咸海青
- 作品数：10 被引量：28H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人睫状神经营养因子的原核表达、纯化及其生物效应被引量：3
- 1996年
- 人睫状神经营养因子（ｈＣＮＴＦ）克隆入ｐＢＶ２２０中，在ＤＨ５α菌株中表达，重组蛋白以包含体的形式存在，表达量为菌体总蛋白的５０％左右。经比较发现用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包含体可溶解大量可溶性细菌蛋白，且包含体损失较小。在高浓度变性剂条件下进行ｓｅｐｈａｒｃｙｌＳ－２００凝胶过滤，解决了纯化中ｈＣＮＴＦ易聚合的问题，在低浓度变性剂条件下进行ＤＥＡＥ离子交换，有利于蛋白活性的保持。经两步纯化后得到均一性ｈＣＮＴＦ，纯度达９５％以上。在自然状态下使ｈＣＮＴＦ复性。纯化复性后的ｈＣＮＴＦ对无血清培养的鸡胚背根节神经元和脊髓腹角运动神经元有明显的维持存活和促进生长发育的生物效应。
- 咸海青范明甘思德刘淑红丁爱石
- 关键词：神经营养因子CNTF原核表达生物效应
- 人睫状神经营养因子的原核高效表达
- 1995年
- 睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)是神经生长因子家族之外的一种神经营养因子,由200个氨基酸组成,分子量约22.86kD,等电点6.00。CNTF对睫状副交感神经元、交感神经元、感觉神经元、视网膜神经节细胞、脊髓运动神经元、海马神经元等多种中枢及外周神经元有促存活作用。CNTF也是第一个被发现的能维持在体和离体脊髓运动神经元的存活及突起生长的神经营养因子,因此在神经创伤和神经退行性病变的诊断与治疗中有巨大的临床价值。由于CNTF在天然组织中含量甚微。
- 咸海青范明刘红刘淑红杜方勇甘思德
- 关键词：人睫状神经营养因子脊髓运动神经元视网膜神经节细胞基础医学研究神经退行性病变CNTF
- 重组人睫状神经营养因子的复性研究被引量：7
- 1999年
- 利用凝胶层析对人睫状神经营养因子原核基因工程产品进行复性研究， 发现此方法的复性率高于稀释透析法． 而且在复性的同时也进行了一步纯化工作． 该方法简单、迅速、高效、重复性好， 可用于规模生产．
- 咸海青范明吴燕邱宗荫
- 关键词：复性包涵体
- 纤维型和原浆型星形胶质细胞的分离培养及睫状神经营养因子对其增殖的影响被引量：6
- 1999年
- 目的和方法：建立纤维型及原浆型星形胶质细胞体外分离培养的方法，并观察在体外睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＣＮＴＦ）对这两种细胞的增殖作用。结果和结论：经免疫组织化学鉴定，本方法分离培养的星形胶质细胞，纤维型纯度达９５％，原浆型纯度达９９％。ＣＮＴＦ可以促进纤维型星形胶质细胞的增殖，而对原浆型星形胶质细胞的促增殖作用不明显。
- 咸海青丁爱石梁平梁平汪家政范明
- 关键词：星形胶质细胞增殖
- CNTF在受损星形细胞胶质化过程中的表达及其作用
- 2001年
- 在培养胶质细胞机械损伤模型上利用RNA探针原位杂交技术研究了睫状神经营养因子(CNTF)mRNA在星形细胞胶质化过程中的表达及其自调控.结果显示,在未划伤组,O-2A前体细胞中CNTF mRNA表达水平高于原浆型星形胶质细胞(Flat-A).损伤后,未划伤区Flat-A及O-2A细胞中CNTF mRNA的表达水平无显著变化,然而在划伤沟两侧的Flat-A细胞中CNTF mRNA表达增加,伸出的肥大细胞质型突起因深染而显得十分明显.加入外源CNTF 2h后引起划伤沟两侧及中间未划伤区Flat-A细胞CNTF mRNA表达增加,24h达到高峰,48h后下降到初始水平.以上结果提示,CNTF mRNA在受到损伤的星形胶质细胞中表达增高,外源性CNTF能促进Flat-A细胞CNTF mRNA表达.
- 咸海青范明于顺刘淑红邱宗荫
- 关键词：睫状神经营养因子星形细胞中枢神经系统神经元神经损伤
- CNTF多克隆抗体的制备与初步应用被引量：6
- 1997年
- 以重组表达并经纯化的人睫状神经营养因子（hCNTF）免疫家兔，得到抗ACNTF抗血清。经硫酸铵沉铁、proteinA亲和层析后得到纯化的抗hCNTF多克隆抗体。应用该抗体对大鼠脑组织进行免疫组化研究，结果发现：CNTF抗体染色阳性物不仅存在于各脑区胶质细胞中，而且也存在于皮质的各层神经元，小脑分子层神经元、蒲肯野细胞、小脑颗粒细胞，海马锥体细胞、齿状回勤粒细胞及面神经核细胞中。CNTF祥物质不仅存在于神经元胞浆中，也存在于胞核中。
- 杨青峰咸海青谭湘陵曹铮陈彪万选才范明
- 关键词：睫状神经营养因子多克隆抗体CNTF
- 睫状神经营养因子对新生大鼠培养星形细胞胶质化的影响被引量：1
- 2000年
- 在新生大鼠混合培养胶质细胞机械划伤模型上, 研究了睫状神经营养因子(CNTF)对反应性星形细胞胶质化的影响. 损伤后, 在损伤边缘可见典型的星形细胞胶质化过程, 表现为扁平型星形胶质细胞增生肥大, 其胞内GFAP表达增加, O-2A前体细胞向受损区域迁移, 并分化成为突起型星形胶质细胞. 向培养基加入外源性CNTF可促进损伤边缘的扁平型星形胶质细胞的增生及GFAP的表达. 结果提示CNTF可以加强损伤区的星形细胞胶质化.
- 咸海青范明于顺刘淑红丁爱石米瑞发邱宗荫
- 关键词：睫状神经营养因子神经损伤
- 关于睫状神经营养因子与星形胶质细胞关系的研究
- CNTF作为一个多功能细胞因子,过去人们更关注于它的神经营养活性,然而胶质细胞是中枢神经系统重要的组成部分,在维持神经元正常生理功能中起着重要作用,于是作者开展了关于CNTF与星形胶质细胞关系的研究.首先,利用凝胶过滤层...
- 咸海青
- 关键词：基因表达分泌机制星形胶质细胞
- CNTF及其受体在不同类型星形胶质细胞中的表达
- 2001年
- 目的 研究 CNTF及其受体在不同类型星形胶质细胞中的表达分布。 方法 星形胶质细胞的原代分离培养结合地高辛标记的 RNA探针及寡核苷酸探针原位杂交技术。 结果 0 - 2 A前体细胞和纤维型星形胶质细胞中 CNTF m RNA表达高 ,大多数原浆型星形胶质细胞 CNTF表达低 ,只有约 5 %的原浆型星形胶质细胞群可见较高 CNTF m RNA的表达。原浆型与纤维型星形胶质细胞中 CNTFRα m RNA表达相同。 结论 CNTF在不同类型星形胶质细胞中的表达水平不同 ,但其受体的表达水平无差别。
- 咸海青范明于顺刘淑红邱宗荫
- 关键词：睫状神经营养因子CNTF
- rhCNTF对鸡胚感觉与运动神经元神经营养作用的比较被引量：7
- 1997年
- 在无血清培养条件下，观察了重组人睫状营养因子（ｒｈＣＮＴＦ）对鸡胚背根节感觉神经元及腹角运动神经元的营养作用。结果表明ｒｈＣＮＴＦ对这两类神经元均有明显的促存活作用，并呈一定的剂量／效应关系。ｒｈＣＮＴＦ浓度在０．５ｎｇ／ｍｌ以下时无作用，１．０－１．５ｎｇ／ｍｌ时已有促神经元存活作用，４ｎｇ／ｍｌ时作用最明显，再增加到１００ｎｇ／ｍｌ神经元存活数无进一步增加。比较培养７天时两类神经元存活数发现感觉神经元对ＣＮＴＦ缺乏的敏感性高于运动神经元。
- 咸海青刘淑红顾晓松严志强范明
- 关键词：运动神经元感觉神经元神经营养作用
