尹尚莲
- 作品数：12 被引量：70H指数：4
- 供职机构：云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究被引量：2
- 2014年
- 为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。
- 刘晓慧杨云庆叶玲玲祝贺吕建强赵文华颜红尹尚莲花群义杨仕标张光培周晓黎董俊艾军
- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体竞争ELISA
- 羊痘病毒P32蛋白编码基因的克隆及表达被引量：14
- 2006年
- 为获得山羊痘病毒膜蛋白重组P32抗原,根据其基因序列设计合成了1对特异性引物, 对CaPV P32基因进行了PCR扩增,产物大小约为969 bp;产物回收纯化后,将其克隆至pBAD／ Thio-TOPO载体中,转化TOP10大肠埃希氏菌感受态细胞,与已报道的多株CaPV P32基因序列的同源性高达99％;相应地,氨基酸序列同源性为98％。经测序筛选出阳性克隆,该重组菌株经 L-arabinose诱导,可稳定、高效地表达CaPV P32抗原。表达蛋白为融合蛋白,分子质量约 51．53 ku。
- 康文玉徐自忠花群义杨云庆周晓黎董俊尹尚莲高洪
- 关键词：山羊痘病毒克隆
- 蓝舌病灭活苗免疫与自然感染的鉴别诊断研究
- 周晓黎艾军杨云庆叶玲玲张光培祝贺董俊尹尚莲
- 蓝舌病主要侵害绵羊等反刍动物,是世界动物卫生组织(OIE)需通报的动物疫病,中国规定为一类动物传染病.2008年,欧洲流行的蓝舌病病毒8型,给当地反刍动物的健康造成极大危害.欧洲国家采取了疫苗免疫的方式进行防控.为此,课...
- 关键词：
- 关键词：蓝舌病动物疫病疫苗免疫动物传染病
- 小反刍兽疫的诊断方法和疫苗研究现状
- 小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)对绵羊和山羊的发病率和死亡率分别可高达100%和90%[1],在发展中国家引起严重的社会经济问题,被OIE列为A类疾病。该病首次...
- 尹尚莲艾军叶玲玲董俊杨晓花张其艳周晓黎
- 关键词：小反刍兽疫疫苗研究
- 文献传递
- 猴B病毒ELISA检测方法的建立
- 董俊艾军叶玲玲杨云庆周晓黎祝贺张光培尹尚莲
- 猴B病毒是一种人畜共患病,感染多种哺乳动物和禽类.近年来,在中国每年均有一定数量的猕猴、食蟹猴等出口欧美地区,而且也从东南亚地区进口一定数量的猴子,为此对其进出境猴子B病毒的检测,一直是检验检疫工作的重要任务之一.在国家...
- 关键词：
- 关键词：人畜共患病抗体检测方法
- 检验检疫新技术研究进展
- 2006年
- 最近几年才兴起的生物芯片、核酸序列依赖性扩增法(NASBA)及荧光定量PCR技术同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐。但仍有好多初学者对这方法的知识了解甚少,为了解决这一问题,本文就从生物芯片、核酸序列依赖性扩增法及荧光定量PCR的定义、原理、检测中的应用和各自的优点做一简单的综述,以便相互之间的学习和进步。
- 刘玉洪徐自忠花群义高洪杨云庆周晓黎董俊尹尚莲
- 关键词：生物芯片NASBA荧光定量
- 小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因原核表达载体的构建及表达被引量：13
- 2006年
- 参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRV H基因,将其克隆至pUC18-T质粒中,转化E.coliJM109感受态细胞,构建并选择PPRV H基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio-TOPO载体中,转化E.coliTOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRV H基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRV H抗原。SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2 g/L的L-阿拉伯糖诱导5 h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83 ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占菌体总蛋白的10%。Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRV H蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRV H糖蛋白抗原。
- 刘玉洪花群义徐自忠杨云庆周晓黎董俊尹尚莲许靖逸高洪
- 关键词：小反刍兽疫病毒
- 非洲马瘟病毒VP7基因的克隆与表达被引量：4
- 2006年
- 为获得非洲马瘟病毒VP7蛋白,以用于制备AHS血清学诊断试剂并为AHS新型疫苗的构建奠定基础,笔者采用原核表达系统表达VP7蛋白。在GeneBank中查找非洲马瘟病毒VP7基因序列,人工合成VP7基因,将VP7基因片段克隆插入pBAD/Thio-TOPO表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌TOP10。经测序鉴定,筛选获得VP7基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,经L-Arabinose诱导表达VP7融合蛋白抗原。SDS-PAGE分析表明以终浓度为0.2%的L-阿拉伯糖进行诱导,4h后表达可达到高峰,融合蛋白质量约54.72kDa。Westernblotting检测和间接ELISA表明诱导表达的融合蛋白能与非洲马瘟病毒VP7单克隆抗体发生特异性反应,说明蛋白有特异的免疫学活性。
- 曾昭文花群义段纲周晓黎董俊杨云庆尹尚莲项勋常华
- 关键词：非洲马瘟病毒VP7基因克隆
- 生物芯片、核酸序列依赖性扩增法及荧光定量PCR在检测方面的研究进展被引量：3
- 2006年
- 最近几年才兴起的生物芯片、核酸序列依赖性扩增法(NASBA)及荧光定量PCR技术同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐。但仍有好多初学者对这方法的知识了解甚少,本文就生物芯片、核酸序列依赖性扩增法及荧光定量PCR的定义、原理、检测中的应用和各自的优点做一简单的综述,以便相互之间的学习和进步。
- 刘玉洪徐自忠花群义高洪杨云庆周晓黎董俊尹尚莲
- 关键词：生物芯片NASBA荧光定量
- 羊痘病毒实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立被引量：27
- 2006年
- 参照羊痘病毒(CaPV)P32的基因序列,设计合成了2套引物和1条探针,建立了实时荧光定量PCR技术,对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示,用300 nmol／L引物浓度和200 nmol／L探针浓度,获得的Cr值较小,而△Rn最大;可检测到相当于0．1 TCID50的病毒DNA;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0．999 5以上;组内和组间试验重复性的变异系数分别为2．3％和3．4％;与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,可同时检测大量样品等优点。表明。荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法,可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。
- 康文玉徐自忠花群义杨云庆周晓黎董俊尹尚莲高洪
- 关键词：羊痘病毒PCR
