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将串联亲和纯化标签敲入耻垢分枝杆菌基因组的方法研究(英文): 2012年; 目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将串取亲和纯化(TAP)标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5’端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3’端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果。结果 PCR与DNA测序结果证实带有TAP标签的A5THA3片段已成功敲入耻垢分枝杆菌基因组中。结论成功将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组,为下一步进行目的基因功能研究奠定了基础。; 赵秀芹夏强赵丽丽万康林; 关键词：重叠PCR 耻垢分枝杆菌

MGIT 960和比例法对结核分枝杆菌药物敏感性试验的对比研究被引量：10: 2011年; 目的评价BACTEC MGIT960检测8种抗结核药物耐药性的效果。方法用MGIT960对结核杆分枝杆菌临床分离菌株进行抗结核药物异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药敏检测,并将结果与L-J比例法结果进行比较分析。结果用MGIT960法与L-J比例法对118株结核分枝杆菌临床分离株进行异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺的耐药性检测,两种方法的符合率分别为97.5%(115/118)、92.4%(109/118)、96.6%(114/118)、84.7%(100/118)、94.9%(112/118)、94.1%(111/118)、97.5%(115/118)、85.6%(101/118)。MGIT960完成一线/二线药物药敏试验的时间平均为8.9和8.3天,L-J法则分别为26.7天和26.1天,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MGIT960所得的药敏结果与传统比例法有较高的一致性,但检测时间较短,有利于耐药结核病人的早期诊断和治疗。; 赵丽丽夏强刘志广赵秀芹万康林; 关键词：BACTEC MGIT

等位基因特异性多重PCR快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的初步研究被引量：7: 2011年; 目的建立等位基因特异性多重聚合酶链反应(multiplex allele-specific PCR,MAS-PCR)技术,以快速检测结核分枝杆菌对喹诺酮的耐药性。方法根据结核分枝杆菌gyrA基因序列,分别设计4条特异性寡聚核苷酸引物,优化PCR条件,建立针对gyrA基因90和94位点突变进行检测的MAS-PCR技术,对临床分离菌株进行喹诺酮耐药性检测,同时以比例法和DNA直接测序法做对照。结果共对144株喹诺酮敏感株和56株喹诺酮耐药株进行了MAS-PCR检测。MAS-PCR与比例法比较,敏感性为53.57%(30/56);与DNA测序比较,敏感性为71.43%(30/42),特异性均为100%(144/144)。结论 MAS-PCR技术检测结核分枝杆菌对喹诺酮耐药性简便、快速、特异性高,但敏感性需进一步提高。; 夏强赵丽丽刘志广刘劼万康林; 关键词：结核分枝杆菌喹诺酮耐药

中国结核分枝杆菌临床分离株二线抗结核药物耐药性的初步研究: 目的:　　评价BACTEC MGIT960法检测一线、二线抗结核药物敏感性的效果;初步分析结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药株gyr基因突变特点,探讨耐药表型与gyr基因突变的关系;用间隔区寡核苷酸分型(Spacer olig...; 夏强; 关键词：结核分枝杆菌二线抗结核药物耐药性; 文献传递

BACTEC MGIT 960在二线抗结核药物药敏试验应用中的效果评价: 2011年; 目的评价BACTEC MGIT 960进行4种二线抗结核药物药敏试验的效果。方法用MGIT 960对结核分枝杆菌临床分离菌株进行二线抗结核药物卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药敏检测,并将结果与L-J比例法结果进行比较分析。结果 111株结核分枝杆菌临床分离株用MGIT 960法与L-J比例法卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺药敏符合率分别为95.5%(106/111)、93.7%(104/111)、97.3%(108/111)、85.6%(95/111)。与比例法药敏结果比较,MGIT 960药敏检测的敏感度、特异度和准确性,卷曲霉素分别为80.0%、97.0%、95.5%,卡那霉素分别为92.3%、93.9%、93.7%,氧氟沙星分别为95.3%、98.5%、97.3%,乙硫异烟胺分别为100%、81.2%、85.6%。MGIT 960完成药敏试验的时间平均为8.3 d,L-J法平均为26.2 d,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MGIT 960所得的药敏结果与传统比例法有较高的一致性,但检测时间较短,有利于耐药结核病患者的早期诊断和治疗。; 赵丽丽夏强刘志广赵秀芹万康林; 关键词：BACTEC MGIT 结核分枝杆菌比例法

耐多药结核分枝杆菌对喹诺酮类药物的耐药性与gyr基因突变的初步研究被引量：5: 2011年; 目的分析耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离株的gyr基因突变特点,探讨MDR-TB对喹诺酮类药物耐药产生与gyr基因突变的关系。方法采用比例法对耐多药结核临床分离菌株进行氧氟沙星的药物敏感性检测,应用DNA直接测序法检测MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 125株MDR-TB临床分离株中,50株对喹诺酮类耐药,耐药率为40%。50株耐药菌株中,40株gyr基因发生突变:其中39株gyrA基因突变,突变率为78%,突变位点包括90,91和94位氨基酸;5株gyrB基因突变,其中4株合并gyrA基因突变,gyrB基因突变位点为500,506,534和539位氨基酸。结论 MDR-TB中的喹诺酮类药物耐药态势比较严峻,其对喹诺酮类药物耐药机制主要与gyrA基因突变有关。; 赵丽丽夏强赵秀芹刘志广万康林; 关键词：喹诺酮 GYRA基因耐多药结核分枝杆菌

结核分枝杆菌对二线药物耐药性及机制研究进展被引量：2: 2011年; 结核病耐药性的产生和传播已成为全球公共卫生工作的焦点。世界卫生组织（WHO）最新统计显示,全球有39万～51万例耐多药结核病（multi-drug-resistant tuberculosis,MDR-TB）,其中50%分布在印度和中国。; 夏强万康林; 关键词：结核分枝杆菌药物耐药

利用分枝杆菌的重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌的方法研究被引量：2: 2011年; 目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5′端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3′端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果。结果重叠PCR技术得到全长为3 200 bp的敲入片段,PCR与DNA测序结果证实带有TAP标签的A5THA3片段已成功敲入耻垢分枝杆菌基因组中。结论成功将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组,为下一步进行目的基因功能研究奠定了基础。; 赵丽丽夏强赵秀芹万康林; 关键词：重叠PCR 耻垢分枝杆菌

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夏强