刘家宏
- 作品数：17 被引量：78H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 带myc标签的人HER2基因真核表达载体的构建及其生物学功能被引量：4
- 2013年
- 目的构建人类HER2基因的真核表达载体,并对其促进乳腺癌细胞增殖效果及靶向药物敏感性进行验证。方法采用PCR技术扩增出HER2基因,将其插入到pXJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后,将其转染到乳腺癌ZR75-1细胞中,Western blot法检测其表达情况;CCK8法测定细胞生长曲线;加入靶向药物曲妥珠单克隆抗体后,观察转染细胞对药物的反应。结果酶切和测序结果证实表达质粒构建成功;Western blot法结果显示,myc-HER2蛋白在转染细胞中成功表达;转染myc-HER2的乳腺癌细胞较空载体细胞生长较快;加入曲妥珠单克隆抗体后,转染myc-HER2的细胞生长明显受到抑制。结论成功构建了带myc标签的HER2基因真核表达载体,为进一步研究曲妥珠单抗的耐药奠定了实验基础。
- 宋金洁王涛徐小洁符静刘家宏叶棋浓江泽飞
- 关键词：MYC
- 人FHL1各LIM结构域融合蛋白的原核表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2013年
- 目的构建人FHL1各LIM结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4融合蛋白,并对其活性进行检测。方法用PCR法从FHL1真核表达载体中扩增FHL1的LIM1/2、LIM1、LIM2、LIM3和LIM4基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,通过GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白雌激素受体α(ERα)的相互作用。结果构建得到FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期大小相符的目的蛋白,经Western blot法检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4五个融合蛋白,GST pull-down证明FHL1全长以及FHL1-LIM1/2、-LIM2蛋白可以和ERα相互作用。结论成功克隆FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因,并获得了活性良好的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4蛋白,为研究FHL1在乳腺癌中的作用奠定了实验基础。
- 符静徐小洁刘家宏范忠义王涛宋金洁吕朝晖朱建华叶棋浓陆菊明
- 关键词：原核表达纯化ERΑ
- 人激活转录因子5基因真核表达载体的构建及其生物学功能研究
- 2014年
- 目的:构建带myc标签的人激活转录因子5(ATF5)的真核表达载体,获得myc-ATF5融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的带有XL5标签的ATF5质粒为模板,采用PCR技术扩增ATF5编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体中,Western印迹检测其表达;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹和qRT-PCR检测其下游基因哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在蛋白和mRNA水平的变化。结果:双酶切和测序结果表明myc-ATF5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后获得表达;Western印迹和qRT-PCR证明myc-ATF5可升高mTOR的转录和蛋白水平。结论:构建了带myc标签的人ATF5真核表达载体,为进一步研究ATF5在自噬中的功能奠定了基础。
- 符静徐小洁刘家宏田沛荣范忠义吕朝晖王涛朱建华陆菊明叶棋浓
- 关键词：真核表达生物学功能
- 人抑癌基因NKX2-3真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞生长的作用被引量：1
- 2015年
- 目的:构建人抑癌基因NKX2-3的真核表达载体,并验证其对肿瘤细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人NKX2-3基因,将其克隆到Flag-pc DNA3.0载体中,酶切和测序验证后转染人胚肾293T细胞,蛋白免疫印迹鉴定其表达;转染人结肠癌细胞HCT-116和肝癌Hep G2细胞,通过CCK8法测定细胞生长曲线。结果:从人乳腺文库中扩增得到约1080 bp的DNA片段,并克隆至Flag-pc DNA3.0载体上,测序结果与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后,目的基因获得表达;细胞生长曲线结果显示,转染Flag-NKX2-3的人结肠癌、肝癌细胞较空载体细胞生长慢。结论:构建了Flag-NKX2-3真核表达载体,为进一步研究NKX2-3在肿瘤中的功能奠定了基础。
- 冯滢滢郭靖刘家宏徐小洁张云静陈云萍叶棋浓赵克
- 关键词：真核表达肿瘤细胞
- 人p53启动子萤光素酶报告基因的构建及其活性测定
- 2013年
- 目的:克隆p53基因的启动子,插入萤光素酶报告基因载体,并检测启动子活性。方法:采用PCR技术从人肝癌细胞系HepG2基因组中扩增人p53启动子,插入萤光素酶报告基因载体pGL4.0-empty,将重组质粒转染293T、ZR75-1、HepG2、A549细胞,测定p53启动子的转录活性。结果:构建了p53启动子的萤光素酶报告基因;通过测序及质粒酶切鉴定,所构建的p53启动子正确;活性实验表明,报告基因在多种细胞中显示构建的p53启动子活性,并呈现一定的剂量效应;转录因子USF能以剂量效应方式提高p53报告基因的转录活性。结论:克隆了人p53启动子,为进一步研究调控p53的转录因子奠定了基础。
- 刘家宏徐小洁符静范忠义吕朝晖陆菊明肖文华叶棋浓朱建华
- 关键词：萤光素酶报告基因转录活性
- 中晚期癌症患者支持治疗需求及影响因素分析被引量：15
- 2016年
- 目的探讨癌症患者支持治疗需求的影响因素。方法应用癌症患者支持性需求简明问卷（SCNS-SF34）中文版对2014年12月-2015年8月就诊于本院肿瘤科326例中晚期癌症患者进行问卷调查。共收回有效问卷321份。患者年龄22-86（56.48±11.65）岁,其中男性177例（55.1%）,女性144例（44.9%）。结果中晚期癌症患者支持性照顾需求各领域得分由高到低依次为卫生系统和信息需求（2.67±0.99）、生理和日常生活需求（2.63±1.12）、病人照顾和支持需求（2.51±1.03）、心理需求（2.34±1.03）和性需求（1.39±0.79）。在影响癌症患者支持治疗需求的因素中,性别影响生理和日常生活需求及卫生系统和信息需求;年龄影响心理需求和性需求;疼痛和KPS评分影响生理和日常生活需求及心理需求;确诊时长影响性需求;目前治疗种类影响病人照顾和支持需求及卫生系统和信息需求。结论中晚期癌症患者在卫生系统和信息、生理和日常生活、病人照顾和支持、心理及性方面的需求未得到满足,癌症患者的需求受性别、年龄、疼痛、KPS评分、确诊时长及目前治疗种类等因素影响,医务人员需根据患者的不同需求给予相应的支持。
- 杨璞朱建华肖文华刘家宏周旋李秋文
- 关键词：肿瘤病人社会支持
- 人组蛋白H3真核表达载体的构建及功能初步检测
- 2013年
- 目的构建带myc标签的人组蛋白H3基因真核表达载体,获得Myc-H3融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测。方法采用PCR技术从乳腺文库中扩增人H3基因编码序列,将其正确插入pXJ-40-myc载体,重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western blot法检测融合蛋白表达,通过免疫共沉淀技术检测融合蛋白与已知结合蛋白组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶(LSD1)和组蛋白甲基转移酶(EZH2)的相互作用。结果构建得到组蛋白H3基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;经Western blot法检测,融合蛋白成功表达;免疫共沉淀检测证实Myc-H3融合蛋白可以和已知相互作用蛋白LSD1及EZH2相互作用。结论成功构建组蛋白H3真核表达载体,该融合蛋白正确表达。
- 刘家宏徐小洁符静王小娟范忠义吕朝晖陆菊明叶棋浓朱建华
- 关键词：甲基化H3EZH2相互作用
- 医护人员及肿瘤患者对癌痛认知的调查分析被引量：1
- 2015年
- 目的 调查医护人员对癌痛的认知以及肿瘤患者疼痛控制状况,观察目前癌痛控制中存在的问题,为完善癌痛管理提供依据.方法 采用自行设计的癌痛相关认知调查表调查我院肿瘤科及相关科室医护人员48名,及自行设计的肿瘤患者疼痛情况调查表调查就诊于我院肿瘤科的癌症患者321名.结果 81.3％ （39/48）的医护人员会在治疗前对疼痛患者进行全面评估;22.9％（11/48）认为初始出现疼痛时应首先转移患者注意力;81.3％（39/48）认为应通过患者主诉来评估癌痛患者的疼痛强度;仍有6.3％（3/48）医护人员不清楚WHO三阶梯止痛原则,10.4％（5/48）不清楚疼痛评分方法;27.1％（13/48）的医护人员选择哌替啶处理爆发痛;对于慢性癌痛的治疗45.8％ （22/48）认为应该按需给药;22.9％（11/48）的医护人员认为应当用阿片类药物出现副反应时再处理.调查的癌症患者中疼痛发生的比例为44.2％（142/321）.癌痛患者使用止痛药物的顾虑主要有：认为止痛药物会成瘾（38/124,30.6％）、认为止痛药物副作用太大,尽量不用（31/124,25.0％）、担心疼痛加重是病情进展的信号（19/124,15.3％）.结论 医护人员和患者对癌痛诊疗和药物使用方面普遍存在错误认知,我院癌痛规范化管理措施有待提高.
- 杨璞朱建华肖文华刘家宏周旋李秋文
- 关键词：医护人员肿瘤疼痛
- 调控p53的转录因子的筛选及其功能研究
- 肿瘤的发生、发展涉及多种癌基因与抑癌基因的激活与失活。p53作为重要的抑癌基因能够通过调节细胞周期、DNA损伤修复、细胞衰老和凋亡等抑制肿瘤形成。作为抑癌基因,研究发现肿瘤抑制因子p53突变率最高。恶性肿瘤中p53的失活...
- 刘家宏
- 关键词：P53基因生物学功能表观遗传学
- 文献传递
- 慢病毒介导的mTOR敲低肝癌细胞株HepG2的构建及初步功能检测
- 2013年
- 目的:建立高效稳定的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,并对mTOR敲低的HepG2肝癌细胞株的功能进行初步检测。方法:构建了2条不同的人mTOR慢病毒siRNA载体pLenti-H1/mTOR siRNA,与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染HepG2细胞;经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹,检测mTOR敲减效果及其下游基因c-myc、周期蛋白D1(cyclinD1)表达水平及4E-BP1、S6K1磷酸化水平的变化。结果:RT-PCR和Western印迹结果显示,构建的pLenti-H1/mTOR siRNA能有效抑制mTOR基因的表达,敲低了mTOR蛋白水平,且沉默mTOR后其下游基因c-myc、CyclinD1的表达水平及4E-BP1、S6K1磷酸化水平降低。结论:构建了慢病毒介导RNA干扰mTOR表达载体,为进一步研究mTOR通路奠定了实验基础。
- 刘家宏徐小洁符静范忠义吕朝晖陆菊明肖文华朱建华叶棋浓
- 关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白RNA干扰慢病毒
