/2信号通路促进TGFβ1诱导的成肌纤维细胞增殖。
- 黄海长杨敏李惊子王海燕
- 关键词：结缔组织信号通路成肌纤维细胞
- 大鼠肾皮质成肌纤维细胞的体外培养被引量：4
- 2007年
- 目的建立肾脏成肌纤维细胞的培养方法，为肾脏纤维化的发病机制和防治措施体外研究提供细胞技术平台。方法采用肾皮质组织块接种培养法，培养的细胞通过相差显微镜观察形态、电镜下观察细胞器，细胞免疫化学染色检测细胞表型标记蛋白等进行鉴定。同时检测细胞对不同细胞因子的生长反应。结果培养的细胞呈梭形，单个核，多突起，表达波形蛋白（vimentin）和平滑肌肌动蛋白（α，SMA），不表达主要存在于血管内皮细胞的抗原上皮氨基肽酶P（EAP），不表达角蛋白（cytokerafin）和结蛋白（desmin）。细胞可以传代至5代，并且保持成肌纤维细胞表型。转化生长因子β1、结缔组织生长因子刺激细胞增殖，而γ-干扰素对细胞无增殖效应。结论原代培养细胞为成肌纤维细胞并且可以传代，具备对细胞因子的生长调节反应，为后续实验提供了基础。
- 高绪霞黄海长李晓玫
- 关键词：肾皮质成肌纤维细胞原代培养
- 实验性局灶节段性肾小球硬化症大鼠肾小球足细胞脱落及其意义
- 大量研究表明检测局灶节段性肾小球硬化症(focal andsegmental glomerulosclerosis,FSGS)患者尿中足细胞,可以判断FSGS的进展,但这些临床研究不能动态、连续检测尿中的足细胞脱落与蛋白...
- 李月红黄海长王素霞邹万忠章友康
- 文献传递
- 低氧诱导肌成纤维细胞生成并通过ERK1／2途径促进Ⅰ型胶原的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响及其可能的信号通路。方法:(1)采用正常大鼠肾成纤维细胞系(NRK-49F),应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;比较低氧和正常氧条件下α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平。(2)原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,Western blotting方法检测低氧和正常氧条件下,HIF-1α和Ⅰ型胶原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特异阻断剂PD98059的阻断效应;RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达水平;细胞免疫化学法检测HIF-1α胞内表达部位的变化;明胶酶谱法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性。结果:(1)低氧刺激6 h,NRK-49F细胞和肌成纤维细胞胞内和核内均有HIF-1α蛋白表达,核内更明显。(2)低氧培养12 h,NRK-49F细胞表达α-SMA蛋白明显增高,是正常氧组的187%±32%(P<0.05),验证了低氧可引起成纤维细胞表型转化。(3)低氧刺激原代培养的正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞6 h、12 h上清中Ⅰ型胶原蛋白水平增加,分别为正常氧组的171%±27%(P<0.05)和256%±61%(P<0.05);低氧刺激4 h、6 h,Ⅰ型胶原mRNA表达增加,为正常氧组的189%±28%(P<0.05)和221%±44%(P<0.05)。(4)低氧刺激肌成纤维细胞6 h、12 h、24 h,培养上清液中MMP-9、MMP-2活性无明显变化。(5)低氧刺激肌成纤维细胞15 min即可使ERK1/2活化,阻断实验显示,PD98059可以使低氧12h引起Ⅰ型胶原增加(低氧刺激组为正常氧对照组的273%±51%,P<0.05)显著减少(PD98059+低氧组为正常氧组的108%±19%,P>0.05)。结论:低氧促肾纤维化可能与其诱导肾成纤维细胞转化为肌成纤维细胞并经ERK1/2途径增加Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。
- 郭丽萍黄海长李惊子
- 关键词：低氧肌成纤维细胞ERK1/2通路
- 急性缺血性肾功能衰竭恢复过程中表皮生长因子表达及其分布的研究
- 黄海长
