张颖骞
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- TLR2信号在沙眼衣原体生殖道感染中介导了早期炎症细胞因子的产生被引量：5
- 2015年
- 目的探讨TLR2和TLR4在小鼠沙眼衣原体生殖道感染免疫应答中的作用。方法用沙眼衣原体小鼠肺炎株(Mo Pn,1×104IFUs)经生殖道感染野生型小鼠(WT,11只)、TLR2基因缺陷小鼠(TLR2 KO,14只)和TLR4基因缺陷小鼠(TLR4 KO,11只),复制生殖道沙眼衣原体感染模型。于感染后不同时间点取生殖道分泌物,部分用于免疫荧光法检测衣原体包涵体数量,部分用于炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平检测。在感染后第70天,处死小鼠,无菌分离腹腔巨噬细胞,于体外衣原体Mo Pn感染,培养24 h后,测定上清液中IL-1α、IL-6和MIP-2含量。细胞因子含量测定均采用ELISA法。结果 TLR2 KO或TLR4 KO小鼠与WT小鼠在每一个检测时间点下生殖道带菌量无差异,且带菌持续时间相同,截止到感染后第38天,3种基因型所有小鼠均清除了下生殖道感染的衣原体。TLR2基因缺失小鼠巨噬细胞产生的炎症细胞因子IL-1α、IL-6和MIP-2水平均明显低于野生型WT小鼠(P<0.01),而TLR4基因缺失小鼠巨噬细胞产生的3种炎症细胞因子水平均与野生型WT小鼠无差异(P>0.05);TLR2基因缺失小鼠棉拭子标本同样具有较低水平的炎症细胞因子(P<0.05)。结论在沙眼衣原体生殖道感染中,TLR2介导了早期炎症细胞因子的产生。沙眼衣原体诱导的早期免疫应答部分依赖于TLR2,而不依赖TLR4。
- 王振辉常晓彤郝敏宋桂芹侯丽娟张颖骞
- 关键词：沙眼衣原体TOLL样受体2TOLL样受体4生殖道感染
- IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染早期表达及与衣原体复制的关系被引量：2
- 2009年
- 目的探讨炎症性细胞因子IL-17在沙眼衣原体呼吸道感染中的早期表达及与衣原体复制的关系。方法128只小鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,实验组用4000包涵体形成单位(IFU)沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染小鼠,对照组则给予等量蔗糖磷酸盐缓冲液(SPG),分别在感染后0、1、1.5、2、3、4、8、12d处死小鼠,用免疫荧光检测(IFA)衣原体在肺组织中的生长情况,通过ELISA检测小鼠肺组织IL-17表达。24只小鼠分为3组,分别用160、800、4000IFUMoPn通过鼻腔感染小鼠,于感染后第2天测定肺组织中衣原体生长及IL-17表达。16只小鼠随机分为2组,用4000IFUMoPn通过鼻腔感染小鼠,实验组肌肉注射利福平和氯霉素,对照组则给予等量PBS,于感染后第2天测定肺组织中衣原体生长及IL-17表达。结果MoPn感染后第1天,肺组织有衣原体生长,于感染后第8天达高峰。感染后第2天,IL-17在小鼠肺组织中的表达达峰值,并很快下降。仅剂量为4000IFUMoPn感染小鼠2d后,肺组织中同时有衣原体生长和IL-17的表达。经抗生素处理后衣原体生长被抑制,同时也检测不到IL-17的表达。结论IL-17在衣原体呼吸道感染早期出现,其表达情况与衣原体感染剂量和早期复制有关。
- 张效云程建贞高丽芬张颖骞钟光明
- 关键词：沙眼衣原体IL-17呼吸道感染抗生素固有免疫
- 沙眼衣原体OmcBc基因的克隆、表达与抗原性研究被引量：4
- 2010年
- 目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达重组GST-OmcBc融合蛋白;收集120例Ct生殖道感染患者血清,以CtD血清型灭活的EB分别于皮下和腹腔免疫7只新西兰大白兔和5只Balb/C小鼠,以CtD血清型活的EB滴鼻感染9只Balb/C小鼠,分别收集这些动物免疫血清;间接免疫荧光法检测各血清中抗衣原体特异性抗体的效价;ELISA法检测重组GST-OmcBc融合蛋白与各免疫血清的反应性。结果成功构建了pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,经测序显示插入基因长度为852bp,编码284个氨基酸。IPTG成功诱导表达了重组GST-OmcBc融合蛋白,其分子质量约为57kDa;所制备和收集的各免疫血清均含高滴度抗衣原体特异性抗体;ELISA结果显示重组GST-OmcBc融合蛋白对各免疫血清均具有强的抗原性。结论 CtOmcBc是衣原体的一个免疫优势蛋白,重组GST-OmcBc融合蛋白的成功表达及其良好的抗原性为进一步开展衣原体感染早期诊断研究和疫苗的研发奠定了基础。
- 王洁张颖骞钟光明余平
- 关键词：沙眼衣原体抗原性
- 鼠抗沙眼衣原体Tarp蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 2010年
- 目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化,获得鼠抗沙眼衣原体血清型DTarp蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性,并应用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和衣原体种属特异性。结果成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白,其相对分子质量约为136kDa;成功地建立了7株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株;7株单克隆抗体均特异性的识别Tarp蛋白而不识别其他衣原体性蛋白;2株单克隆抗体(R5B6.2和R8G7.2)的免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余5株单克隆抗体(R4D5,R2H1.2,R12B12,R2H7和R5G8.1)的免疫球蛋白亚类均为IgG1;7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A、D、L2,而不识别MoPn、6BC和AR39。结论获得了特异性识别沙眼衣原体血清型DTarp蛋白的单克隆抗体,为Tarp蛋白的结构及生物学功能研究奠定了基础。
- 王洁张颖骞钟光明余平
- 关键词：沙眼衣原体TARP单克隆抗体
