张振龙 作品数:11 被引量:29 H指数:4 供职机构: 北京生物制品研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 化学工程 更多>>
重组人肿瘤坏死因子α(hTNFα)衍生物发酵条件的研究 被引量:3 1999年 本文对一种新型重组人肿瘤坏死因子衍生物(命名为hTNFD)的发酵条件进行了初步研究。通过实验优化选择了适宜该衍生物表达的培养基、IPTG使用浓度、诱导时期以及诱导时间的长短等,并在50L发酵罐进行了中试规模的放大培养,菌体的收获量湿重可达1643g/L,hTNFD表达量占总蛋白的60%,纯化的衍生物比活为101×1010U/mg,比原型hTNFα提高了465倍,具有潜在的临床应用价值。 徐春晓 倪道明 张振龙 王春荣 樊晓翔 邓婉明关键词:肿瘤坏死因子 衍生物 发酵 3种新型人肿瘤坏死因子衍生物在大肠杆菌中的表达与活性检测 被引量:9 2000年 目的 研制高抗瘤活性的新型肿瘤坏死因子。方法 在总结前人有关hTNF α结构与功能关系研究的基础上 ,应用PCR技术构建了 3种多位点同时突变的hTNF α新型编码基因 ,分别在大肠杆菌中进行表达 ,并用DNA序列分析和Westernblot进行鉴定 ,L92 9细胞检测体外抗瘤活性。结果 3种衍生物均在大肠杆菌中获得高效表达 ,活性测定结果表明 ,3种衍生物对L92 9细胞的细胞毒活性分别比原型hTNF α提高 5 76、6 41和 15 3倍。结论 3种衍生物的抗瘤活性有了较大的提高 。 徐春晓 倪道明 张振龙 王春荣 赵秀芬关键词:肿瘤坏死因子 聚合酶链反应 大肠杆菌 血小板生成素基因的克隆及其初步表达 1999年 自 4月龄胎肝中提取总 RNA,经逆转录、多聚酶链反应 (PCR)获得了人血小板生成素 (TPO)全基因 ,长约 10 80 bp。将经限制性内切酶 Nde 和 Hind 双酶切后的 TPO基因与 p RSET A载体相连接 ,转化大肠杆菌后得到两个阳性重组质粒 p T4和 p T10。经核苷酸序列分析证实 ,所克隆的基因与文献报道一致。将 p T4转染 E. coli JM10 9(DE3) ,经 1mmol/ L IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE分析 ,相对分子质量约 40 0 0 0处可见一条明显的表达带。 张琰平 樊晓翔 张振龙关键词:血小板生成素 多聚酶链反应 克隆 应用ELISA与中和试验测破伤风抗毒素的比较 被引量:6 1995年 用ELISA间接法测得的TT,DT.DTP免疫豚鼠后的破伤风毒素水平,与用中和试验所得结果之间有很好的相关性。ELISA毒素结合抑制法测得的标抗、马抗TT血清、DTP免疫的豚鼠血清的抗毒素水平与中和毒素试验所得结果之间也有很好的相关性。ELISA方法简单、经济,结果可靠,适于检测破伤风抗毒素水平。 刘彩云 王淑芳 张振龙 陈晓龙关键词:破伤风抗毒素 ELISA 基因工程TNF菌种稳定性观察 被引量:4 1997年 对重组的pRL-hTNF/Jm103工程菌菌种按规程进行了50代传代,并进行了一系列检测,结果表明:我们目前所用的工程菌经50代传代后,用还原型SDS-PAGE电泳其表达量占菌体蛋白的7.8~8%,生物学活性为7.8×105-1.7×106IU/ml,与原代菌种基本一致。一般生物学性状如革兰氏染色及质粒内切酶图谱与原始菌种无变异。电镜检查经传代的工程菌与原始菌种形态一致,菌体内部结构相同,无支原体、病毒样颗粒及其它微生物污染。 许丽锋 刘德郁 张振龙 赵秀芬 王京玲 倪道明关键词:肿瘤坏死因子 基因工程 稳定性 抗rhTNF-α单克隆抗体F(ab′)_2片段的制备 1997年 采用胃酶消化抗rhTNF-αMcAb制备了其F(ab′)2片段。对胃酶消化的时间,酶/抗体的比例及片段回收率等条件做了比较。结果显示,胃酶在pH4.2于37℃消化18h,可制备出完整的F(ab′)2片段;非还原型SDS-PAGE发现,有90%以上的IgG被降解为F(ab′)2片段;S-200层析柱纯化F(ab′)2片段的回收率达45%;双抗体夹心竞争抑制ELISA法测定F(ab′)2片段的竞争抑制效价为2.6×107。中和L929细胞毒活性试验的结果表明,148ng的F(ab′)2片段可中和1个单位rhTNF-α的细胞毒作用。 汤燕文 邓宛明 张振龙关键词:单克隆抗体 抗破伤风类毒素单克隆抗体的研究 被引量:1 1996年 用精被类(TT)免疫的BALB/c小鼠牌细胞与小鼠骨髓癌SP2/O细胞融合,获得4株能分泌中和破伤风毒素的单克隆抗体细胞株.所分泌的单抗能识别不同的抗原表位。一种单抗在小鼠体内可中和0.1~0.4IU/ml破伤风毒素,2种、3种和4种单抗混和后分别可中和20、350和750IU/ml。 刘彩云 王淑芳 张振龙 陈晓龙关键词:破伤风 破伤风类毒素 单克隆抗体 不同形式金属硫蛋白异构体对小鼠免疫效果的观察 被引量:5 2000年 用MT_1和MT_2各三种形式,间隔2~3周免疫Balb/c小鼠3~4次,结果表明:偶联形式MT_1和MT_2抗血清效价分别达到和超过1:25600;单位形式MT_1和MT_2抗血清效价为1:6400和1:25600,而自聚体形式的MT_1和MT_2的免疫效价仅在1:60以下。 张亨山 赵金垣 刘彩云 王春荣 张振龙 仉道明 史德林 刘宏 马东星关键词:金属硫蛋白 异构体 免疫效价 抗金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 1997年 抗金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定张亨山②赵金垣张振龙③王春荣③刘采云③陈晓龙③刘宏马东星史德林③倪道明③黄文萱③(北京医科大学第三附属医院职业病研究中心,北京100083)金属硫蛋白(Metalothionein,MT)是一种广泛分布、富含巯基的金... 张亨山 赵金垣 张振龙 王春荣 张振龙 王春荣 王春荣 王春荣 史德林 陈晓龙 黄文萱关键词:单克隆抗体 抗脂多糖单克隆抗体特性及纯化的研究 1996年 用E.coli0111:B4死菌体及其脂多糖(LPS)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合获得6株稳定分泌抗LPS特异性单克隆抗体细胞株,其中一株为IgG2a类,5株为IgM类,轻链均为K型;染色体数目为90-98条;5株IgM类单克隆抗体识别5种不同的抗原表位;相对亲和力在10~8~10^(10)之间;1B12单抗经SephadexG-150纯化后,经还原性SDS-PAGE显示只有70KD的重键和25KD的轻链。 张琰平 崔春青 张振龙 陈晓龙关键词:脂多糖 单克隆抗体 提纯