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王鹤: 作品数：18 被引量：134H指数：6; 供职机构：辽宁省农业科学院更多>>; 发文基金：辽宁省博士科研启动基金辽宁省自然科学基金辽宁省“百千万人才工程”资助项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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辽棉19号转化耐盐基因AlNHX1的研究被引量：1: 2017年; 为提高辽宁棉花品种的耐盐性,利用农杆菌介导上胚轴外植体转化法,将来源于盐生植物獐茅的Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(AlNHX1)导入棉花辽棉19号中,分析影响棉花上胚轴外植体农杆菌转化的几个重要因素,建立并优化了该品种的转化体系,结果表明:1)农杆菌侵染的最佳时间为90s,共培养过程中乙酰丁香酮最适浓度为100 mg/L,筛选培养基中潮霉素最适浓度为30 mg/L,生根培养基中吲哚乙酸IBA的最适浓度为10mg/L;2)对转化植株进行PCR检测,表明耐盐基因AlNHX1已导入辽棉19号中;3)在盐胁迫下,转基因植株的电导率,渗透势都显著低于未转化植株。结果表明,通过筛选并优化转化体系,辽棉19号品种的耐盐性有较明显的提升,为沿海滩涂地区种植棉花提供了一定的参考。; 丰明王旭达王鹤张高华; 关键词：NA+/H+逆向转运蛋白农杆菌转化相对电导率

锌指蛋白基因ZAT12提高转基因高油酸花生抗寒性被引量：3: 2020年; 低温和冻害严重影响高油酸花生的产量和品质。为了提高高油酸花生的抗寒性,本研究利用农杆菌介导的转化方式将可以激活低温响应基因的锌指蛋白基因ZAT12导入高油酸花生。同时对影响高油酸花生转化的几种因素(植物生长素ZT和6-BA的使用浓度,侵染时间,烟草提取物添加量)进行改良优化。通过PCR和实时荧光定量PCR检测证明PnZAT12已经整合到高油酸花生基因组中。对转基因植株进行低温胁迫处理,分别测定其相对电导率(relative electrolytic leakage, REL)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)活性。结果表明,转基因花生的MDA含量和REL显著低于非转基因花生,而SOD活性明显高于非转基因花生。在表型比对方面,转基因花生的叶片黄化程度和植株枯萎程度远低于非转基因花生。结果证实,转基因花生比非转基因花生有更高的抗寒性。研究结果对抗逆基因的改良研究及高油酸花生的分子育种工作都具有重要的参考价值。; 王旭达张高华王鹤于树涛李怀梅王晓燕范琦; 关键词：农杆菌转化抗寒性

獐茅耐盐基因SOS1的克隆及序列分析被引量：6: 2012年; 采用RT-PCR和RLM-RACE方法从单子叶盐生植物獐茅(Aeluropus littoralis(Gouan)Parl)中克隆了质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(AlSOS1,JN936862),并对其基因序列进行了分析。Southern杂交试验显示:AlSOS1基因在獐茅基因组中以单拷贝形式存在。AlSOS1基因cDNA全长3 641bp,其中编码区3 420bp,编码一个1 139氨基酸的蛋白。AlSOS1编码蛋白与芦苇、水稻质膜Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系最为接近,达到82%和77%,与双子叶植物拟南芥的亲缘关系仅为58%;系统发育分析显示AlSOS1基因编码蛋白与其他植物质膜型Na+/H+逆向转运蛋白属于同一分支,而与液泡型Na+/H+逆向转运蛋白属于不同的分支;疏水性分析显示AlSOS1基因编码蛋白N-末端具有12个跨膜结构域,C-末端具有一个很长且面向质膜内腔的亲水尾部。这是獐茅SOS1基因编码区首次被完整克隆,将进一步应用于单子叶农作物耐盐性状改良的基因工程之中。; 王鹤张高华王旭达丰明李怀梅李树英; 关键词：獐茅耐盐基因 CDNA克隆

农杆菌介导马铃薯转化体系的优化及转基因马铃薯的耐盐性研究被引量：1: 2016年; 通过农杆菌介导的方式将獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(AlNHX)表达在马铃薯中,并对影响马铃薯转化的几种因素(抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间等)进行优化。结果表明:最适农杆菌菌液浓度是OD600=0.6,最适侵染时间是5min,最适共培养时间是2d,马铃薯转化中最适头孢霉素浓度是400mg/L;经PCR检测确认的转基因马铃薯植株在含0.7%NaCl的培养基中可以生长,而野生型马铃薯无法在此培养基中正常生长。在盐胁迫条件下,转基因马铃薯的Na^+、K^+含量及K^+/Na^+的比值均高于野生型马铃薯。研究证实马铃薯植物的的耐盐性可以通过农杆菌转化导入獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因而得到提高。; 王旭达丰明王鹤张高华; 关键词：马铃薯农杆菌转化耐盐性

利用分子标记技术检测玉米杂种纯度研究被引量：10: 2003年; 以 12份玉米自交系及其组配的 8个杂交种为材料 ,利用分子标记技术进行杂种纯度检测研究。采用RAPD标记方法 ,从 30 0个随机引物中 ,筛选确定了 8个杂交种种子纯度检测引物 ,制定了检测标准标记图谱。建立了海禾 3纯度分析的SCAR标记 ,该SCAR标记与RAPD标记在种子纯度检测上结果完全一致。; 赵姝华李玥莹王鹤李冬梅张俊涛; 关键词：分子标记技术玉米杂种纯度

樱桃锉叶病毒的初步鉴定和防治被引量：6: 2002年; 1997～2000年对大连地区凌水镇大山村樱桃品种资源园调查发现,锉叶病毒是该区樱桃树致病的主要原因。通过病毒的提纯、电镜观察和紫外分光光度计的检测,进一步确定该病毒为樱桃锉叶病毒。并探讨了樱桃锉叶病毒的防治。; 谭海东李树英赵姝华王鹤桑凤江; 关键词：提纯紫外分光度计

一种优化的、高效率的农杆菌介导的花生转化方法: 本发明涉及一种优化的、高效率的农杆菌介导的花生转化方法。本方法优化了花生再生芽的生成途径，省略了传统农杆菌侵染前的预培养过程，大大缩短了获得再生转化植株的周期。在侵染过程中通过烟草提取物的添加及对花生外植体的超声波处理提...; 王旭达于树涛张高华王鹤于国庆范琦都兴范; 文献传递

一种优化的、高效率的农杆菌介导的花生转化方法: 本发明涉及一种优化的、高效率的农杆菌介导的花生转化方法。本方法优化了花生再生芽的生成途径，省略了传统农杆菌侵染前的预培养过程，大大缩短了获得再生转化植株的周期。在侵染过程中通过烟草提取物的添加及对花生外植体的超声波处理提...; 王旭达于树涛张高华王鹤于国庆范琦都兴范

獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因AlNHX转化水稻的耐盐性研究被引量：2: 2012年; 为提高转基因植物的耐盐性,本研究利用农杆菌介导的方法将獐茅液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因AlNHX组成型表达在日本晴粳稻中。PCR鉴定结果表明,AlNHX基因已经整合到日本晴粳稻中,并在转录水平上表达。转AlNHX基因水稻的耐盐性明显提高。用NaCl经5d培养处理后,转基因水稻可以在含有0～200mmol/L NaCl的MS培养基中生长,而野生型水稻无法在含盐量超过150mmol/L NaCl的MS培养基中生长。; 王旭达丰明张高华王鹤李怀梅李树英; 关键词：水稻獐茅耐盐性农杆菌转化