朱宏
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：山西农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目国家自然科学基金山西省青年科技研究基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 钙蛋白酶及其与疾病的关系被引量：6
- 2006年
- 钙蛋白酶(calpain)是一族钙离子依赖性的、水解半胱氨酸的蛋白酶。病理状态下,钙离子浓度异常增高可激活钙蛋白酶,使其对多种细胞骨架和蛋白质水解酶产生降解作用。在肌肉营养不良、白内障和老年性痴呆症等疾病中钙蛋白酶的活性都异常增强。
- 南庆贤常泓贾秀丽尹淑琴范艳梁娟朱宏
- 关键词：钙蛋白酶白内障老年性痴呆症
- 钙激活酶激活蛋白基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化被引量：3
- 2012年
- 构建钙激活酶激活蛋白基因(UK114)的原核表达载体并优化其表达条件,为其高效表达提供试验依据。以UK114 cDNA为模板,通过PCR方法扩增钙激活酶激活蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、菌体浓度、培养温度等来优化表达条件。结果显示,原核表达载体pGEX-4T-3-UK114成功构建,可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约40 kD的GST-UK114融合蛋白。在IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为32℃,诱导时间为4 h,菌体密度OD600为0.6的条件下,目的蛋白表达量最高。试验成功构建原核表达载体pGEX-4T-3-UK114且获高效表达,为研究UK114生物学活性及产品开发提供了试验基础。
- 尹淑琴常泓范艳朱宏梁娟
- 关键词：原核表达
- 褐马鸡养殖现状被引量：2
- 2006年
- 梁娟常泓朱宏范艳尹淑琴
- 关键词：褐马鸡养殖现状珍稀鸟类濒危物种保护动物鸡形目
- 重组UK114融合蛋白的表达纯化及免疫组化定位
- 2019年
- [目的]UK114(山羊肝脏肿瘤抗原)是钙蛋白酶系统的主要成分钙蛋白酶ⅠCAPN1/S1(μ-calpain)的激活蛋白,本研究旨在利用原核表达系统体外制备重组UK114蛋白,获得融合蛋白制备抗体,对其进行组织定位,为深入研究其功能提供蛋白水平的证据。[方法]将重组质粒pGEX-4T-3-UK114转化入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达、纯化,用凝血酶对GST-UK114融合蛋白进行酶切,制备抗UK114多克隆抗体,免疫组化分析重组UK114蛋白在组织中的分布情况。[结果]GST-UK114融合蛋白的分子量为40kD,酶切得到目标蛋白,其分子量为14kD;用UK114蛋白免疫家兔,得到了理想的高效价兔抗UK114多克隆抗血清,效价大于1∶125 000,抗血清经纯化得到兔抗UK114多克隆抗体,效价大于1∶25 000;Western blot分析结果显示,GST-UK114融合蛋白在约40kD处有一明显条带,融合蛋白酶切后在14kD附近出现一条带;免疫组织化学分析表明,免疫组化染色主要发生在细胞质中,山羊肝脏组织中肝小叶边缘区有肝细胞出现棕色的阳性着色,部分肝窦内皮细胞也有棕色的阳性着色。肾脏皮质中的肾小管上皮细胞有棕色的阳性着色出现,肾小球中没有出现着色。[结论]试验成功获得纯化后的重组UK114蛋白,制备的抗UK114抗体可以与正常山羊肝脏和肾脏组织中的UK114蛋白结合,为其后续分子伴侣特性以及抗肿瘤特性的研究提供一定的蛋白试验依据。
- 尹淑琴范艳朱宏梁娟常泓
- 关键词：多克隆抗体蛋白免疫印迹免疫组织化学定位
- UK114蛋白研究进展被引量：2
- 2008年
- UK114蛋白(山羊肝脏肿瘤抗原)是由恶性肿瘤产生的一种肿瘤抗原。近年来,对UK114蛋白的结构和功能进行一系列的研究,为探索肿瘤的诊断及治疗,细胞的分化,蛋白的折叠和肉类的加工等方面开辟新的途径。
- 朱宏常泓梁娟
- 关键词：肿瘤分子伴侣热休克蛋白
- 重组UK114工程菌的高密度发酵培养
- 2015年
- 为了鉴定重组UK114基因工程菌是否稳定表达,并进行初步的高细胞密度发酵试验。将重组基因工程菌BL21(DE3)/p GEX-4T-3-UK114进行菌种的传代培养并酶切检测;在保持菌种不变情况下,在5 L高密度发酵罐中,采用补料分批培养方法进行高密度发酵。结果表明,重组基因工程菌BL21(DE3)/p GEX-4T-3-UK114传代20代后质粒稳定存在,高密度发酵结束菌体浓度OD600大于50,融合蛋白量占菌体总蛋白量的31%,其含量达到2.1 g/L,工程菌获高效表达。
- 尹淑琴常泓范艳朱宏梁娟
- 关键词：高密度发酵GST融合蛋白
