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何湘君

作品数：40 被引量：174H指数：8
供职机构：北京大学人民医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 35篇期刊文章
  • 5篇会议论文

领域

  • 37篇医药卫生
  • 4篇生物学

主题

  • 16篇细胞
  • 12篇基因
  • 10篇蛋白
  • 8篇肿瘤
  • 6篇微RNAS
  • 6篇小鼠
  • 6篇干细胞
  • 5篇多态
  • 5篇多态性
  • 5篇血管
  • 5篇逆转
  • 5篇逆转录
  • 5篇逆转录聚合酶...
  • 5篇转录
  • 5篇酶链反应
  • 5篇聚合酶
  • 5篇聚合酶链反应
  • 5篇基因多态性
  • 5篇合酶
  • 4篇热休克

机构

  • 40篇北京大学
  • 2篇北京医院
  • 2篇山西中医学院
  • 2篇南华大学
  • 2篇太原市中心医...
  • 1篇大连医科大学
  • 1篇首都医科大学...
  • 1篇郑州大学第一...
  • 1篇航天中心医院
  • 1篇大连大学附属...
  • 1篇首都医科大学...

作者

  • 40篇何湘君
  • 15篇张旗
  • 7篇马丽萍
  • 6篇张培训
  • 6篇姜保国
  • 6篇张殿英
  • 5篇潘秀英
  • 5篇傅中国
  • 5篇赵富强
  • 5篇张宏波
  • 4篇侯树坤
  • 4篇何凌峰
  • 4篇王小峰
  • 4篇魏光如
  • 4篇刘玉京
  • 4篇管考鹏
  • 3篇何洋
  • 3篇李珊珊
  • 3篇刘广志
  • 3篇高旭光

传媒

  • 9篇北京大学学报...
  • 3篇中国药物与临...
  • 2篇中华实验外科...
  • 2篇中国生物化学...
  • 2篇中华医学教育...
  • 1篇中华神经科杂...
  • 1篇肿瘤研究与临...
  • 1篇中国老年学杂...
  • 1篇中华肿瘤杂志
  • 1篇中华内科杂志
  • 1篇中华医学杂志
  • 1篇中国普通外科...
  • 1篇中华手外科杂...
  • 1篇中华医学科研...
  • 1篇中国科技成果
  • 1篇西安交通大学...
  • 1篇中国临床康复
  • 1篇中国骨肿瘤骨...
  • 1篇中国妇产科临...
  • 1篇实用糖尿病杂...

年份

  • 1篇2019
  • 1篇2018
  • 4篇2015
  • 4篇2014
  • 1篇2013
  • 3篇2012
  • 2篇2011
  • 2篇2010
  • 4篇2009
  • 1篇2008
  • 4篇2007
  • 1篇2006
  • 2篇2005
  • 7篇2004
  • 1篇2003
  • 1篇2002
  • 1篇2001
共 40 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
RNAi干扰大鼠VSMCs钟基因Per2对Dbp及AT_1受体基因表达的影响
2018年
目的应用RNAi技术干扰大鼠A7r5血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Per2基因并检测VSMCs时钟基因Bmal1、输出基因Dbp及AT1受体基因(AGTR1)m RNA表达的变化,初步探讨时钟基因、输出基因及AGTR1间的相关性。方法应用已筛选携带大鼠Per2基因干扰序列的慢病毒载体转染大鼠血管平滑肌A7r5细胞,通过RT-PCR方法检测时钟基因Per2及Bmal1、钟控基因Dbp和AGTR1 m RNA水平及节律变化。结果慢病毒载体转染A7r5细胞后,RT-PCR方法检测钟基因Per2的m RNA峰值时相后移,表达节律异常;钟基因Bmal1的m RNA表达峰值增强,表达节律未受影响;下游输出基因Dbp的m RNA表达明显受抑,表达节律异常;AGTR1的m RNA表达后期明显下降,提示其变化延迟于Per2变化。结论通过RNAi技术沉默大鼠血管平滑肌细胞中时钟基因Per2表达,使钟基因Bmal1反向增强,明显抑制输出基因Dbp的表达,影响其节律,可能造成AGTR1的异常延后表达。
王翔凌孙宁玲马丽萍郭晓夏姜娟何湘君
关键词：时钟基因
肌球蛋白轻链激酶在非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用被引量：4
2015年
目的 研究肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠模型肠黏膜屏障变化中的作用,探讨肠黏膜屏障在NASH发病中的作用机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为正常饮食对照组、单纯性脂肪肝（NAFL）组、NAFL加MLCK特异性抑制剂ML-7组（NAFL＋ ML-7组）,NASH组以及NASH＋ ML-7组,每组为10只小鼠.HE染色法观察各组肝组织病理改变,免疫组化法测定小肠上皮中MLCK的表达,透射电镜观察小肠上皮细胞间紧密连接形态并测量细胞间隙宽度,ELISA法检测门静脉中内毒素脂多糖（LPS）浓度,测定外周血中转氨酶水平,ELISA和实时定量PCR法检测肝脏组织中炎性因子的浓度和mRNA表达.结果 NASH组小肠上皮细胞中MLCK表达量明显高于正常饮食对照组（P＜0.01）.NASH组紧密连接结构紊乱,细胞间隙宽度显著大于正常饮食对照组[（26.60±1.20） nm比（14.90±0.33） nm,P＜0.05],给予MLCK抑制剂ML-7后（NASH＋ML-7组）,紧密连接结构恢复,细胞间隙宽度[（14.90 ±0.67）nm]较NASH组明显减小（P＜0.05）.NASH组小鼠门静脉中LPS浓度显著高于正常饮食对照组[（7.260 ±3.184） U/L比（2.962±0.845）U/L,P＜0.05],NASH＋ ML-7组门静脉中LPS浓度[（3.772±1.033） U/L]显著低于NASH组（P＜0.05）.NASH组外周血ALT及AST水平明显高于正常饮食对照组（P均＜0.05）,肝脏中炎性因子TNFα、IL-6浓度及TNFα、IFM、NF-κB的mRNA水平显著高于正常饮食对照组（P均＜0.05）;给予MLCK抑制剂后（NASH＋ ML-7组）,外周血ALT和AST水平、肝脏中TNFα和IL-6浓度、肝脏中TNFα和NF-κB的mRNA水平均显著低于正常饮食对照组（P均＜0.05）.结论 NASH阶段小鼠肠黏膜通透性增加,MLCK可能在其中具有十分重要的调节作用,抑制MLCK后可以有效降低实验动物肠黏膜通透性,从而防治NASH.
张媛媛李晶迟毓婧李玫潘秀英张旗何湘君刘玉兰
关键词：肌球蛋白轻链激酶脂肪性肝病非酒精性肠道黏膜屏障
RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA被引量：32
2007年
目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性。方法:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3′末端加尾,再用5′带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig-dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBRGreen实时定量PCR扩增。结果:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3′末端碱基不同的亚型,但对序列中间个别碱基不同的亚型不能鉴别。对15种miRNA在大鼠心、肝和大脑皮层的相对表达的检测验证了该法的可靠性。另外,海马组织中的miRNAs表达与大脑皮层组织有一定差异。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。结论:该法可快速、敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs。
张旗何湘君潘秀英
关键词：微RNAS逆转录聚合酶链反应
GFAP启动子与骨髓基质干细施神经胶质分化的筛选被引量：6
2004年
目的 研究骨髓基质干细胞体外诱导分化,结合特异性GFAP启动子控制的EGFP的表达来筛选诱导的骨髓基质干细胞。方法构建报告载体pGFAP-EGFP,原代培养的骨髓基质干细胞,在β-ME、RA、forskolin、bFGF、PDGF-AA、HRG-β等复合物的诱导7 d后,pGFAP-EGFP载体转染,G418抗生素筛选。荧光显微镜下观察存活细胞体内的EGFP表达情况,流式细胞仪测定荧光细胞的比率。结果 报告载体pGFAP-EGFP构建成功,转染骨髓基质干细胞后部分细胞存活,流式细胞仪测定82.74％的细胞表达EGFP。筛选出的细胞GFAP免疫细胞化学鉴定阳性。体外扩增后可以得到大量的目的细胞。结论.特异性GFAP启动子控制的EGFP的表达可以在体外有效的进行骨髓基质干细胞的筛选和扩增。筛选后的细胞具有胶质细胞表型,可提供足够的胶质细胞进行神经系统的细胞替代治疗。
张培训姜保国何湘君赵富强魏光如张殿英傅中国张宏波
关键词：GFAP骨髓基质干细胞EGFP胶质细胞
大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定被引量：2
2014年
目的构建及筛选有效干扰大鼠血管平滑肌细胞PER2基因的shRNA慢病毒载体,并测定其干扰效率。方法设计大鼠PER2的siRNA靶序列,插入慢病毒载体质粒pGLV-U6-EGFP中,构建pLentivirus-per2-rat表达重组体并转染至A7r5大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内,利用Real-time PCR方法检测PER2基因的mRNA表达水平,筛选有效沉默钟基因PER2表达的RNAi慢病毒载体。结果经电泳、基因测序证实插入的目的序列正确,有PER2表达,成功构建了pLentivirus-per2-rat表达重组体;转染慢病毒载体pLentivirus-per2-rat至A7r5大鼠胸血管平滑肌细胞,测定转染效率达70%;Real-time PCR检测PER2基因的mRNA相对表达量,筛选出有效干扰大鼠血管平滑肌细胞钟基因Per2表达的siRNA片段,使PER2mRNA表达量下调约84%。结论成功构建了大鼠PER2的RNAi慢病毒载体,为进一步研究时钟基因的功能奠定了基础。
王翔凌孙宁玲马丽萍郭晓夏姜娟王鲁雁何湘君
关键词：RNA干扰慢病毒载体血管平滑肌细胞时钟基因
尤文肉瘤基因免疫治疗的研究被引量：11
2004年
目的检测尤文肉瘤融合基因EWSFLI1和人粒单核细胞集落刺激因子(hGMCSF)基因修饰的树突细胞(DC)疫苗对尤文肉瘤细胞株A673的杀伤作用。方法利用hGMCSF腺病毒(AdhGMCSF),在1000U/mlIL4作用下,从外周血单个核细胞(PBMC)诱生树突细胞(DC)并对其表型进行流氏细胞仪(FCM)分析,通过同种混合淋巴细胞反应以检测其免疫刺激活性。在lipofectamine的介导下,将含有尤文肉瘤融合基因EWSFLI1的真核表达质粒pCA13/EWSFLI1转染DC,通过RTPCR检测EWSFLI1的表达,并通过乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测其对A673细胞的杀伤作用。结果应用AdhGMCSF从PBMC成功诱生出CD83、CD80、CD86及HLADR高表达,CD14低表达的DC,其对同种淋巴细胞有很强的免疫刺激活性。pCA13/EWSFLI1转染DC后,RTPCR检测DC中有EWSFLI1mRNA的表达。杀伤试验结果表明,AdhGMCSF诱生、EWSFLI1修饰的DC,体外诱导抗原特异的CTL,效靶比为20∶1时对A673细胞杀伤率为(29.9500±0.0117)%,高于对照组(P<0.01)。结论AdhGMCSF能够成功地从PBMC中诱生出有功能的DC。真核表达质粒pCA13/EWSFLI1在lipofectamine的介导下转染AdhGMCSF诱生的DC,能在DC中有效地表达。此EWSFLI1基因修饰的、AdhGMCSF诱生的DC体外致敏自体T淋巴细胞,生成抗原特异CTL。
郭义郭卫汤小东高占成何湘君
关键词：尤文肉瘤基因治疗树突细胞腺病毒
介导尤文肉瘤融合基因的重组腺病毒的构建及其在外周血单个核细胞(PBMC)中的表达被引量：2
2004年
目的　构建尤文肉瘤融合基因EWS -FLI1重组腺病毒 ,并检测其在外周血单个核细胞(PBMC)中的表达 ,为进一步进行尤文肉瘤的免疫治疗奠定基础。方法　将质粒pEC1EWS/FLI1酶切 ,切出的EWS -FLI1cDNA片段克隆至腺病毒穿梭质粒padtrack -cmv的HCMV启动子下游。将连接后的穿梭质粒和骨架质粒Padeasy -1共同转化大肠杆菌BJ5 1 83菌株 ,获得同源重组后的腺病毒质粒pADEWS/FLI1。将此质粒转染 2 93细胞 ,包装产生腺病毒AdEWS -FLI1。扩增、纯化产生高滴度的AdEWS -FLI1。转染PBMC ,并通过RT -PCR和免疫组化法检测EWS -FLI1的表达。结果　同源重组后产生的pADEWS/FLI1经PCR鉴定构建成功 ,纯化后的滴度为 4× 1 0 10 /ml。转染PBMC后 ,RT -PCR证实有EWS/FLI1mRNA的转录 ,免疫检测法检测在PBMC中有EWS/FLI1的表达。结论　重组腺病毒AdEWS/FLI1构建成功 ,并能在PBMC中稳定有效地表达 ,为进一步进行尤文肉瘤的免疫治疗研究奠定了基础。
曲华毅郭卫李健何湘君
关键词：重组腺病毒外周血单个核细胞基因表达
骨髓间充质干细胞向雪旺细胞分化的体内外实验研究被引量：15
2004年
目的　研究骨髓间充质干细胞在体内、外条件下向周围神经雪旺细胞分化的可行性。方法　利用SD大鼠间充质干细胞 (取自股骨和胫骨 )贴壁生长的特性 ,培养纯化 ,传代扩增。用复合诱导因子(Beta mercaptoethanol,retinoicacid ,forskolin ,basic FGF ,PDGF ,heregulin β)在体外诱导间充质干细胞分化。用免疫细胞化学 (P75 ,S 10 0 ,GFAP)鉴定体外的诱导结果。将PKH67标记的间充质干细胞移植入损伤的周围神经动物模型内 ,术后 2周行组织切片免疫荧光染色 ,激光共聚焦定位移植细胞的去向。结果　诱导后的间充质干细胞形态类似雪旺细胞 ,免疫荧光鉴定骨髓间充质干细胞具有雪旺细胞性质 ,表达雪旺细胞的表面标志 (GFAP ,S 10 0和P75 )。周围神经组织切片免疫荧光染色后共聚焦定位的间充质干细胞表达雪旺细胞的表面标志 (GFAP ,S 10 0和P75 )。结论　骨髓间充质干细胞在体内、外都可以分化为具有雪旺细胞性质的细胞 ,表达GFAP ,S 10 0和P75。骨髓间充质干细胞有可能替代雪旺细胞促进周围神经的再生。
张培训姜保国何湘君赵富强魏光如傅中国张殿英张宏波
关键词：雪旺细胞骨髓间充质干细胞GFAPS-100激光共聚焦
细胞周期抑制性基因ANA在唐氏综合征患者脑组织过量表达被引量：1
2005年
目的分析唐氏综合征(Down syndrome,DS)胎儿脑组织21号染色体(Chr21)基因的表达,探讨DS脑病变的分子机制。方法采用优化的半定量RT-PCR法,以B2M为内参,检测了7个Chr21基因在DS胎儿及同龄对照胎儿大脑皮层及小脑组织中的表达。结果Chr21基因DYRK1A,SYNJ1,PCP4(purkinje cell protein4gene),C21orf5,C21orf2和C21orf106的表达在DS胎儿大脑皮层及小脑组织较正常对照均没有明显改变。ANA(abundantin neuroepithelium area)基因表达在DS胎儿小脑无明显改变,但在DS胎儿大脑皮层的表达显著升高。结论细胞周期抑制性基因ANA的过表达可能与DS患者脑组织神经元细胞密度低有关。
何湘君张旗马丽萍杨丽君沈浣郭静竹
关键词：唐氏综合征逆转录聚合酶链反应
尤文肉瘤融合基因修饰的重组腺病毒的构建及其转染的树突细胞体外抗尤文肉瘤免疫应答被引量：2
2006年
目的:构建尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1重组腺病毒,利用此腺病毒感染外周血单核细胞(PBMC),培养树突细胞(DC),检测感染后的DC致敏的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。方法:将质粒Pec1/EW S-FLI1酶切,切出的EWS-FLI1 cDNA片段克隆至腺病毒穿梭质粒padtrack-cmv的hCMV启动子下游。将穿梭质粒和骨架质粒共同转化大肠杆菌B J5183菌株,获得同源重组后的腺病毒质粒pADeasy-1/EW S-FLI1。将此质粒转染293细胞,包装产生腺病毒Ad EW S-FLI1。扩增、纯化产生高滴度的Ad EW S-FLI1。转染PBMC并经过鉴定后致敏淋巴细胞,4 h51Cr释放试验测定致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。结果:同源重组后产生的pADeasy-1/EW S-FLI1经PCR鉴定构建成功,纯化后的滴度为4×1010/mL。转染PBMC后,RT-PCR证实有EW S-FLI1 mRNA的转录。致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系有明显的杀伤作用,效靶比在40∶1时,对尤文肉瘤673细胞系的杀伤率为35.1800%±0.0128%,和对照组相比差异有统计学意义。结论:重组腺病毒Ad EW S-FLI1构建成功,并能在PBMC中稳定有效地表达,Ad EW S-FLI1转染的DC可高效地诱发机体T细胞的特异性抗肿瘤免疫应答作用。
曲华毅郭卫何湘君
关键词：腺病毒科重组融合蛋白质类
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