刘娇
- 作品数：14 被引量：30H指数：2
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- 丙型肝炎病毒F蛋白抑制肝癌细胞增殖功能的研究
- 2012年
- 目的研究HCV F蛋白的生物学功能。方法扩增目的基因片段，通过酶切连接方法将编码HCVF蛋白的基因片段克隆至载体pSEB-3Flag中，用构建好的重组质粒pSEB-3Flag-F转染Huh7、SMMC7721细胞，经Blasticidine抗性筛选，拟建立HCVF蛋白稳定表达的细胞株，用RT-PCR方法检测HCV-F基因的表达。通过MTS、细胞计数、结晶紫以及流式细胞检测实验观察F蛋白对转染细胞增殖和细胞周期的影响。计量资料分析采用t检验。结果成功建立了HCVF基因稳定表达的细胞株Huh7-F和SMMC7721-F，MTS、细胞计数实验均证实Huh7-F和SMMC7721-F细胞较对照细胞增殖速度减慢，Huh7-F稳定细胞株结晶紫定量爿值为1．072±0．070，对照组为1．387±0．005（f=-6．347，P〈0．05）；SMMC7721-F稳定细胞株4值为1．594±0．007，对照组为1．921±0．090（t=-4．81，P〈0．05）。流式细胞仪检测Huh7-F稳定细胞株48hS期细胞百分比分别为47．1妣±0．040／0，对照组S期细胞数为55．32％±1．45％（f=-7．99，P〈0．05）；SMMC7721-F稳定细胞株S期细胞百分比分别为30．75％±0．09％，对照组S期细胞数为33．23％±0．28％（f=-5．91，P〈0．05）。结论稳定转染HCVF基因可以明显抑制Huh7细胞、SMMC7721细胞的增殖。
- 周帆刘娇陈庆美单晓亮陈林林权会琴唐霓
- 关键词：肝炎病毒丙型肝细胞
- 丙型肝炎病毒核心蛋白稳定表达肝癌细胞株的构建及生物学研究被引量：1
- 2012年
- 旨在构建稳定表达HCV核心蛋白的稳定细胞系Huh7-Core并进行初步的生物学功能研究。利用PCR技术扩增HCV核心蛋白基因,通过酶切连接反应将目的基因克隆至载体pSEB-3Flag中,将重组质粒pSEB-3F-Core和辅助质粒pAmpho共转染Huh7细胞,经过Blasticidine抗性筛选,建立稳定表达HCV核心蛋白的肝癌细胞系Huh7-Core。采用RT-PCR、Western blot鉴定Huh7-Core细胞株中核心蛋白的稳定表达并采用MTS、结晶紫试验观察Huh7-Core稳定细胞株的增殖情况。结果显示,成功构建了表达HCV核心蛋白的稳定细胞株Huh7-Core。结晶紫、MTS试验证实Huh7-Core细胞较Huh7-3Flag细胞增殖速度增快,表达HCV核心蛋白的Huh7-Core稳定细胞株构建成功,Core稳定表达后可促进Huh7细胞生长速度。
- 单晓亮刘娇陈庆美周帆陈林林权会琴唐霓
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白生物学功能
- 丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路。方法将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达;用5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)对AdCore或AdGFP腺病毒感染的SMMC-7721细胞进行去甲基化处理,进一步采用甲基化特异性PCR(MSP)和DNA甲基化测序,检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度,Western blot检测甲基化转移酶Dnmts的表达。结果在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中,SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低(P<0.05);甲基化分析结果表明:SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰;甲基化转移酶Dnmt1、Dnmt3a表达量增加(P<0.05)。结论 HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰,参与HCV相关疾病的发生。
- 陈庆美刘娇周帆单晓亮陈林林权会琴唐霓
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白甲基化
- 丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建被引量：1
- 2011年
- 旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组。用PacⅠ酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒。利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测。结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP。成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究奠定了基础。
- 刘娇周帆陈庆美单晓亮唐霓
- 关键词：穿梭质粒同源重组腺病毒
- 丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK／ERK信号通路促进肝癌细胞增殖被引量：1
- 2012年
- 目的研究丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）编码蛋白E1的生物学功能。方法分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的腺病毒载体Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b；将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞，测定感染滴度，通过RT—PCR方法在转录水平鉴定HCVE1、E2、NS3、NS5a、NSSb的表达，用Western印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达。腺病毒感染SMMC-7721细胞后，通过细胞增殖实验筛选生物学功能最明显的蛋白。将筛选到的Ad—E1感染SMMC-7721细胞，用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响；Western印迹检测p-ERK、ERK的表达；RT—PCR检测c—Myc、cyclinD1、c—Jun、c．Fos基因的表达。结果成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的高滴度腺病毒Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b，并且通过RT—PCR方法在转录水平鉴定了目的基因的表达，Western印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蚩白的表达。通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad—E1感染组细胞较对照组增殖速度加快，细胞周期显示Ad-E1感染组细胞34．38％处于S期，明显高于Ad—GFP（27．32％）（P〈0．05）对照组；Ad-E1感染绢p-ERK蛋白表达量增高，同时与细胞增殖相关的MAPK／ERK下游基因转录水平上凋。结论体外过表达HCVE1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖，其促增殖作用可能与MAPK／ERK信号通路的活化相关。
- 陈庆美刘娇单晓亮周帆权会琴陈林林唐霓
- 关键词：丙型肝炎病毒丝裂原活化蛋白激酶细胞增殖
- 182例重庆地区支气管扩张儿童临床特征及多中心病因构成分析
- 背景：支气管扩张是支气管的不可逆扩张，导致支气管持续性或反复化脓性感染的临床综合征，包括相应临床症状和（或）体征、胸部CT特征性表现。儿童支气管扩张对儿童生长发育、社会经济负担等带来严重影响。我国尚无儿童支气管扩张统一诊...
- 刘娇
- 关键词：儿童患者支气管扩张病因构成
- 非血液系统恶性肿瘤相关性急性肾损伤患者预后相关危险因素分析被引量：5
- 2021年
- 目的:探讨非血液系统恶性肿瘤并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患者肾功能预后的相关因素,为改善肿瘤相关AKI患者的预后提供依据。方法:选择2015年1月至2019年12月在本院住院治疗的非血液系统恶性肿瘤合并AKI的住院患者145例为研究对象,收集患者相关临床资料,计算AKI(AKI在肿瘤确诊之后或同时确诊)的发生率,采用logistic回归模型分析非血液系统恶性肿瘤并发AKI患者肾功能预后的相关危险因素。结果:AKI的发生率为1.86%(145/7856),AKI的病因分布中,肾前性70例(48.28%)、肾性32例(22.07%)、肾后性17例(11.72%)、多病因26例(17.93%);AKI-1期84例(57.93%)、AKI-2期33例(22.76%),AKI-3期28例(19.31%);AKI患者28d肾脏预后情况:有30例(20.69%)完全缓解、26例(17.93%)部分缓解、89例(61.38%)未缓解。经多因素logistic回归分析校正后,AKI分期、少尿、合并多器官衰竭与患者肾脏预后相关,具体表现为:以AKI-1期作为参照.AKI-3期患者肾脏未缓解的风险比OR为12.884(1.448-102.128),少尿患者肾脏未缓解的风险比OR为6.290(1.789-21.547),合并多器官衰竭患者肾脏未缓解的风险比OR为4.614(1.298~15.897)o结论:AKI是非血液系统恶性肿瘤患者的常见且严重的并发症,以肾前性AKI常见,AKI分期晚、少尿以及合并多器官衰竭是AKI患者肾脏预后不良的独立危险因素。
- 冉亮周海洋殷胜强罗钰凯肖驰游晓蓉刘娇
- 关键词：急性肾损伤预后
- 骨形态发生蛋白和白血病抑制因子诱导肝干细胞分化被引量：1
- 2011年
- 目的在永生化的小鼠肝干（祖）细胞（HP）模型上筛选并优化高效的肝细胞定向分化诱导方法，探讨HP向肝细胞定向分化过程及分子机制。方法分别采用含人白血病抑制因子（LIF）、骨形态发生蛋白（BMP）2和BMP9基因的重组腺病毒感染HP，在病毒感染后第4天、第7天和第10天用糖原染色和吲哚花青绿（ICG）摄取实验观察HP的分化成熟度，并在第4、7、10、14天通过检测白蛋白启动子调控的荧光素酶报告基因活性，观察细胞合成白蛋白情况。计量资料比较用t检验。结果BMP2和BMP9对HP的诱导作用最强，荧光素酶活性、PAS染色和ICG摄取细胞阳性率随诱导时间的延长明显上升，在诱导后第7天最高，HP对BMP9的诱导应答最强，与对照组相比，酶活性增加了近9倍（t=17．30，P〈0．01），BMP2处理组增加了5倍（f=16．41，P〈0．01），LIF处理组增加了3倍（t=6．04，P〈0．01）。诱导第7天时，PAS染色细胞阳性率在BMP2和BMP9组分别为30％和45％；ICG细胞阳性率在BMP2和BMP9组分别为40％和30%。LIF诱导后，PAS染色、ICG摄取细胞阳性率以及荧光素酶活性有一定增加。结论BMP2、BMP9和LIF能够诱导HP向发育晚期肝细胞分化，并初步具备成熟肝细胞的一些功能。
- 高亚丽蔡雪飞刘娇单晓亮陈庆美周帆唐霓
- 关键词：干细胞细胞分化骨形态发生蛋白质类白血病抑制因子永生化
- Actin结合蛋白FLNA在RSV复制及炎症反应中的作用及机制研究
- 目的:细胞骨架(cytoskeletal)主要由微丝(actin filamentous,F-actin)、中间纤维(intermediate filaments,IFs)和微管(microtubules,MTs)组成。...
- 刘娇
- 关键词：呼吸道合胞病毒F-ACTIN病毒复制炎症反应RSVF-ACTINRSV病毒复制炎症反应RSV
- 丙型肝炎病毒核心蛋白诱导Wnt/β-catenin信号通路活化及其分子致病机制的研究
- 目的:肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界最常见的恶性肿瘤之一,在我国其死亡率仅次于胃癌和食道癌。丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染是肝癌发生的重要诱因之一...
- 刘娇
- 关键词：丙型肝炎病毒HCV核心蛋白CATENIN信号通路异常活化蛋白过表达
