徐春晓
- 作品数：11 被引量：6H指数：1
- 供职机构：山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金山东省自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 浅谈对无菌制剂GMP的理解
- 2009年
- 近年来,随着国家药监部门对《药品生产质量管理规范》(GMP)推行的日益重视和对GMP认证要求的日益严格,如何把握GMP精神、明确GMP的脉络对各医药企业提出了挑战。本文将GMP各项要求进行了高度概括和总结,将其概括为两个目的,即"1.防止污染与交叉污染,2.防止差错与混淆";并总结出GMP管理的两个特性,即"操作前有依据,操作后可追溯"。抓住这四点核心思想,有助于在GMP工作中灵活变通,事半功倍。
- 侯国升宋磊徐春晓潘显
- 关键词：GMP防污染可追溯性
- 腺病毒介导的SSAT表达引起大肠癌细胞周期阻滞于S期的分子机理研究
- 我们采用基因克隆技术构建了人类端粒酶(hTERT)启动子介导的表达人精脒/精胺 N1乙酰基转移酶 (spermidine/spermine N1-acetyltransferase,SSAT)的腺病毒载体(Ad-hTER...
- 刘斌刘贤锡孙慧王玮杨亚培徐春晓闫云飞辛佳璇
- 文献传递
- 泛素结合酶-10表达对结直肠癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨泛素结合酶-10(Ubiquitin-conjugating enzymes,UbcH10)表达对结直肠癌细胞增殖的影响。方法采用脂质体LipofectamineTM2000转染人UbcH10的真核表达载体pcDNA3.1-UbcH10及其对照载体pcDNA3.1至结直肠癌细胞LoVo,蛋白印迹(Western blot)技术分析UbcH10的表达;细胞增殖试验(CCK-8试剂)检测UbcH10表达对LoVo细胞增殖的影响;流式细胞术检测UbcH10表达对LoVo细胞周期的影响。结果 Westernblot分析证实,与对照组细胞相比,转染重组质粒的LoVo细胞中UbcH10表达明显升高;细胞生长增殖曲线显示,UbcH10过度表达的细胞生长明显快于对照组细胞。流式细胞术分析细胞周期结果显示:与对照组相比,UbcH10过度表达组细胞在G2-M期分布明显减少(P<0.05)。结论 UbcH10能促进结直肠癌细胞增殖,调控细胞周期进展可能是其潜在的作用机制。
- 陈世敏辛家璇徐春晓刘斌孙晓明胡成进刘贤锡
- 关键词：泛素结合酶细胞增殖细胞周期
- S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDCshRNA表达载体(pGPU6-SAMDC)转染乳腺癌MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western-blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验(CCK-8法)和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭活性的影响。结果SAMDCsh RNA表达载体转染后,MCF-7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8%,蛋白表达水平下降66.5%;MCF-7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。
- 辛佳璇陈世敏王伟阎云飞徐春晓刘斌刘贤锡
- 关键词：S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶RNA干扰基因治疗
- 人UbcH10及其siRNA真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建以人泛素结合酶UbcH10基因为基础的真核表达质粒pcDNA3.1(UbcH10)及其siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),并在结肠癌细胞LOVO中表达与鉴定。方法:提取组织总RNA,通过RT-PCR扩增出UbcH10基因,克隆到真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点中,构建UbcH10的真核表达载体。通过siRNA设计软件选取UbcH10基因的siRNA片段合成构建表达载体pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10)。然后采用脂质体转染法将其分别转染LOVO细胞,用RT-PCR在RNA水平和Western Blot在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。结果:测序结果显示克隆UbcH10基因片段序列完全正确;重组质粒转染LO-VO细胞后,检测到pcDNA3.1(UbcH10)转染组UbcH10表达增强,而pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10)转染组UbcH10表达减弱。结论:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(UbcH10)及其siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),并在真核细胞中能有效表达,为今后进一步研究UbcH10的功能和作用机制奠定了基础。
- 陈世敏徐春晓刘斌辛家璇刘贤锡
- 关键词：UBCH10真核表达SIRNA
- 腺病毒介导的SSAT表达抑制大肠癌细胞增殖作用的研究
- 我们采用基因克隆技术构建了人类端粒酶(hTERT)启动子介导的表达人精脒/精胺N1乙酰基转移酶(spermidine/spermine N~1-acetyltransferase,SSAT)的腺病毒载体,用来研究其对大肠...
- 刘斌刘贤锡孙慧王玮杨亚培徐春晓闫云飞辛佳璇
- 鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达与胃癌关系的研究
- 鸟氨酸脱羧酶是细胞内多胺生成的关键酶,多胺尤其是细胞内的多胺与癌细胞的增殖关系密切。本课题通过体内与体外实验来证明鸟氨酸脱羧酶与胃癌的关系。体内实验以胃癌病例的组织标本为研究对象,每个病例包括癌组织与癌旁组织。通过RT-...
- 阎云飞刘贤锡孙慧王玮杨亚培刘斌徐春晓辛佳璇
- 肿瘤抑素基因表达与肾癌关系以及鸟氨酸脱羧酶基因表达对肿瘤抑素表达调控作用的研究
- 肿瘤是一类常见病、多发病,其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一类疾病。在我国,随着人口老龄化,肿瘤的发病率和死亡率呈上升趋势。近年来,虽然肿瘤治疗已取得一些突破性进展,但由于肿瘤发病因素的多样性和肿瘤细胞的复杂性,肿...
- 徐春晓
- 关键词：肿瘤抑素鸟氨酸脱羧酶血管生成腐胺肾癌
- 文献传递
- 人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的克隆、表达和纯化
- 2008年
- 目的构建人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白。方法从大肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SSAT。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6His-tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序显示,人SSAT的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4中,而且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出20 kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6His-tag的融合蛋白,而且用Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论成功构建、表达和纯化了重组SSAT蛋白,为制备其抗体及研究该基因与结直肠肿瘤的关系提供了有力的工具。
- 孙慧龚磊刘斌杨亚培徐春晓刘贤锡
- 关键词：原核表达结直肠肿瘤
- S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的研究
- 目的探讨S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboylase,SAMDC)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表...
- 辛佳璇刘斌徐春晓刘贤锡
- 文献传递
